简介:摘要目的探讨老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-24(miR-24)和微小RNA-29b(miR-29b)表达水平及其对神经功能预后的预测价值。方法采用前瞻性研究方法,选择2017年1月1日至2019年3月31日儋州市人民医院神经内科收治的170例老年AIS患者。根据改良Rankin量表(mRS)评分将患者分为神经功能预后良好组(mRS评分≤2分,105例)和预后不良组(mRS评分>2分,65例);根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻度组(NIHSS评分<5分,50例)、中度组(NIHSS评分5~20分,76例)、重度组(NIHSS评分>20分,44例)。选择同期本院65例体检正常者作为健康对照组。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-24、miR-29b表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清miR-24、miR-29b表达水平对老年AIS患者神经功能预后不良的预测价值;采用Pearson相关法分析老年AIS患者血清miR-24、miR-29b表达水平与NIHSS、mRS评分的相关性。结果AIS组患者血清miR-24、miR-29b表达均明显低于健康对照组〔miR-24(2-ΔΔCt):0.64±0.17比2.18±0.85,miR-29b(2-ΔΔCt):0.72±0.21比3.05±0.96,均P<0.01〕。预后不良组患者血清miR-24、miR-29b表达均明显低于预后良好组〔miR-24(2-ΔΔCt):0.20±0.05比1.16±0.48,miR-29b(2-ΔΔCt):0.18±0.03比1.41±0.56,均P<0.01〕。重度组患者血清miR-24、miR-29b表达明显低于轻度组和中度组〔miR-24(2-ΔΔCt):0.13±0.02比1.30±0.51、0.56±0.14,miR-29b(2-ΔΔCt):0.09±0.01比1.52±0.60、0.62±0.13,均P<0.01〕,且中度组表达水平明显低于轻度组(均P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清miR-24、miR-29b表达水平预测老年AIS患者神经功能预后不良的最佳截断值分别为0.53、0.48,二者联合预测的ROC曲线下面积(AUC)为0.920〔95%可信区间(95%CI)为0.861~0.982〕,明显大于miR-24(AUC为0.802,95%CI为0.742~0.860)或者miR-29b(AUC为0.835,95%CI为0.778~0.890)单独预测(Z值分别为6.513、4.902,均P<0.05),其敏感度、特异度分别为92.0%和85.7%。Pearson相关分析显示,老年AIS患者血清miR-24、miR-29b表达水平与NIHSS评分(r值分别为-0.758、-0.794)、mRS评分(r值分别为-0.817、-0.860)均呈显著负相关(均P<0.01)。结论血清miR-24、miR-29b表达水平与老年AIS患者神经功能缺损程度及神经功能预后相关,二者联合检测对老年AIS患者神经功能预后具有一定预测价值。
简介:摘要目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因(TUG1)靶向作用于微小RNA(microRNA,miR)-145/锌指E-盒结合同源异形盒-1 (ZEB1)对细胞侵袭能力的影响。方法实验标本选自2018年4月至2019年12月间河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收集的甲状腺乳头状癌及癌旁标本共30例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法观察乳头状甲状腺癌及其癌旁组织中lncRNA TUG1及miR-145的表达水平;将lncRNA TUG1 shRNA和miR-145 mimics分别转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中,利用Transwell细胞侵袭实验观察lncRNA TUG1和miR-145对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响。应用生物信息学及双荧光素酶报告基因分析lncRNA TUG1和miR-145的关系及miR-145的靶基因。同时,利用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测lncRNA TUG1和miR-145对靶蛋白表达水平的影响。两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果实时荧光定量PCR实验结果显示,lncRNA TUG1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平(4.43±0.07)高于癌旁组织(1.13±0.06),差异有统计学意义(t=3.124,P<0.05),miR-145的表达水平(0.39±0.08)低于癌旁组织(1.08±0.04),差异有统计学意义(t=2.937,P<0.05);甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中转染lncRNA TUG1 shRNA组及miR-145 