简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-203在食管癌中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取河南省人民医院2016年1月到2020年1月收集的109例食管癌和癌旁组织作为标本，采用转录组学和荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和食管癌中差异表达miRNA；选择差异表达显著的miR-203分析其表达水平与食管癌患者临床病理特征和预后的关系；蛋白质印迹法(Western blot)分析食管癌组织细胞增殖抗原(Ki-67)表达水平；分析miR-203水平与Ki-67的关系。计量数据比较采用t检验，相关性采用Pearson相关系数法。结果转录组学技术筛选癌旁组织和食管癌组织中差异表达miRNA 25个，其中miR-203差异最为显著，因此本研究选择miR-203作为研究靶点。癌旁组织中miR-203表达水平(1.09±0.11)明显高于食管癌组织miR-203表达水平(0.37±0.09)，差异有统计学意义(t＝3.109，P<0.05)。中高分化患者食管癌组织miR-203表达水平(1.21±0.14)明显高于低分化患者食管癌miR-203表达水平(0.61±0.13)，差异有统计学意义(t＝3.331，P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ期患者食管癌组织miR-203表达水平(1.18±0.17)明显高于Ⅲ~Ⅳ期患者食管癌组织miR-203表达水平(0.53±0.12)，差异有统计学意义(t＝3.973，P<0.05)。无淋巴结转移患者食管癌组织miR-203表达水平(1.24±0.15)明显高于淋巴结转移患者食管癌组织miR-203表达水平(0.42±0.13)，差异有统计学意义(t＝3.973，P<0.05)。miR-203高表达患者中位生存时间为70.43个月[95%可信区间(CI)：60.54~81.76个月]明显高于miR-203低表达组患者48.21个月(95%CI：40.48~61.69个月)，差异有统计学意义(Log-Rank＝3.905，P<0.05)。miR-203高表达患者术后3年生存率[58.33%(28/48)]高于低表达组患者术后3年生存率[32.79%(20/61)]，差异有统计学意义(Log-Rank＝4.210，P<0.05)。miR-203高表达患者食管癌组织Ki-67表达水平(1.29±0.16)明显低于miR-203低表达患者(3.21±0.31)，差异有统计学意义(t＝5.116，P<0.05)。多因素Logistic回归显示食管癌患者3年生存率与临床分期、分化程度、临床分期、淋巴结转移、miR-203和Ki-67表达呈相关性[比值比(OR)＝1.698、1.302、1.098、1.243、1.549、1.792，P<0.05]。结论miR-203在食管癌呈低表达，与患者临床病理特征和预后及其食管癌细胞增殖密切相关。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) UCA1通过微小RNA(miRNA，miR)-203对食管癌细胞增殖，凋亡和侵袭的影响。方法选取河南省人民医院2021年2月到2022年1月手术切除的142例食管癌和癌旁组织，采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分析lncRNA UCA1和miR-203表达水平；乳腺癌MCF-7细胞系随机分为lncRNA对照组、短发卡RNA(shRNA) UCA1组、miRNA对照组和miR-203组。采用蛋白质印迹法(Western blot)、流式细胞术和Transwell实验分析不同处理的细胞增殖、凋亡和转移情况。荧光素酶基因报告实验检测lncRNA UCA1和miR-203的关系。蛋白质印迹法(Western blot)分析增殖、凋亡和转移蛋白表达水平。组间计量资料比较采用t检验。结果癌旁组织lncRNA UCA1表达水平(0.89±0.14)低于食管癌组织(2.71±0.20)，差异有统计学意义(t＝4.661，P<0.05)；癌旁组织miR-203表达水平(1.18±0.16)高于乳腺癌组织miR-203表达水平(0.34±0.11)，差异有统计学意义(t＝3.917，P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度(A)值(2.19±0.21)高于shRNA UCA1组细胞48 h A值(1.47±0.10)，差异有统计学意义(t＝3.198，P<0.05)。miRNA对照组细胞48 h A值(2.28±0.24)高于miR-203组细胞48 h A值(1.33±0.17)，差异有统计学意义(t＝3.139，P<0.05)。lncRNA对照组细胞凋亡比例[(6.81±0.89)%]低于shRNA UCA1组细胞[(22.09±4.12)%]，差异有统计学意义(t＝4.871，P<0.05)。miRNA对照组细胞凋亡比例[(6.09±0.82)%]低于miR-203组细胞[(27.09±3.81)%]，差异有统计学意义(t＝5.557，P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(132.44±11.82)个]高于shRNA UCA1组细胞侵袭数量[(68.29±6.82)个]，差异有统计学意义(t＝5.719，P<0.05)。miRNA对照组细胞侵袭数量[(126.98±10.54)个]高于miR-203组细胞侵袭数量[(74.29±8.71)个]，差异有统计学意义(t＝6.209，P<0.05)。lncRNA UCA1有miR-203的结合位点，起着海绵作用。lncRNA对照组细胞MAP3K1、IRS-1和RGS7 mRNA表达水平(1.39±0.21、1.22±0.17、1.10±0.15)明显高于shRNA UCA1组细胞(0.76±0.19、0.71±0.20、0.49±0.17)，差异有统计学意义(t＝3.191、3.018、3.381，P<0.05)。结论lncRNA UCA1在食管癌中高表达，通过结合miR-203，调控着食管癌细胞增殖、凋亡和侵袭过程。