简介：摘要目的观察双链RNA依赖的蛋白激酶（PKR）抑制剂2-氨基嘌呤（2-AP）对盲肠结扎穿刺（CLP）的脓毒症模型小鼠器官损伤血浆炎症因子表达及死亡率的影响。方法无特异病原体（SPF）级C57BL/6小鼠40只，随机分为假手术（Sham）组、CLP组、2-AP组和CLP+2-AP组（n=10）。术后24 h收集外周血血清，进行丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）及炎症因子（IL-1β、IL-10和TNF-α）的检测；取肺组织进行病理检测；取外周血和腹腔灌洗液进行细菌清除率检测。另外取60只C57BL/6小鼠，按照上述分组（n=15）进行7 d生存率观察。组间计量资料比较采用独立样本t检验。结果CLP组和CLP+2-AP组小鼠肝损伤指标（ALT和AST水平）和肾损伤指标（Cr和BUN）均较Sham组显著升高（均P<0.001）。CLP+2-AP组ALT和AST水平均显著低于CLP组（t=27.88、11.33，均P<0.001）；肾功能损伤指标方面，CLP+2-AP组Cr和BUN水平均较CLP组显著下降（t=11.02、7.15，均P<0.001）。与Sham组相比，CLP组血浆中促炎（IL-1β和TNF-α）及抑炎（IL-10）细胞因子水平均显著升高（均P<0.001）；CLP+2-AP组小鼠血浆IL-1β和IL-10水平均显著降低（均P<0.001），而血浆TNF-α水平下降不明显（P=0.33）。Sham组小鼠7 d生存率为100%，CLP+2-AP组为13.3%，2-AP组为86.7%，CLP+2-AP组为20.0%。抑制PKR活化可轻微改善CLP模型小鼠7 d生存率趋势（Mantel-Cox检验分析，χ2=0.0012，P=0.97）。结论在脓毒症小鼠模型中，抑制PKR活性可对降低血浆中炎症因子表达，减少血液和腹腔中细菌负荷，对器官损伤具有保护作用，提示抑制PKR活性在脓毒症治疗中具有应用潜力。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-214-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)(购自上海信裕生物技术有限公司)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法检测62例正常皮肤组织和62例皮肤瘢痕疙瘩患者miR-214-5p表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-214-5p(miR-214-5p组)、si-NC(si-NC组)、si-鼠双微体2基因(MDM2)(si-MDM2组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-214-5p(anti-miR-214-5p组)、miR-214-5p＋pcDNA3.1(miR-214-5p＋pcDNA3.1组)和miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2(miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2组)转染至KF细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-5p表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。采用t检验或单因素方差分析比较两组或多组间均数差异。结果与miR-NC组比较，miR-214-5p组KF细胞细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、吸光度(A450)值和B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)显著降低(分别为0.23±0.02比0.80±0.08、0.52±0.05比0.97±0.09、0.16±0.02比0.68±0.06，t＝20.737、13.695、24.661，P<0.05)，miR-214-5p、p21、bcl-2相关X蛋白(bax)和凋亡率显著升高[分别为0.51±0.05比0.14±0.01、0.95±0.09比0.27±0.02、0.79±0.08比0.14±0.04、(23.57±2.23)%比(8.16±0.85)%，t＝21.769、22.127、21.802、19.371，P<0.05]。与si-NC组比较，si-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450和bcl-2显著降低(分别为0.33±0.03比0.84±0.07、0.37±0.03比0.82±0.07、0.64±0.06比0.97±0.08、0.26±0.03比0.66±0.05，t＝14.621、12.328、7.926、6.112，P<0.05)，p21、bax和凋亡率显著升高[分别为0.73±0.07比0.26±0.03、0.61±0.06比0.13±0.05、(18.27±1.53)%比(8.23±0.95)%，t＝15.477、10.386、11.149，P<0.05]。与miR-214-5p＋pcDNA3.1组比较，miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450值和bcl-2显著升高(分别为0.57±0.06比0.23±0.02、0.50±0.05比0.22±0.03、0.73±0.07比0.51±0.05、0.48±0.05比0.17±0.02，t＝18.324、15.122、10.784、16.131，P<0.05)，p21、bax和凋亡率显著降低[分别为0.62±0.06比0.97±0.09、0.43±0.04比0.76±0.08、(12.37±1.24)%比(23.42±2.20)%，t＝9.123、13.244、18.024，P<0.05]。结论miR-214-5p可抑制KF细胞增殖并促进凋亡，其机制可能与靶向调控MDM2有关。

简介：无

