摘要
摘要目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation, ARM)发生发展中的作用机制。方法采用随机数字表法将42只健康SPF级Wistar孕鼠分为ARM组和对照组，孕10 d时分别予1%乙烯硫脲(ethylene thiourea，ETU)及生理盐水灌胃，并分别于孕16、17、19 d取7只大鼠剖宫取胎。分别对ARM组及对照组胎鼠在孕16、17、19 d三个时间点末端直肠组织lncRNA进行高通量测序分析，对具有显著差异的lncRNA进行靶基因预测，筛选出可能与ARM发生相关的lncRNA进行进一步验证与研究。采用实时荧光定量PCR检测ARM组及对照组胎鼠末段肛门直肠组织中的lncRNA AARB07048878.1表达水平差异，通过特异性干扰试剂及过表达质粒转染大鼠小肠隐窝上皮细胞系(IEC-6细胞系)细胞，采用CCK-8试剂法检测细胞增殖能力变化，流式细胞术检测细胞凋亡水平变化，采用Western blot检测细胞中Wnt5a蛋白的表达水平。实验数据两两比较采用独立样本t检验，多组间比较采用ANOVA。结果高通量测序及靶基因预测分析显示lncRNA AARB07048878.1可能与ARM发生相关。荧光定量PCR检测显示，相较对照组，ARM组胎鼠在孕16、17、19 d时lncRNA AARB07048878.1表达均下调，其中17 d时ARM组(0.48±0.13)与对照组(1.00±0.24)比较，差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA AARB07048878.1表达后，干扰组与对照组比较，IEC-6细胞增殖能力下降(加入试剂后2 h：1.90±0.01比2.04±0.04；4 h：3.18±0.03比3.27±0.02)，细胞凋亡率上升[(18.34±4.20)%比(11.57±3.54)%]，Wnt5a蛋白表达降低(0.77±0.12比1.00±0.17)，且组间比较，差异均有统计学意义(P<0.01或<0.05)。过表达lncRNA AARB07048878.1后，过表达组与空白组比较，细胞增殖能力提高(加入试剂后2 h：1.96±0.04比1.80±0.03；4 h：3.44±0.06比3.16±0.03)，细胞凋亡率下降[(8.48±2.89)%比(12.19±0.40)%]，Wnt5a蛋白表达增加(1.29±0.07比1.00±0.12)，且组间比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA AARB07048878.1可能通过抑制细胞增殖，促进细胞凋亡影响先天性肛门直肠畸形发生发展，其作用可能通过抑制Wnt5a表达实现。
出版日期
2021年03月21日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
