摘要
摘要目的探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对脉络膜微血管内皮细胞增生和凋亡的影响及其调控机制。方法体外培养人脉络膜微血管内皮细胞，将培养的细胞分为血管内皮生长因子(VEGF)组和正常对照组，正常对照组细胞常规培养，VEGF组细胞应用VEGF处理24 h；将VEGF组培养的细胞分为4个亚组，分别将阴性对照(miR-NC)、miR-338-3p拟似物、miR-338-3p拟似物＋pcDNA、miR-338-3p拟似物＋pcDNA-TCF4转染至脉络膜微血管内皮细胞后用VEGF处理24 h。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p和TCF4相对表达量；采用MTT法检测细胞增生率以评估细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；行双荧光素酶报告实验验证miR-338-3p与TCF4的靶向关系；采用Western blot法检测细胞中增生标记蛋白细胞增生核抗原-67(Ki-67)、增生细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(bax)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)蛋白相对表达量。结果与正常对照组比较，VEGF组细胞中miR-338-3p mRNA表达水平显著降低，TCF4 mRNA表达水平显著升高，细胞增生率显著升高，细胞凋亡率显著降低，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高，bax蛋白水平显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与VEGF＋miR-NC组比较，VEGF＋miR-338-3p组细胞增生率显著降低，细胞凋亡率显著升高，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著降低，bax蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；双荧光素酶报告实验证实miR-338-3p可靶向结合TCF4；与VEGF＋miR-338-3p＋pcDNA组比较，VEGF＋miR-338-3p＋pcDNA-TCF4组细胞增生率显著升高[(56.48±13.20)% vs.(96.24±16.24)%]，细胞凋亡率显著降低[(30.59±3.57)% vs.(12.36±1.29)%]，细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高(0.41±0.11 vs. 0.96±0.19；0.44±0.10 vs. 0.97±0.20；0.55±0.12 vs. 0.98±0.15)，bax蛋白表达水平显著降低(0.87±0.13 vs. 0.42±0.11)，差异均有统计学意义(t＝5.700、14.408、7.516、7.111、6.715、7.927，均P<0.01)。结论miR-338-3p过表达可负向调控TCF4在细胞中的表达量，从而抑制脉络膜微血管内皮细胞的增生及诱导细胞凋亡。
出版日期
2020年08月20日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