简介：摘要目的探讨血清中微小RNA(miRNA，miR)-27b、胱抑素C(Cys C)和血肌酐(Cr)在肾癌患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2017年1月至2018年1月于徐州医科大学附属医院就诊的肾癌患者42例作为研究组，另外选取同期来我院进行体检的健康志愿者42例作为对照组，收集研究对象的一般基线特征，检测各研究对象血清中Cys C以及血Cr水平。分析miR-27b、Cys C、血Cr水平与肾癌严重程度的相关性，采用SPSS 21.0统计软件分析，通过受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-27b，Cys C和血Cr对肾癌的诊断效能。结果研究组和对照组在性别、年龄和体重指数上差异无统计学意义[实验组年龄(50.05±4.10)岁，对照组(49.50±3.20)岁，t＝－0.173，P>0.05]；实验组体重指数(19.9±1.9) kg/m2，对照组(19.4±2.2) kg/m2，t＝1.274，P>0.05)，差异有统计学意义。miRNA在肾癌患者血清中高表达(2.59±1.10，t＝36.880，P<0.05)，高表达miR-27b组肾癌患者具有更高的临床分期、血Cr水平、蛋白尿水平(χ2＝58.129、58.224、62.985，P<0.05)，差异均有统计学意义。表明miR-27b与肾癌严重程度有关。联合miR-27b与血Cr和Cys C在肾癌患者的临床诊断中具有极为优良的效能[曲线下面积(AUC)为0.904，灵敏度为85.7%，特异度为87.5%]。结论肾癌血清中miR-27b、Cys C和血Cr水平与肾癌临床预后明显相关，miR-27b参与了肾癌的发生。

简介：摘要目的探讨乳腺癌中长链非编码RNA（LncRNA）牛磺酸调节基因（TUG）1和miR-132表达情况及两者表达水平与患者预后的关系。方法收集2014年1月至2017年11月如皋市人民医院90例手术切除的乳腺癌组织和相应癌旁组织，采用qRT-PCR法检测TUG1和miR-132表达水平，使用Kaplan-Meier法计算TUG1和miR-132表达对乳腺癌患者生存率的影响，采用Cox回归模型分析乳腺癌预后的影响因素。结果与癌旁组织相比，乳腺癌组织中TUG1表达水平明显升高（t=65.781，P<0.001），miR-132表达水平显著下降（t=33.089，P<0.001），均与雌激素受体（ER）、人表皮生长因子受体2（HER-2）、FIGO分期、分化程度和淋巴结转移相关（均P<0.05）。乳腺癌组织中TUG1和miR-132表达之间呈负相关关系（r=-0.767，P=0.025）。TUG1高表达者3年生存率为80.77%（42/52），显著低于低表达者97.37%（37/38）（χ2=5.639，P=0.018）；miR-132低表达者3年生存率为81.25%（39/48），显著低于高表达者95.24%（40/42）（χ2=4.085，P=0.043）。Cox回归分析发现，ER、HER-2、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、TUG1和miR-132均是乳腺癌患者预后的影响因素（均P<0.05）。结论在乳腺癌组织中，TUG1表达水平显著上调，miR-132表达水平显著下调，且两者呈负相关，都是影响预后的独立因素。TUG1可能通过调控miR-132的表达发挥促癌基因的作用，有望成为乳腺癌独立预后标志物和治疗新靶点。

简介：摘要目的探究微小RNA(miRNA，miR)-143通过调控Kras的表达影响前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移的机制。方法选用购自美国典型培养物保藏中心细胞株PC-3，保持在补充有10%胎牛血清(Hyclone)的F-12培养基(Hyclone)中。细胞在5%CO2和37 ℃的湿润环境下生长。根据实验需求对细胞进行实验分组，随机分为PC-3转染组、PC-3对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒对细胞活力进行测定。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞中miR-143与Kras mRNA表达；通过蛋白质印迹反应检测各组细胞因子CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达情况。组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果RT-qPCR分析各组miR-143 mRA和Kras mRNA表达为：miR-143 mRNA PC-3对照组(1.06±0.02)较PC-3转染组(3.17±0.23)降低；Kras mRNA PC-3对照组(2.75±0.11)较PC-3转染组(1.23±0.03)升高，差异有统计学意义(t＝5.167，P<0.05)。蛋白印迹检测发现CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达PC-3对照组(2.67±0.11、3.18±0.23、2.84±0.26)较PC-3转染组(1.15±0.03、1.26±0.14、1.18±0.15)升高，差异有统计学意义(t＝4.862，P<0.05)。细胞活力检测发现PC-3对照组(1.62±0.14)较PC-3转染组(0.58±0.02)细胞活力值升高，差异有统计学意义(t＝4.154，P<0.05)。结论miR-143可通过抑制Kras的基因表达来控制前列腺PC-3的增殖及迁移状况，miR-143的高表达可有效抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-22-3p与真核翻译起始因子4E(eIF4E)的靶向关系，分析其对增殖的调控作用。方法选择人正常成骨细胞株NHOst、骨肉瘤细胞株U20S(购自中国科学院上海细胞生物学研究所)，应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞株中miR-22-3p的表达，采用双荧光素酶基因报告实验检测miR-22-3p与eIF4E结合情况。建立空白对照组、空载体转染组、miR-22-3p转染组、miR-22-3p和eIF4E共转染组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的活性，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达。采用定量聚合酶链反应(qPCR)法检测miR-22-3p在23例骨肉瘤组织中的表达，采用免疫组织化学方法检测骨肉瘤组织中eIF4E、细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达。