mimics组侵袭细胞数[(292.4±48.2)、(234.2±42.4)个]低于各自对照组侵袭细胞数[(452.9±50.8)、(439.4±39.8)个],差异有统计学意义(t=3.205,P<0.05;t=3.186,P<0.05);生物信息学及双荧光素酶报告基因分析结果显示,lncRNA TUG1可以与miR-145互补结合,ZEB1是miR-145的靶基因;lncRNA TUG1 shRNA组细胞ZEB1蛋白表达水平(0.33±0.12)低于lncRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.17±0.12),差异有统计学意义(t=3.320,P<0.05),miR-145 mimics转染组细胞蛋白表达水平(0.46±0.11)低于miRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.05±0.12),差异有统计学意义(t=3.450,P<0.05)。结论lncRNA TUG1能够靶向作用于miR-145/ZEB1调控甲状腺癌细胞的侵袭能力。
简介:摘要目的探讨冠心病(CHD)患者冠状动脉旁路移植术(CABG)治疗后血清微小RNA(miR)-335、miR-193b水平与预后的关系。方法选取阜外华中心血管病医院2018年6月至2020年6月收治的106例CHD患者作为研究对象,全部患者均行CABG治疗,术后进行为期12个月的随访,根据患者预后情况(是否发生不良心血管事件)分为预后不良组和预后良好组。检测并比较两组入院时血清miR-335、miR-193b水平,经Logistic回归、ROC曲线分析入院时血清miR-335、miR-193b水平对CHD患者CABG治疗预后的关系。结果106例CHD患者经CABG治疗、随访后,有34例发生不良心血管事件,占32.08%;预后不良组胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平高于预后良好组[(6.02±0.87) mmol/L比(4.45±0.62) mmol/L、(1.87±0.40) mmol/L比(1.53±0.31) mmol/L],miR-335、miR-193b水平低于预后良好组(0.55±0.29比0.81±0.27、0.46±0.25比(0.76±0.24),差异有统计学意义(t=10.577、4.940、4.571、5.869,P<0.05);组间其他资料对比,差异无统计学意义(P>0.05);经单项Logistic回归分析后,将P值放宽至<0.1,纳入符合条件的因素,建立多项Logistic回归模型,结果显示,TC[B=3.666,比值比(OR)=39.106,95%可信区间(CI):8.551~178.831]、TG(B=2.888,OR=17.959,95%CI:4.516~71.423)过表达可能作为CHD患者CABG治疗预后的风险因子(P<0.05),miR-335(B=-3.324,OR=0.036,95%CI:0.007~0.190)、miR-193b(B=-5.068,OR=0.006,95%CI:0.001~0.054)水平高表达可能作为CHD患者CABG治疗预后的保护因子(OR<1,P<0.05);绘制ROC曲线,结果显示,入院时血清miR-335、miR-193b水平预测CHD患者CABG治疗预后不良的AUC均>0.70,具有一定预测价值,且以入院时血清miR-335、miR-193b的截点(cut-off)值取0.640、0.660时,可获得最佳预测价值。结论血清miR-335、miR-193b水平与CHD患者CABG治疗预后密切相关,两者联合检测有利于预测CHD患者预后。
简介:摘要目的探讨环状RNA锌指蛋白652(circZNF652)/微小RNA(miR)-1278/叉头盒P1蛋白(FOXP1)轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞活性、增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测circZNF652、miR-1278以及FOXP1 mRNA表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活性;EdU实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)实验检测FOXP1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验和RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证circZNF652与miR-1278之间的靶向关系,以及miR-1278与FOXP1之间的靶向关系。以t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果ESCC细胞系KYSE-510和TE-10中circZNF652、FOXP1 mRNA和蛋白表达高于正常食管上皮细胞HEEC(3.37±0.24比1.97±0.06、4.38±0.29比2.88±0.12、2.95±0.25比1.48±0.12),差异有统计学意义(F=209.4、267.3、75.5,P<0.05),而KYSE-510和TE-10中miR-1278表达低于HEEC(0.47±0.06比0.71±0.03),差异有统计学意义(F=152.5,P<0.05)。circZNF652小干扰RNA(si-circZNF652)组的细胞活性、增殖和侵袭能力低于阴性对照小干扰RNA(si-NC)组,差异有统计学意义(0.44±0.04比0.71±0.03、0.50±0.04比1.05±0.05、0.46±0.05比1.01±0.07),差异有统计学意义(F=1.5、1.3、2.1,P<0.05);而si-circZNF652组的细胞凋亡率高于si-NC组[(30.2±0.28)%比(5.20±1.27)%],差异有统计学意义(F=2.3,P<0.05)。