摘要
摘要目的探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC）来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）诱导的促炎状态巨噬细胞的调控，为牙周炎治疗提供依据。方法使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素（staurosporine，STS）诱导的BMMSC的凋亡过程；使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征；使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯（5-carboxy-tetramethylrhodamine，succinimidyl ester，5-TAMRA-SE）标记的凋亡囊泡的吞噬作用；采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1（arginase-1，Arg-1）mRNA相对表达量；采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖（lipopolysaccharide from Pg，Pg-LPS）诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响；采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factro-α，TNF-α）的分泌情况。结果0.5 μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩，周围有明显的凋亡囊泡产生；凋亡囊泡的粒径为100~1 000 nm，平均Zeta电势为-16.6 mV；RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡；小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4（interleukin4，IL-4）刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量（261.97±15.91）较单独IL-4刺激的 mRNA表达量（115.29±15.42）显著升高（P<0.01）；凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下，RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（39.33±4.70）个］显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（95.33±4.70）个］（P=0.007），RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量（5.84±1.05）显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量（14.91±3.87）（P<0.01），RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（21 899.71±409.73） ng/L］显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（71 296.50±2 344.22） ng/L］（P =0.003）。结论小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡可以调控巨噬细胞极化状态，并可减轻Pg-LPS诱导下巨噬细胞的促炎状态。
出版日期
2021年08月14日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