组间定量资料的比较采用t检验、方差分析(SNK法进行两两比较)，对数据行Spearman相关分析及K-M生存分析。结果骨肉瘤细胞株中miR-22-3p的表达明显低于正常成骨细胞株；双荧光素酶基因报告实验发现miR-22-3p能引起转染pGL3-eIF4E-WT的细胞中荧光素酶活性降低。与空白对照组及空载体转染组比较，miR-22-3p转染组细胞活性明显下降，PCNA和Cyclin D1的表达显著下降，miR-22-3p和eIF4E共转染组均能逆转上述表达水平。骨肉瘤组织中miR-22-3p表达范围是0.6～3.6，平均1.9±0.2，miR-22-3p与eIF4E、miR-22-3p与Ki-67均呈负相关(r＝－0.510、－0.530，P<0.05)，eIF4E与Ki-67呈正相关(r＝0.500, P<0.05)。miR-22-3p在不同肿物最大径、病变分级的分组中差异有统计学意义(P<0.05)，miR-22-3p与生存时间明显相关。结论miR-22-3p在骨肉瘤中低表达，靶向负调控eIF4E的表达，调节细胞的增殖。miR-22-3p可能是肿瘤进展及预后不良的危险因素。

简介：摘要目的探讨微RNA（miR）-19b-3p对胰腺癌PANC-1细胞原癌基因鼠双微体4（MDM4）表达和细胞增殖、凋亡活性的影响。方法采用脂质体转染法转染micrONrno-miR-19b-3p mimic（拟似组）、micrOFF mmu-miR-19b-3p inhibitor（阻遏组）和Lipofectamine 2000转染试剂（阴性组）至人胰腺癌PANC-1细胞，并以未特殊处理正常生长的PANC-1细胞作为空白组，采用荧光显微镜观察各组细胞转染是否成功，使用荧光实时定量PCR法检测微RNA-19b-3p转录水平以判断转染效率。转染24、48、72 h采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用荧光实时定量PCR法检测细胞内微RNA-19b-3p、MDM4含量，转染72 h采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后PANC-1细胞凋亡情况。转染72 h采用免疫印迹法检测各组PANC-1细胞MDM4蛋白表达水平。结果转染后48 h 4组均有明显绿色荧光，微RNA-19b-3p转染PANC-1细胞转染效率为72.1%。转染24、48、72 h时拟似组PANC-1细胞增殖活性、微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平都高于空白组、阴性组和阻遏组（均P<0.05），阻遏组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平低于空白组、阴性组和拟似组（均P<0.05），空白组和阴性组细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平差异无统计学意义（均P>0.05）。空白组、阴性组、拟似组和阻遏组4组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达均与时间呈现正相关（细胞增殖活性r=0.629、0.582、0.524、0.472，微RNA-19b-3p mRNA表达水平r=0.449、0.475、0.501、0.399，FL-MDM4表达水平r=0.504、0.423、0.447、0.431，S-MDM4表达水平r=0.472、0.428、0.414、0.408，均P<0.05）。转染72 h时拟似组细胞凋亡水平低于空白组、阴性组、阻遏组[（2.02±0.48）%比（3.48±0.63）%、（3.52±0.52）%、（8.23±0.82）%，均P<0.05]，阻遏组细胞凋亡水平高于空白组、阴性组和拟似组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。转染72 h拟似组MDM4蛋白表达水平高于空白组、阴性组和阻遏组[（1.162±0.114）比（0.749±0.126）、（0.663±0.137）、（0.347±0.092），均P<0.05]，阻遏组MDM4蛋白表达水平低于空白组和阴性组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论微RNA-19b-3p可能通过影响MDM4表达，进而影响p53基因活性，促进胰腺癌的增殖，微RNA-19b-3p可能成为治疗胰腺癌新的靶点。

简介：【摘要】目的 研究分析微小 RNA-365和靶向 E74样受体 4在宫颈癌细胞的增殖以及临床意义。方法 以 2018年 1月 ~2019年 12月我收录的总计 103例进行宫颈活检并进行手术治疗的患者为对象，对患者治疗后的正常宫颈组织、宫颈上皮瘤变组织、宫颈鳞癌组织以及宫颈癌细胞中的 miR-365的表达情况进行检测，并对 ELF4的表达情况以及变化进行检测，分析 miR-365与 ELF4在宫颈癌细胞中的临床关系。结果 miR-365与 ELF4 mRNA在正常宫颈组织、宫颈上皮瘤变 I级、宫颈上皮瘤变 II级和 III级、宫颈鳞癌中的表达分析发现， miR 365与 ELF4 mRNA在正常宫颈组织组与宫颈上皮瘤变 I级中表达无相关性，而在宫颈上皮瘤变 II级、 III级与宫颈鳞癌中表达呈负相关，同时研究表明肿瘤大小、肿瘤分级等与 miR-365以及 ELF4 mRNA的表达水平有关。结论 通过激活 miR-365或者抑制 ELF4的方式，可作为治疗宫颈癌的有效手段，可作为该病进一步治疗研发的临床基础。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-221对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取2015年6月到2018年9月期间南阳市中心医院和河南中医药大学第一附属医院手术切除的脑胶质瘤和相应的癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-221的表达水平。在脑胶质瘤细胞株U251建立miR-221沉默细胞株(miR-221沉默组)和对照细胞株(miR-control组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色测定miR-control组和miR-221沉默组细胞的增殖能力。