miR-1278拮抗剂(抗miR-1278)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于阴性对照拮抗剂(抗NC)组(1.02±0.03比0.71±0.03、1.38±0.04比1.04±0.05、1.51±0.06比0.99±0.04),差异有统计学意义(F=484.1、306.1、190.6,P<0.05),而si-circZNF652+抗miR-1278组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于si-circZNF652+抗NC组(0.57±0.02比0.35±0.02、0.89±0.04比0.49±0.02、0.88±0.04比0.52±0.06),差异有统计学意义(F=484.1、306.1、190.6,P<0.05)。miR-1278 mimic+FOXP1过表达(OE-FOXP1)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于miR-1278 mimic+FOXP1过表达阴性对照(OE-NC)组(0.52±0.07比0.23±0.04、0.92±0.03比0.46±0.05、0.91±0.05比0.53±0.04),差异有统计学意义(F=35.9、242.7、237.5,P<0.05),但miR-1278 mimic+OE-FOXP1组的细胞凋亡率低于miR-1278 mimic+OE-NC组(17.35±1.77比33.95±4.88),差异有统计学意义(F=66.1,P<0.05)。结论circZNF652通过抑制miR-1278提高FOXP1的表达,进而促进ESCC细胞增殖和侵袭能力,并降低细胞凋亡率。
简介:摘要目的探讨血清微小RNA(miR)-146a、miR-499与冠心病患者非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)后新发房颤的关系。方法选取郑州大学第一附属医院2019年8月至2021年8月收治的118例冠心病患者作为研究对象,所有患者均行OPCABG术治疗,术后接受为期7 d观察,将观察期间发生房颤患者纳入发生组,未发生房颤患者纳入未发生组。入院次日检测患者血清miR-146a、miR-499水平,询问并记录两组一般资料,采用独立样本t检验和Logistics回归分析血清miR-146a、miR-499与冠心病患者OPCABG术后新发房颤的关系,两组间比较以独立样本t检验。结果纳入的118例冠心病患者,OPCABG术后发生房颤28例,占23.73%;初步比较两组一般资料及实验室指标后,将符合条件的变量纳入,经Logistics回归分析显示,发生组血清miR-146a、miR-499水平均高于未发生组(1.36±0.18比1.24±0.16、2.13±0.22比1.95±0.18),差异有统计学意义(t=3.439、4.487,P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线图显示,血清miR-146a、miR-499单独及联合预测冠心病患者OPCABG术后发生房颤的曲线下面积(AUC)分别为0.788、0.815、0.860,均有一定预测价值。结论血清miR-146a、miR-499过表达与冠心病患者OPCABG术后发生房颤有关,术前检测两者水平有助于预测术后房颤发生风险。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) MT1JP靶向微小RNA(miR)-18a-5p对非小细胞肺癌恶性细胞生物学的影响。方法选择2018年6月到2021年6月河南省人民医院收治的71例非小细胞肺癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA MT1JP和miR-18a-5p表达水平。采用对照慢病毒和lncRNA MT1JP慢病毒感染A549细胞,建立lncRNA组和MT1JP组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖;采用Transwell分析两组细胞侵袭;采用划痕实验分析两组细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA MT1JP的靶基因。组间比较采用t检验。结果癌旁组织lncRNA MT1JP表达水平(1.00±0.17)明显高于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(0.37±0.18),差异有统计学意义(t=21.330,P<0.05)。癌旁组织miR-18a-5p表达水平 (1.08±0.18)明显低于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(2.23±0.20),差异有统计学意义(t=36.040,P<0.05)。lncRNA组细胞活力(1.67±0.09)和细胞EdU染色阳性率[(61.83±4.88)%]明显高于MT1JP组细胞活力(1.10±0.05)和细胞EdU染色阳性率[(33.17±3.31)%],差异有统计学意义(t=12.940、10.760,P<0.05)。miR-NC组细胞活力(1.63±0.06)和EdU染色阳性率[(61.33±4.46)%]明显高于miR-18a-5p沉默组细胞活力(1.14±0.09)和和EdU染色阳性率[(33.00±4.73)%],差异有统计学意义(t=10.760、10.680,P<0.05)。