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-203对食管癌化疗敏感性的影响及其机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析顺铂(DDP)耐药食管癌细胞株TE-8/DDP和亲本细胞株TE-8细胞中miR-203表达水平。将TE-8/DDP细胞株分为对照组和miR-203组，采用慢病毒感染建立对照和miR-203过表达细胞系。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析对照组和miR-203组细胞对DDP的敏感性；流式细胞术分析两组细胞凋亡水平；生物信息学和双荧光素酶实验分析miR-203靶基因。蛋白质免疫印迹分析miR-203靶蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果亲本细胞株TE-8细胞miR-203表达水平(1.31±0.15)明显高于DDP耐药食管癌细胞株TE-8/DDP中miR-203表达水平(0.53±0.18)，差异有统计学意义(t＝4.801，P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞吸光度值(1.98±0.13、1.43±0.12)明显高于miR-203组细胞吸光度值(1.58±0.11、1.11±0.12)，差异有统计学意义(t＝3.781、3.017，P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞凋亡率[(30.54±5.81)%、(51.45±6.29)%]明显低于miR-203组细胞吸光度值[(49.29±5.00)%、(78.27±8.81)%]，差异有统计学意义(t＝3.781、3.017，P<0.05)。100 mg/kg DDP治疗20 d后，对照组细胞形成肿瘤体积[(498.35±43.10) mm3]明显大于miR-203组细胞体内肿瘤体积[(309.44±27.87) mm3]，差异有统计学意义(t＝5.091，P<0.05)。对照组细胞形成肿瘤质量[(8.91±1.29) g]明显高于miR-203组细胞体内肿瘤质量[(4.73±1.01) g]，差异有统计学意义(t＝3.182，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶结果显示三磷酸腺苷结合盒转运子E1(ABCE1)是miR-203的靶基因。对照组细胞ABCE1表达水平(0.89±0.09)明显高于miR-203组细胞ABCE1表达水平(0.25±0.07)，差异有统计学意义(t＝4.761，P<0.05)。对照组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达水平(0.38±0.09)明显高于miR-203组细胞Caspase-3表达水平(1.21±0.13)，差异有统计学意义(t＝6.281，P<0.05)。结论miR-203通过靶向ABCE1蛋白调控食管癌对顺铂的耐药性。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-203靶向RGS17蛋白对食管癌细胞增殖、周期和迁移的影响。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常食管上皮细胞HEEC、食管癌细胞TE-8、EC9706和EC-11中miR-203表达水平。将对数生长期食管癌细胞EC9706分为对照组和miR-203组，分别采用对照组和miR-203过表达慢病毒感染，筛选稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖能力；采用流式细胞术分析两组细胞凋亡和周期变化；采用Transwell实验分析两组细胞迁移能力；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-203靶基因；采用蛋白免疫印迹分析靶基因及相关蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果正常食管上皮HEEC细胞miR-203表达水平(1.19±0.17)明显高于食管癌TE-8、EC9706和EC-11细胞miR-203表达水平(0.56±0.11、0.39±0.09、0.47±0.10)，差异有统计学意义(t＝3.719、4.498、3.909，P<0.05)。对照组细胞miR-203表达水平(1.07±0.12)明显低于miR-203组细胞miR-203表达水平(3.41±0.19)，差异有统计学意义(t＝5.576，P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值(1.95±0.19)明显高于miR-203细胞A值(1.36±0.16)，差异有统计学意义(t＝3.274，P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(69.94±6.51)%]明显高于miR-203组细胞克隆形成率[(39.55±4.91)%]，差异有统计学意义(t＝5.901，P<0.05)。对照组细胞G0/G1期比例[(40.27±5.71)%]明显低于miR-203组细胞G0/G1期比例[(54.90±5.98)%]，差异有统计学意义(t＝3.821，P<0.05)。对照组细胞S期比例[(30.16±4.20)%]明显高于miR-203组细胞S期比例[(21.85±4.09)%]，差异有统计学意义(t＝3.019，P<0.05)。对照组细胞G2/M期比例[(28.86±3.57)%]明显高于miR-203组细胞G2/M期细胞比例[(24.66±4.01)%]，差异有统计学意义(t＝2.621，P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(146.38±16.10)个]明显高于miR-203组细胞迁移数量[(85.32±10.57)个]，差异有统计学意义(t＝6.926，P<0.05)。RGS17是miR-203的靶基因。对照组细胞RGS17表达水平(3.09±0.31)明显高于miR-203组细胞RGS17表达水平(1.74±0.20)，差异有统计学意义(t＝5.194，P<0.05)。结论miR-203通过靶向RGS17蛋白调控食管癌细胞增殖、凋亡、周期和迁移。