体外移植瘤实验测定两组细胞在裸鼠体内的生长速度。采用凋亡检测试剂盒测定两组细胞的凋亡水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-221的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.21±0.16)比较，脑胶质瘤组织中miR-221表达水平(3.01±0.19)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.991，P<0.05)。与miR-control组细胞(1.89±0.22)比较，miR-221沉默组细胞增殖能力(1.16±0.18)明显下降，差异有统计学意义(F＝2.618，P<0.05)。与miR-control组细胞EdU染色阳性率(56.33±9.18)%比较，miR-221沉默组细胞EdU染色阳性率(22.12±7.10)%显著下降，差异有统计学意义(F＝2.418，P<0.05)。miR-control组细胞在裸鼠体内生长速度明显高于miR-221沉默组细胞，差异有统计学意义(F＝2.011，P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(3.17±0.78)%比较，miR-221沉默组细胞凋亡水平(21.33±3.09)%明显增加，差异有统计学意义(t＝3.712，P<0.05)。生物信息学分析显示凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)是miR-221的靶基因。与miR-control组(0.78±0.13)比较，miR-221沉默组细胞APAF1蛋白表达水平(2.39±4.91)显著增加，差异有统计学意义(t＝3.991，P<0.05)。结论miR-221通过靶向凋亡激活蛋白APAF1，调节脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡。

简介：AbstractBackground:Non-coding RNAs have attracted considerable attention for their vital role in cancer. The purpose of this study was to determine the effects of non-coding RNAs on hepatocellular carcinoma (HCC) and reveal their regulatory mechanism in the pathophysiological process.Methods:We measured the expression of mucin 1 (MUC1) and miR-485-5p in tissues from 15 HCC patients and in liver cancer cell lines by quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blot, screened for aberrantly expressed microRNAs (miRNAs) by miRNA microarrays. Bioinformatics tools were used to find the miRNA and circular RNA that regulated MUC1, which were validated by RNA immunoprecipitation assay and luciferase reporter assay. Cell counting kit-8, Transwell assays, and flow cytometry were used to conduct functional experiments. Proteins were examined by western blot and immunohistochemical staining assays. Significant differences between groups were estimated using the one-way analysis of variance. A P < 0.05 was considered statistically significant.Results:MUC1 was overexpressed in HCC tissues compared with that in paratumor tissues (normal vs. tumor, 1.007 ± 0.215 vs. 75.213 ± 18.403, t = 18.401, P < 0.001) while miR-485-5p was down-regulated (normal vs. tumor, 4.894 ± 0.684 vs. 1.586 ± 0.398, t= 16.191, P < 0.001). Inhibition of miR-485-5p promoted cell proliferation (73.33% ± 5.13% vs. 41.33% ± 3.51%, t= 8.913, P < 0.001), migration (102 ± 8 cells vs. 46 ± 8 cells, t= 8.681, P < 0.001), invasion (59 ± 7 cells vs. 28 ± 2 cells, t = 8.034, P < 0.01), and suppressed apoptosis (22.64% ± 6.97% vs. 36.33% ± 3.96%, t = 2.958, P < 0.05) of HepG2 cells with which MUC1 is knocked down. Mechanically, miR-485-5p binds to MUC1, while circHECTD1 binds to miR-485-5p, resulting in the indirect up-regulation of the MUC1 level.Conclusions:Our findings reveal that circHECTD1 facilitates HCC progression by sponging miR-485-5p to up-regulate MUC1.