lncRNA组细胞划痕愈合率[(70.22±3.41)%]和侵袭数量[(111.83±10.09)个]明显高于MT1JP组[(35.42±3.82)%]和侵袭数量[(64.17±7.81)个],差异有统计学意义(t=16.620、9.153,P<0.05)。miR-NC组划痕愈合率[(73.72±3.82)%]和侵袭数量[(117.33±7.79)个]明显高于miR-18a-5p沉默组[(43.40±4.70)%]和侵袭数量[(56.67±10.29)个],差异有统计学意义(t=10.540、11.520,P<0.05)。结论lncRNA MT1JP在非小细胞肺癌中低表达,通过靶向miR-18a-5p,进而参与非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭等过程。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) LINC01234对前列腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测收集2017年5月至2018年7月郑州大学第一附属医院收治的20例前列腺癌患者的前列腺癌组织及癌旁组织中LINC01234、微小RNA(miRNA,miR)-940的表达水平。分别将LINC01234小干扰RNA(si-LINC01234)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、微小RNA-940模拟物(miR-940 mimics)、阴性对照基因(miR-NC)、si-LINC01234+阴性对照(anti-miR-NC)、si-LINC01234+微小RNA 940特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-940)转染至DU145细胞。分别记作si-NC、si-LINC01234、miR-NC、miR-940、si-LINC01234+anti-miR-NC、si-LINC01234+anti-miR-940组。噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell法检测各组细胞的迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证LINC01234与miR-940的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果LINC01234在前列腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(1.00±0.08比2.61±0.25,t=27.430,P<0.05),miR-940在前列腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织(1.00±0.09比0.56±0.05,t=19.112,P<0.05),差异有统计学意义;转染si-LINC01234、miR-940 mimics后细胞活力显著降低(1.29±0.11比0.71±0.06;1.24±0.09比0.79±0.07,t=13.886,P<0.05),迁移细胞数[(84.36±8.12)个比(39.41±4.22)个;(86.25±8.14)个比(44.37±4.48)个]与侵袭细胞数[(67.25±6.74)个比(28.44±3.58)个;(69.48±6.25)个比(33.47±4.18)个]显著减少(t=14.735、15.309,P<0.05),细胞凋亡率[(6.58±0.61)%比(20.36±2.14)%;(7.11±0.71)%比(18.26±1.36)%]显著升高(t=18.577,P<0.05),差异均有统计学意义;双荧光素酶报告实验证实miR-940过表达可抑制野生型(WT)-LINC01234细胞的荧光活性,LINC01234可负向调控miR-940的表达(t=328.298,P<0.05),差异有统计学意义;干扰miR-940表达可逆转抑制LINC01234表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其对凋亡的促进作用。结论lncRNA LINC01234可能通过靶向miR-940促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡。
简介:摘要目的探讨ST8SIA6-AS1靶向结合微小RNA(microRNA,miR)-142-3p,影响肝细胞癌的增殖和侵袭能力。方法用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)验证ST8SIA6-AS1在肝细胞肝癌(HCC)和邻近正常组织中的差异表达。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ST8SIA6-AS1和miR-142-3p在组织水平和细胞水平的表达量。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测人肝癌细胞Hep3B的增殖情况;采用迁移侵袭实验(Transwell法)检测肝癌Hep3B细胞迁移和侵袭情况。生物信息学、双荧光素酶报告实验验证ST8SIA6-AS1与miR-142-3P的靶向关系。组间采用t检验,多组间采用单因素方差分析进行比较,相关性分析采用Spearman秩检验。结果GEPIA结果显示ST8SIA6-AS1在肝癌组织中的表达明显高于正常组织。