摘要
摘要目的探讨微小RNA-627（miR-627）在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法采用实验研究方法。收集2019年10月—2020年1月于北部战区总医院就诊的符合入选标准的6例增生性瘢痕患者［男2例、女4例，年龄（34±11）岁］的增生性瘢痕组织、同期于同单位就诊的6例符合入选标准的外伤患者［男3例、女3例，年龄（35±13）岁］行皮瓣移植手术后剩余的正常皮肤组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测miR-627的mRNA表达。取增生性瘢痕组织，培养第3~5代成纤维细胞（Fb），经鉴定后用于后续实验。取增生性瘢痕Fb，分为miR-627阴性对照组、miR-627模拟物组和miR-627抑制物组，分别转染对应的序列，转染后0（即刻）、12、24、36、48 h，用噻唑蓝法检测细胞活力；转染后24 h，用流式细胞术检测细胞凋亡情况；转染后24 h，用蛋白质印迹法检测胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）、Ⅰ型胶原和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平。取2批增生性瘢痕Fb，一批分为IGF-Ⅰ野生型+miR-627阴性对照组、IGF-Ⅰ野生型+miR-627模拟物组，另一批分为IGF-Ⅰ突变型+miR-627阴性对照组、IGF-Ⅰ突变型+miR-627模拟物组，分别转染对应的序列，转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒分别检测荧光素酶和肾荧光素酶的表达，并计算两者比值，反映IGF-Ⅰ的活性。取增生性瘢痕Fb，分为miR-627阴性对照组、单纯miR-627模拟物组和miR-627模拟物+IGF-Ⅰ组，分别转染对应的序列，转染后24 h，采用蛋白质印迹法检测IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达水平。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验及χ2检验。结果增生性瘢痕组织中miR-627的mRNA表达量为0.47±0.06，显著低于正常皮肤组织中的1.12±0.23（t=15.090，P<0.01）。转染后12、24、36、48 h，miR-627模拟物组细胞活力明显低于miR-627阴性对照组（t=9.918、34.370、13.580、61.550，P<0.05或P<0.01），miR-627抑制物组细胞活力明显高于miR-627阴性对照组（t=4.722、8.616、13.330、14.000，P<0.05或P<0.01）。转染后24 h，与miR-627阴性对照组的细胞凋亡率（8.42±0.47）%相比，miR-627模拟物组的（10.89±0.35）%显著升高（t=7.301，P<0.01），miR-627抑制物组的（5.00±0.22）%显著下降（t=11.510，P<0.01）。转染后24 h，与miR-627阴性对照组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达相比，miR-627模拟物组明显下降（t=25.470、5.282、7.415，P<0.01），miR-627抑制物组明显升高（t=15.930、8.857、9.763，P<0.01）。转染后48 h，IGF-Ⅰ野生型+miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.463±0.061，明显低于IGF-Ⅰ野生型+miR-627阴性对照组的0.999±0.011（t=16.852， P<0.01）；IGF-Ⅰ突变型+miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.934±0.021，与IGF-Ⅰ突变型+miR-627阴性对照组的0.930±0.023相近（t=1.959，P>0.05）。转染后24 h，单纯miR-627模拟物组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达量1.623±0.070、1.363±0.042、1.617±0.025均较miR-627阴性对照组的2.723±0.045、2.147±0.067、2.533±0.055明显降低（t=22.831、7.280、26.220，P<0.01），miR-627模拟物+IGF-Ⅰ组细胞IGF-Ⅰ、Ⅰ型胶原、α-SMA的蛋白表达量2.477±0.102、1.760±0.046、2.387±0.049均较单纯miR-627模拟物组明显升高（t=3.830、8.286、3.436，P<0.05或P<0.01）。结论人增生性瘢痕中miR-627表达下调；miR-627可通过靶向抑制IGF-Ⅰ的表达从而抑制人增生性瘢痕Fb的增殖，促进Fb的凋亡。
出版日期
2021年05月08日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