简介：摘要目的基于16S核糖体RNA(rRNA)高通量测序分析特重度烧伤患者肠道菌群的动态变化规律。方法本前瞻性观察性研究纳入2017年2—6月中国科学院大学宁波华美医院收治的符合入选标准的5例男性特重度烧伤患者(年龄32～48岁)，采集其休克期(伤后3 d内)、急性感染早期(伤后4～14 d)、急性感染中期(伤后15～28 d)、急性感染后期(伤后29 d至出院前1周)及出院前1周内的粪便样本，各时期样本数均为5。使用pH计测定粪便样本的pH值，高通量测序技术对粪便样本的16S rRNA V3、V4区进行测序。QIIME分析软件分析肠道菌群操作分类单元(OTU)数目、α多样性(Chao1指数、Shannon指数)和门、科的相对丰度，非加权组平均法聚类分析肠道菌群β多样性，Tax4Fun预测肠道菌群功能变化。对数据行单因素重复测量方差分析、Bonferroni法、配对样本Wilcoxon秩和检验及Bonferroni校正。结果(1)本组特重度烧伤患者急性感染早、中期粪便pH值分别为7.40±0.45、7.56±0.45，明显高于休克期的6.68±0.36(P<0.05或P<0.01)。(2)共获得2 333 584条有效高质量序列，序列长度为415 bp左右，共获得1 209个OTU，所有标本测序覆盖度均达99.0%以上。本组特重度烧伤患者急性感染早、中、后期OTU数目、Chao1指数明显低于休克期(Z值均为2.023，P<0.05)；出院前1周内OTU数目、Chao1指数明显高于急性感染早、中、后期，Shannon指数明显高于急性感染早、中期(Z值均为2.023，P<0.05)。(3)本组特重度烧伤患者休克期样本菌群结构与出院前1周内相似度高，与急性感染早、中、后期相似度低。各个单独样本的分析显示，大部分样本聚类规律与分期样本一致。休克期肠道菌群加权Unifrac距离明显短于急性感染早、中、后期(Z＝3.326、2.570、2.690，P<0.05或P<0.01)，其他时期肠道菌群加权Unifrac距离相近。(4)门水平上，与休克期比较，急性感染早、中、后期厚壁菌门细菌相对丰度降低，变形菌门和拟杆菌门细菌相对丰度升高；上述3个菌门细菌相对丰度在出院前1周内与休克期相近。伤后不同时期科水平上相对丰度前5的优势菌有较大差异，休克期的前5优势科细菌相对丰度在急性感染早、中、后期降低。休克期的非优势科如肠杆菌科、链球菌科、拟杆菌科细菌相对丰度在急性感染早、中、后期大幅升高，成为这些时期新的优势科；出院前1周内部分产酸菌科细菌相对丰度恢复至接近休克期水平。(5)急性感染早、中期肠道菌群的某些氨基酸代谢、糖酵解和糖异生、丙酮酸代谢等功能较休克期减弱，急性感染后期肠道菌群某些氨基酸和糖类代谢较休克期增强，休克期与出院前1周内肠道菌群功能基因分布相似。结论特重度烧伤患者肠道内环境及菌群结构在急性感染早、中期发生了明显变化，pH值升高，菌群种类及多样性减少，尤其是产酸菌科细菌的相对丰度明显降低，但随着患者治疗结束而恢复。可考虑将粪便pH值和肠道变形菌门及产酸菌科细菌变化作为反映特重度烧伤患者肠道菌群紊乱水平的指标。

简介：摘要目的探讨微小RNA（miR）-21、miR-29a和D-二聚体对心肌缺血再灌注的诊断价值。方法回顾性分析浙江省乐清市人民医院2017年5月至2018年10月80例心肌缺血再灌注患者（缺血再灌注组）和80例行冠状动脉造影检查未发现冠状动脉狭窄病变患者（对照组）。缺血再灌注组患者均采用经皮冠状动脉介入疗法（PCI）治疗。缺血再灌注组于术前、术后1 d、术后5 d，对照组于入院当天，检测miR-21，miR-29a、D-二聚体、心肌肌钙蛋白（cTn）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）和N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平。结果对照组miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP分别为0.14 ± 0.03、0.19 ± 0.07、（123.2 ± 23.1）μg/L、（0.02 ± 0.01）μg/L、（0.65 ± 0.23）mg/L和（160 ± 78）ng/L；缺血再灌注组术前分别为0.36 ± 0.08、0.30 ± 0.05、（812.2 ± 95.7）μg/L、（0.48 ± 0.07）μg/L、（5.36 ± 2.67）mg/L和（853 ± 462）ng/L，术后1 d分别为0.31 ± 0.07、0.26 ± 0.04、（685.0 ± 29.3）μg/L、（0.41 ± 0.09）μg/L、（4.28 ± 1.59）mg/L和（560 ± 256）ng/L，术后5 d分别为0.22 ± 0.03、0.20 ± 0.04、（216.0 ± 27.6）μg/L、（0.30 ± 0.06）μg/L、（2.36 ± 0.78）mg/L和（382 ± 136）ng/L。缺血再灌注组术前及术后1、5 d miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；在缺血再灌注组中，术后1和5 d各指标均明显低于术前，术后5 d明显低于术后1 d，差异有统计学意义（P<0.05）。结论miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP与患者临床心肌缺血再灌注状态密切相关。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-223-3p靶向叉头框转录因子1(FoxO1)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常乳腺细胞HBL-100(购自中国医学科学院细胞库)和乳腺癌细胞MCF-7(购自中国科学院细胞库)细胞中miR-223-3p的表达；采用脂质体转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒于MCF-7细胞。采用荧光定量PCR检测转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒的细胞中miR-223-3p表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞细胞增殖。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)法检测不同处理的细胞凋亡率。