摘要
摘要目的研究高脂饮食小鼠腹脂微小RNA(miRNA)的差异表达，探讨高表达miR-335在脂类代谢过程中作用。方法对高脂饮食的小鼠腹脂进行miRNA芯片分析，检测小鼠腹脂miRNA的差异表达；采用生物信息学方法预测miR-335靶基因，双荧光素酶报告系统及点突变实验验证靶基因外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶4(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphordiester-ase4, ENPP4)和脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturase1, FADS1)；3T3L1细胞中转染miR-335模拟体，检测靶基因mRNA和蛋白表达量；实时荧光定量PCR检测miR-335和靶基因在高脂饮食小鼠不同组织中的表达量。结果高脂饮食后，模型组小鼠体型明显大于对照组，小鼠血清总胆固醇(P＝0.016)和三酰甘油(P＝0.014)水平显著上升。高脂饮食的小鼠脂肪组织中多种miRNA发生差异表达，其中miR-335表达上升尤为明显(P＝0.024)。通过Targetscan预测miR-335靶基因，结合其功能，筛选出ENPP4和FADS1。报告基因试验显示miR-335通过"种子区"与ENPP4和FADS1预测靶位点结合从而抑制ENPP4和FADS1基因的表达，点突变实验证实了结合的靶位点；设计合成miR-335模拟体转染3T3L1细胞，培养48 h后，FADS1 mRNA表达水平显著下降(P＝0.038)，ENPP4和FADS1蛋白水平均显著下降(P＝0.033, P＝0.007)。与对照组相比，高脂饮食后miR-335在肝脏、白棕脂肪组织和脑中显著性高表达(P＝0.017, P＝0.002, P＝0.003, P＝0.031)；而ENPP4和FADS1在脑(P＝0.006, P＝0.034)和棕色脂肪组织(P＝0.014, P＝0.037)中表达量显著下降，同时ENPP4在肝脏中的表达量也极显著下降(P<0.001)。结论miR-335是与脂类代谢和脂肪沉积相关的miRNA，ENPP4和FADS1基因是miR-335的靶基因。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