RT-qPCR结果显示ST8SIA6-AS1在HCC中的表达明显高于癌旁组织(0.778±0.363比1.951±0.575,t=11.370,P<0.05),差异有统计学意义。miR-142-3p在肝癌组织的表达量显著低于癌旁组织(0.881±0.374比0.371±0.164,t=9.395,P<0.05),差异有统计学意义。ST8SIA6-AS1在4种人HCC细胞株(HepG2、SMMC-7721、HCCLM3和Hep3B)的表达(3.84±0.27、5.81±0.60、4.47±0.55、5.94±0.69)明显高于正常肝细胞株L02(1.00±0.09,t=17.280,t=13.730,t=10.780,t=12.300,P<0.05),差异有统计学意义,ST8SIA6-AS1在敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞中的相对表达量低于对照组(0.26±0.04比1.00±0.01,t=9.423,P<0.05),差异有统计学意义。集落形成实验结果显示,敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞集落个数显著低于对照组[(32.60±6.70)个比(100.00±10.00)个,t=10.040,P<0.05],差异有统计学意义;CCK-8实验中敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞72 h吸光度(A)值低于对照组[(0.71±0.06)%比(1.14±0.09)%,t=6.886,P<0.05],差异有统计学意义。Transwell实验结果显示敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞垂直迁移率明显低于对照组[(53.38±6.49)%比(100.00±13.00)%,t=5.641,P<0.05],差异有统计学意义。敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞的侵袭率低于对照组[(44.98±8.42)%比(100.00±10.00)%,t=7.485,P<0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实miR-142-3p过表达组明显低于对照组ST8SIA6-AS1-野生型(WT)细胞的荧光活性,ST8SIA6-AS1负向调控miR-142-3p的表达(0.42±0.05比1.00±0.09,t=9.757,P<0.05)。干扰ST8SIA6-AS1的表达可对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭产生抑制作用,这种作用可通过沉默miR-142-3p发生逆转。结论ST8SIA6-AS1可通过竞争性结合miR-142-3p在肝癌中发挥致癌作用。
简介:Recently,RNAprocessinghasemergedasanovelpathwaythatmaycontributetothemaintenanceofgenomestability[1].Alternativesplicingisakeymolecularmechanismforincreasingthefunctionaldiversityoftheeukaryoticproteomes,butitalsooftenalteredincancer.Mountingevidenceindicatesthatalternativesplicing,theprocessthatallowsproductionofmultiplemRNAvariantsfromeachgene,contributestotheheterogeneityofthedisease[2].Althoughthemechanismofalternativesplicingvariantincancerisunclear,thecancer-specificalternativesplicingvariantshavebeenobservedinavarietyofhumancancersandcancercelllinesandhavebeenconnectedtotumorgenesis.
简介:摘要微RNA (miRNA)是一类由内源基因编码的长度20~22个核苷酸的非编码单链RNA分子,在动植物中参与转录后基因表达调控。miRNA以双链形式存在,激活时为单链形式,miRNA通过形成miRISC复合物发挥作用,参与了细胞生长、分化、衰老、凋亡、自噬、迁移、侵袭等多种过程。下咽癌是一类病因不明且相对少见的恶性肿瘤,预后较差,下咽癌早期症状不显著,易漏诊误诊,其病理类型中95%为鳞状细胞癌,且极易发生颈部淋巴结转移。了解miRNA在下咽鳞状细胞癌中的作用,对下咽鳞状细胞癌的靶向治疗具有重要意义。文章就miRNA在下咽鳞状细胞癌中的作用进行综述。
简介:摘要非编码RNA(ncRNA)是一类具有多种生物学功能但不能翻译蛋白质的RNA。葡萄膜炎是常见的致盲眼病,易反复发作且治疗棘手,其发病机制尚不完全清楚。近年来研究表明,ncRNA在人类葡萄膜炎和实验性自身免疫性葡萄膜炎发病过程中有着重要的调控作用,可通过调节与免疫相关的重要信号通路、T淋巴细胞或抗原提呈细胞的免疫应答及炎性因子分泌等方式参与葡萄膜炎发病过程,靶向某些ncRNA对葡萄膜炎的治疗具有一定意义。此外,ncRNA的单核苷酸多态性及拷贝数变异与葡萄膜炎的遗传易感性高度相关。因此,ncRNA可能作为葡萄炎诊断、判断病情及预后的生物标志物,靶向ncRNA可能成为治疗葡萄膜炎的新策略。本文主要对微小RNA和长链非编码RNA在葡萄膜炎发病中的调控作用进行综述。