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-223-3p的靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-223-3p靶基因蛋白质表达。组间数据比较采用t检验。结果与正常乳腺细胞miR-223-3p表达水平(1.09±0.14)比较，乳腺癌MCF-7细胞mRNA-223-3p表达水平(2.37±0.19)显著增加，差异有统计学意义(t＝3.281，P<0.05)。转染72 h，转染miR-223-3p模拟物的细胞miR-223-3p表达水平(2.89±0.20)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.619，P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞miR-223-3p表达水平(0.33±0.12)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著下降，差异有统计学意义(t＝3.111，P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞增殖能力(1.09±0.20)较转染对照质粒的细胞增殖能力(1.94±0.27)明显下降，差异有统计学意义(t＝2.891，P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞凋亡率[(32.69±5.81)%]较转染对照质粒的细胞凋亡率[(5.04±1.47)%]明显增加，差异有统计学意义(t＝3.001，P<0.05)。FoxO1是miR-223-3p的靶基因。转染miR-223-3p抑制剂的细胞FoxO1蛋白表达水平(2.60±0.22)较转染对照质粒的细胞(0.58±0.19)明显升高，差异有统计学意义(t＝3.185，P<0.05)。结论miR-223通过靶向FoxO1蛋白调控着乳腺癌细胞的增殖和凋亡。

简介：摘要目的分析脓毒症患者外周血淋巴细胞中微小RNA-126（miR-126）的表达与凋亡及预后的关系，探讨其可能的潜在调控机制。方法选择2019年1月至12月在蚌埠医学院第一附属医院重症监护病房（ICU）住院治疗的30例一般感染患者和20例脓毒症患者。取外周血分离淋巴细胞，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测miR-126和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达量，同时测定肝肾功能等实验室指标，并计算序贯器官衰竭评分（SOFA）和急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ），观察28 d预后。用Pearson法分析miR-126与caspase-3、APACHEⅡ评分的相关性；用受试者工作特征曲线（ROC）分析miR-126对预后的预测价值；同时根据miR-126预测预后的最佳截断值将患者分为两组，绘制患者28 d Kaplan-Meier生存曲线。结果与一般感染组比较，脓毒症组患者外周血淋巴细胞中miR-126表达量显著降低〔miR-126 mRNA（2-ΔCt）：1.239±0.134比1.599±0.110，P<0.01〕，caspase-3表达量和APACHEⅡ评分明显升高〔caspase-3 mRNA（2-ΔCt）：1.172±0.132比0.901±0.143，APACHEⅡ（分）：19.75±3.74比12.63±3.94，均P<0.01〕。Pearson相关分析显示，感染患者淋巴细胞中miR-126表达量与caspase-3表达量（r＝-0.678，P<0.001）、APACHEⅡ评分（r＝-0.581，P<0.001）均呈显著负相关。ROC曲线分析显示，外周血淋巴细胞miR-126表达量预测患者预后的ROC曲线下面积（AUC）为0.823（P<0.001），最佳截断值为1.395时，敏感度为75.0%，特异度为71.4%，阳性预测值为81.1%，阴性预测值为63.6%，阳性似然比为2.622，阴性似然比为0.350。此外，以miR-126最佳截断值分为高miR-126组（miR-126>1.395，31例）和低miR-126组（miR-126≤1.395，19例），Kaplan-Meier生存曲线分析显示，高miR-126组28 d累积生存率高于低miR-126组（Log-Rank：χ2＝11.702，P＝0.001）。结论脓毒症患者外周血淋巴细胞中miR-126可能通过促进淋巴细胞凋亡增加来影响免疫状态，其表达量高低能够反映脓毒症患者严重程度及预后。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响，明确lncRNA XIST与miR-101/zeste基因增强子同源物2(EZH2)的靶向关系。方法收集2010年7月至2018年9月间浙江省嘉兴市第一医院行手术切除并经病理学确诊的90例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织；选取PANC1细胞将其分为sh-XIST组、sh-control组、miR-control组和miR-101组。采用荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各组PANC1细胞lncRNA XIST、miR-101的表达，分析lncRNA XIST和miR-101的表达与肿瘤临床病理参数的关系。采用CCK-8法和Transwell小室检测各组PANC1细胞的增殖和迁移能力，蛋白质免疫印迹法检测各组PANC1细胞的EZH2表达水平。将各组PANC1细胞以3×106个/100 μl密度分别接种于Balb/c裸鼠，检测种植瘤体积。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA XIST与miR-101及其下游靶基因EZH2的关系。结果与癌旁组织比，胰腺癌组织lncRNA XIST表达量显著上调(2.89±0.42比1.12±0.22，P<0.05)，miR-101水平显著下调(0.32±0.12比1.25±0.22)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。胰腺癌的分化程度越高、TNM分期越高、淋巴结转移的癌组织lncRNA XIST水平显著升高，miR-101水平显著降低。