上海任直司法鉴定所 上海市 200051
1案例
1.1 案情及病史
某女,13年因患急性髓系白血病M2型前因血液系统疾病做过骨髓移植术,现因其子(16岁)落户需要,委托我所进行亲子关系鉴定。经了解,该女近期无口腔疾病病史。2013年6月因持续低热就诊,医院检测诊断为急性髓系白血病M2型。遂经过四次化疗之后行骨髓移植术
1.2 采样和分析
(1)采样:取该女末梢血标记为①号样品。Chelex-100法提取方法提取口腔拭子,采样时仔细检查口腔,未发现口腔、牙龈出血等口腔疾病征象,用棉签刮取口腔内侧颊粘膜处,标记为②号样品。慎重起见,另提取毛发、指甲作为备用检材,分别标记为③、④号检材。同时取其子的末梢血一份。
(2)基因分型方法:用Chelex-100法分别提取检材DNA。用Micror-eaderTM21试剂盒进行PCR扩增。扩增产物用ABI3100遗传分析仪进行毛细管电泳,GeneMapperID V3.2软件进行分型。
1.3 分型结果
经检测得到母亲和儿子的STR分型结果见表1。
(1)分析该女的血痕STR分型图谱(图1),该女在D19S433、D18S51、D6S1043、D13S317、D7S820、CSF1PO、TPOX基因座的基因型不符合其子亲生母亲的遗传条件。每个基因座上的等位基因峰高均衡,表明没有不同细胞系的嵌合。
(2)该女口腔拭子STR分型图谱(图2),在D19S433、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D16S539、CSF1PO、FGA基因座上出现了三等位基因或四等位基因,且扩增不均衡现象,表明口腔拭子存在不同细胞系的嵌合。
(3)随后又对留取的该女毛发及指甲,采用上述同样方法检测分型。结果发现,该女毛发及指甲各STR基因座的基因型均相同且符合其子亲生母亲的遗传条件,毛发和指甲图谱见图
图1 图2
图3 图4
2讨论
骨髓移植是目前治疗血液系统疾病的有效疗法{1},其原理为:骨髓移植手术前的化疗基本摧毁了受体原有的骨髓造血系统,然后,通过移植供体的骨髓干细胞进入患者体内。骨髓移植后,异基因骨髓移植后患者外周血细胞基因分型会与供体一致或形成嵌合体[2],即临床上的完全供者嵌合状态(CC,即在所分析的血细胞中,只有供者型的遗传标记存在)和混合嵌合状态(MC,有供者和受者血细胞遗传标记以一定比例共存的混合体存在)[3]。
一般情况下,恶性血液病患者经过移植治疗后约24~35天,临床症状开始好转,此时,患者血液STR基因型发生改变,与供体一致,证实移植手术成功[4]。本案中,移植手术成功后,被鉴定人造血功能重建,自身原有外周血细胞被供体替代,以致女外周血STR基因座的基因型不符合其子亲生母亲的遗传条件。
根据骨髓移植的原理,受体血细胞基因分析出问题了,口腔细胞应该没有问题,用口腔拭子作为样本应该得到正确的结果。但是,得到的检验结果出现嵌合体,这对鉴定结果产生了干扰,后通过毛发和指甲的基因型对比得出正确判断。出现嵌合体现象原因简析为:1.取样口腔拭子时刮擦口腔内壁时擦破毛细血管导致口腔上皮细胞与血细胞混合;2.异基因外周血干细胞移植后,患者口腔粘膜上皮有一部分来自供体的干细胞生长形成[4][5],此时受体口腔粘膜上皮细胞为受体和供体的混合体。
随着STR分型技术的发展及其应用,检材类型更是趋于多样化、灵活化以及简单化,指甲、牙刷、烟蒂、口香糖甚至皮屑等都可以作为常规检材。但对于骨髓移植患者DNA鉴定过程中要打破原有的习惯方式,以下几点注意事项可供同行参考:1.取样前详细了解被鉴定人病史,骨髓移植的类型,受体和供体的亲缘关系,必要情况下可以取供体样本作为参考(特别是刑事案件中);2.治疗期间的用药史以及药物有无引起血管脆性改变的副作用;3.口腔黏膜取样时,观察口腔有无出血情况,询问近期有无口腔疾病,刮擦口腔黏膜时可根据部位不同、力度不同多组取样对照参考;4.另提取样品做对照,口腔样本可以潜血试验和血涂片染色,排除口腔出血的情况(本例没有条件做,以后碰到这种情况可以考虑平行对比,这样法庭证据更具有完整性);
参考文献:
(1)衣巴代提·赛麦提,韩春霞,潘丽雅.自体骨髓移植17例的临床护理观察[J].智慧健康,2019,5(31):193-194
(2)杨荣芝,杨庆恩,余纯应等.异基因骨髓移植后基因型分析[J].中国法医学杂志,2006,21(5):294-295
(3)段静静,苏丽萍.造血干细胞移植后嵌合体的检测方法及临床意义[J].国际肿瘤杂志,2010,37(8):626-629
(4)杨荣芝,桂程,梅焜,杨庆恩,黄代新,余纯应.干细胞移植患者口腔粘膜上皮细胞基因型观察[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2009,18(3)295-298.
(5)朱钦士.人体的更新之源—干细胞[J].生物学通报,2013,48(6)12-18.
(6)谷建立,李杰亮,王燕.异基因骨髓移植后DNA检验1例[J].中国法医学杂志,2015,30(6):639-640.
刘光渊(1987.6),男 汉族 河南郑州人,本科,法医物证鉴定人,主要从事法医物证学研究