摘要
摘要目的构建跨膜蛋白(transmembrane protein，TMEM)240慢病毒载体，并在人神经母细胞瘤细胞中表达。方法提取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的RNA，逆转录成cDNA并作为模板，聚合酶链反应(polymerasechain reaction，PCR)扩增TMEM240的CDS序列，与pLVX-EGFP-N1载体连接，转化、验菌送公司测序，pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒与慢病毒包装质粒共转染293Ta细胞，收取上清，感染SH-SY5Y，嘌呤霉素筛选，获得表达TMEM240的SH-SY5Y细胞，将感染pLVX-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞作为对照组，感染pLVX-TMEM240-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞为实验组。通过共聚焦显微镜、实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR，Real-time PCR)和Western blot检测细胞中TMEM240表达。结果测序结果显示pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒构建成功；共聚焦显微镜下，表达TMEM240的细胞内出现点状绿色荧光；Real-time PCR及Western blot结果表明细胞内TMEM240表达。结论成功构建TMEM240慢病毒载体，慢病毒在基因和蛋白水平均引起TMEM240表达升高。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