sh-XIST组PANC1细胞lncRNA XIST表达水平较sh-control组显著下调(0.34±0.18比1.21±0.27)，miR-101组PANC1细胞miR-101表达水平较miR-control组显著上调(2.94±0.31比1.54±0.29)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。培养72 h的sh-control组、sh-XIST组、miR-control组和miR-101组450 nm处吸光度值(A450值)分别为1.98±0.24、1.21±0.20、1.87±0.21、1.11±0.17，穿膜细胞数分别为(74.25±6.79)、(29.11±5.17)、(61.27±5.19)、(20.47±4.58)个细胞/200倍视野，sh-XIST组较sh-control组、miR-101组较miR-control组细胞增殖活力和迁移能力均显著下降，种植瘤生长明显缓慢，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论lncRNA XIST可靶向结合miR-101/EZH2调节胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力，促进胰腺癌的发生和发展。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3p NC组，脂质体Lipofectamine™3000将miR-148a-3p inhibitor和miR-148a-3p NC转入胶质瘤细胞中，Real-time PCR检测miR-148a-3p表达，水溶性四唑蓝(WST)法检测细胞活力，Tanswell实验检测细胞迁移及侵袭能力，Real-time PCR法及蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CUL5蛋白及mRNA表达，并进行荧光素酶报告基因分析。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-148a-3p inhibitor组(0.31±0.03)中miR-148a-3p表达量低于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.479，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.375±0.037)细胞活力低于miR-148a-3p NC组(0.525±0.051，t＝4.587，P<0.05)；miR-148a-3p inhibitor组细胞克隆数目[(43.52±4.25)个]少于miR-148a-3p NC组[(148.79±14.88)个](t＝5.147，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(38.47±3.85)个]细胞迁移数目少于miR-148a-3p NC组[(185.59±18.56)个](t＝5.589，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(41.79±4.18)个]细胞侵袭数目少于miR-148a-3p NC组[(195.69±19.58)个](t＝6.482，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor＋ CUL野生型质粒的荧光强度(0.55±0.05)低于miR-148a-3p inhibitor＋CUL5突变型(1.01±0.10)、miR-148a-3p NC＋CUL5野生型(1.02±0.10)/突变型(1.03±0.10)。miR-148a-3p inhibitor组(1.89±0.18)中CUL5 mRNA表达量高于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.579，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.42±0.04)中CUL5蛋白表达量高于miR-148a-3p NC组(1.43±0.14，t＝5.894，P<0.05)。结论下调miR-148a-3p表达进而促进CUL5表达，最终抑制U251胶质瘤细胞增殖与侵袭。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-146-5p靶向钙调磷酸酶调节蛋白1(RCAN1)对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响。方法选取2015年6月至2019年6月河南省人民医院收集的89例非小细胞肺癌和癌旁组织样本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析非小细胞肺癌组织和癌旁组织miR-146-5p表达水平；在非小细胞肺癌A549胞系中采用慢病毒建立对照miRNA和miR-146-5p敲降细胞株(miR-control组和miR-146-5p KD组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力，采用流式细胞术分析两组细胞凋亡水平；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-146-5p靶基因，并分析靶基因对非小细胞肺癌增殖的影响。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织miR-146-5p表达水平(1.02±0.19)比较，非小细胞肺癌组织中miR-146-5p表达水平(3.16±0.30)显著上调，差异有统计学意义(t＝3.910，P<0.05)。与miR-control组细胞比较，miR-146-5p KD组细胞增殖显著下降，差异有统计学意义(F＝3.013，P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(4.30±0.98)%比较，miR-146-5p KD组细胞凋亡水平(29.65±5.01)%显著增加，差异有统计学意义(t＝5.011，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶基因证实RCAN1是miR-146-5p的靶基因。在miR-control组中，过表达RCAN1蛋白后细胞增殖能力明显低于空载体的细胞，差异有统计学意义(F＝3.029，P<0.05)，而在miR-146-5p KD组细胞中过表达RCAN1蛋白后细胞增殖能力低于空载体的细胞，差异有统计学意义(F＝3.091，P<0.05)。