简介:摘要目的探讨环状RNA(circRNA)_0016624调控骨质疏松性骨折愈合的分子机制。方法30只SD大鼠按数字表法分为对照组、模型组和circRNA组。模型组和circRNA组构建去卵巢大鼠骨质疏松性骨折大鼠模型,对照组仅去卵巢,不做骨折处理。对照组和模型组骨折注射对照腺相关病毒,而circRNA组大鼠骨折部位注射过表达circRNA_0016624的腺相关病毒。治疗24 d后,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析3组大鼠骨折部位circRNA_0016624表达水平;采用X线片分析骨折愈合情况;采用CT扫描分析3组大鼠的骨骼参数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析骨折部位骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达水平。采用三点弯曲法检测3组大鼠骨折生物力学参数。计量数据比较采用单因素方差分析。结果circRNA组骨折部位circRNA_0016624表达水平(1.21±0.16)明显高于模型组(0.94±0.08),差异有统计学意义(t=8.851,P<0.05)。circRNA组大鼠X线评分(3.02±0.14)明显高于模型组大鼠X线评分(1.96±0.22),差异有统计学意义(t=12.880,P<0.05)。circRNA组大鼠骨密度评分[(0.254±0.010) g/cm2]明显高于模型组[(0.206±0.005) g/cm2],差异有统计学意义(t=12.110,P<0.05)。circRNA组大鼠骨小梁体积BV[(30.35±2.61) mm3]明显高于模型组[(25.40±1.40) mm3],差异有统计学意义(t=5.284,P<0.05)。circRNA组大鼠组织体积TV[(30.88±2.06) mm3]明显高于模型组[(23.28±2.23) mm3],差异有统计学意义(t=7.914,P<0.05)。circRNA组大鼠大鼠BV/TV比例[(61.37±1.94)%]明显高于模型组[(51.18±2.23)%],差异有统计学意义(t=10.891,P<0.05)。circRNA组大鼠骨折部位BMP-2和VEGF水平[(2.56±0.22)、(2.09±0.39) μg /L]明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.045、7.530,P<0.05)。circRNA组大鼠胫骨最大载荷、弹性载荷、刚度和最大挠度等三点弯曲指标[(145.76±14.00) N、(102.20±18.07) N、(149.43±10.32) N/mm]明显高于模型组大鼠,差异有统计学意义(t=9.412、5.728、5.288,P<0.05)。结论腺病毒介导circRNA_0016624在骨折部位表达可显著上调BMP-2蛋白等骨折愈合因子的表达水平,进而促进骨折愈合和增强其生物力学特性。
简介:摘要目的探究微小RNA(miR)-126对骨折愈合中血管生成的影响。方法构建股骨骨折大鼠模型,局部注射miR-126激动剂(agomiR-126)、miR-126拮抗剂(antagomiR-126)设立实验组,同时设立对照组(agomiR-NC),于术后4、8、12周通过显微计算机断层扫描(micro-CT)检测各组股骨骨折愈合,通过免疫组织化学标记骨痂内血管内皮标志物CD31,并计算微血管密度(MVD)值,采用蛋白质印迹法(Western blot)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测骨痂中血管生成相关因子出芽相关蛋白(SPRED1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)的蛋白及mRNA水平,两组间比较采用t检验。结果micro-CT结果显示,在术后12周agomiR-126组右股骨骨折线基本消失,其骨折局部的骨密度[(732.1±16.3) mg/cm]及BV/TV比值[(72.4±2.1)%]明显高于对照组[(684.2±13.2) mg/cm、(70.3±2.3)%],差异有统计学意义(t=11.517,t=9.261,P<0.01);而antagomiR-126组骨折间隙仍较为明显,其骨密度[(635.2±12.6)) mg/cm]及BV/TV比值[(65.1±3.4)%]明显下降(t=8.174,t=6.838,P<0.05)。免疫组织化学结果显示,agomiR-126组骨痂中MVD值(7.6±2.1)明显高于对照组(5.6±1.2),差异有统计学意义(t=4.180,P<0.01),而antagomiR-126组中MVD值(3.6±1.1)则明显下降(t=3.725,P<0.01)。Western blot及RT-PCR结果显示,agomiR-126组SPRED-1蛋白及mRNA表达水平(0.47±0.04、0.68±0.36)均明显下降(t=5.412、4.712,P<0.01),其VEGFA蛋白及mRNA表达水平(0.68±0.02、2.53±0.79)则明显上升(t=5.284、11.625,P<0.01);相反,antagomiR-126组SPRED-1蛋白及mRNA表达水平(0.87±0.06、1.65±0.37)均明显上升(t=7.223、6.795,P<0.01),其VEGFA蛋白及mRNA表达水平(0.43±0.04、0.75±0.29)则明显下降(t=4.226、2.169,P<0.05)。结论miR-126可以通过SPRED-1/VEGFA通路促进大鼠股骨骨痂组织中的血管生成,并加快骨折的愈合。