结论miR-146-5p在非小细胞肺癌中呈高表达，导致抑癌基因RCAN1表达显著下调，促进非小细胞肺癌的进展。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLG1反义RNA 1(DLG1-AS1)对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在分子机制。方法2019年7月至2020年3月，结直肠癌细胞(SW620、Caco-2、SW480)和正常结肠上皮细胞(NCM460)购自美国模式培养物保藏中心。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DLG1-AS1和微小RNA(miRNA，miR)-1305表达在结直肠癌细胞(SW620、Caco-2、SW480)和正常结肠上皮细胞(NCM460)中的表达。将DLG1-AS1小干扰RNA、miR-1305模拟物分别转染SW620细胞，细胞计数试剂盒、流式细胞术分别检测干扰DLG1-AS1或过表达miR-1305对SW620细胞活力、凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定DLG1-AS1对miR-1305的靶向调控作用。采用t检验评估两组之间的差异，采用单因素方差分析和LSD-t检验比较多组间的差异。结果与NCM460细胞比较，SW620、Caco-2、SW480细胞中DLG1-AS1表达显著升高(3.68±0.24比1.00±0.05，1.93±0.18比1.00±0.05，2.62±0.21比1.00±0.05，t＝32.796、14.935、22.514，P<0.05)，miR-1305表达显著降低(0.42±0.04比1.00±0.07，0.57±0.05比1.00±0.07，0.36±0.03比1.00±0.07，t＝21.582、14.996、25.211，P<0.05)。干扰DLG1-AS1表达后SW620细胞活力显著降低(0.51±0.04比0.99±0.06，t＝19.969，P<0.05)，细胞凋亡率显著升高(23.11±2.33比7.49±0.69，t＝19.284，P<0.05)。过表达miR-1305后SW620细胞活力显著降低(0.63±0.06比0.97±0.05，t＝13.060，P<0.05)，细胞凋亡率显著升高(17.99±1.60比7.78±0.72，t＝17.458，P<0.05)。miR-1305是DLG1-AS1的靶基因，DLG1-AS1负调控miR-1305表达。抑制miR-1305表达能够逆转干扰DLG1-AS1对SW620细胞活力(0.87±0.07比0.49±0.03，t＝14.969，P<0.05)、凋亡(13.63±1.22比24.16±2.49，t＝11.393，P<0.05)的影响。结论干扰DLG1-AS1通过上调miR-1305可抑制结直肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨肿瘤抑制因子微小RNA(miRNA，miR)-149-5p对肾癌细胞转移潜能的影响及机制。方法GRC-1细胞分成miR-149-5p组(转染miR-149-5p mimics)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-149-5p＋丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1-SRPK1)、miR-149-5p＋vector组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p水平，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力变化，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平。利用在线靶基因预测软件发现SRPK1可能是miR-149-5p的靶基因，双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。应用SPSS 21.0统计软件分析。结果miR-149-5p组的GRC-1细胞中miR-149-5p(2.69±0.27比1.01±0.08)和E-cadherin(0.81±0.09比0.42±0.05)水平显著高于miR-NC组，侵袭数目[(70.81±6.35)个比(110.64±9.67)个] 、迁移数目[(108.46±9.27)个比(162.76±12.71)个]、N-cadherin(0.46±0.05比0.79±0.11)和SRPK1(0.45±0.06比0.92±0.08)蛋白水平显著低于miR-NC组，差异均有统计学意义(FmiR-149-5p＝95.385，F侵袭数目＝20.216，F迁移数目＝22.010，FN-cadherin＝15.100，FE-cadherin＝31.331，FSRPK1＝31.785，P<0.05)。共转染SRPK1野生型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.37±0.04比1.00±0.11)显著低于miR-NC组，差异有统计学意义(t＝16.150，P<0.05)。共转染SRPK1突变型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.99±0.10比1.00±0.09)与miR-NC组比较差异无统计学意义(t＝0.220，P>0.05)。miR-149-5p＋SRPK1组的GRC-1细胞中E-cadherin(0.45±0.04比0.80±0.08)水平显著低于miR-149-5p＋vector组，侵袭数目[(99.51±7.48)个比(71.84±5.37)个]、迁移数目[(145.06±11.14)个比(107.63±10.20)个]、N-cadherin(0.86±0.10比0.47±0.04)和SRPK1(0.89±0.06比0.50±0.07)蛋白水平显著高于miR-149-5p＋vector组，差异均有统计学意义(tSRPK1＝7.327，t侵袭数目＝5.205，t迁移数目＝4.292，tN-cadherin＝6.272，tE-cadherin＝6.778，P<0.05)。结论肿瘤抑制因子miR-149-5p靶向负调控SRPK1表达降低肾癌细胞的迁移和侵袭能力。