简介：摘要目的观察异紫堇碱衍生物COM33对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响。方法以0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L COM33分别处理正常肝细胞LO2和肝癌细胞Huh7 24 h后，采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞吸光度(A)值，并在Graphpad prism软件中通过非线性回归分析获得半数抑制浓度(IC50)。随后采用COM33处理Huh7细胞，以无COM33组设为对照组；细胞克隆实验用于评估COM33对Huh7细胞增殖的影响；10 μmol/L COM33处理Huh7细胞24 h后，在倒置显微镜下观察细胞形态变化，用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染试剂盒检测细胞凋亡情况，免疫印迹实验检测给药前后细胞中Gasdermin D(GSDMD)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9剪切体(cleaved Caspase-9)的表达水平。组间比较采用Student’s t检验。结果COM33剂量依赖性地抑制Huh7细胞增殖，且在Huh7细胞中的IC50值明显低于LO2细胞[(11.99±0.53) μmol/L比(33.33±3.10) μmol/L，t＝11.810，P<0.01]；给药组细胞形成的克隆集落少于对照组[(681±13)个比(387±29)个，t＝15.950，P<0.01]；Huh7细胞经COM33处理后出现皱缩变圆、贴壁不良；给药组Annexin V阳性细胞比例高于对照组[(7.28±0.86)%比(1.37±0.09)%，t＝11.820，P<0.01]；两组细胞GSDMD蛋白表达并无差异，且未检测到GSDMD剪切体；bax蛋白相对表达量给药组高于对照组(1.02±0.04比0.50±0.06，t＝12.250，P<0.01)；cleaved Caspase-9蛋白相对表达量给药组高于对照组(0.39±0.11比0.07±0.03，t＝4.726，P<0.01；0.39±0.11比0.16±0.07，t＝2.942，P<0.05)；bcl-2蛋白相对表达量给药组低于对照组(0.54±0.06比0.82±0.12，t＝3.551，P<0.05)。结论COM33对LO2细胞毒性不明显，可有效抑制Huh7细胞增殖，并诱导其凋亡。

简介：摘要目的筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸(microRNA)作为肝细胞癌(HCC)的诊断标志物，并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本，利用超速离心法收集血浆外泌体，经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后，提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应(qPCR)验证候选外泌体miRNA差异表达量，使用t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路，分析其在HCC进展过程中发挥的作用，组间比较采用t检验。结果以差异表达倍数2倍以上(Fold change>2.0或<0.5，且P<0.05)作为标准，分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果，结合两次结果，筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中，表达上调6个(miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p)，表达下调6个(miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248)。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异，HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组(9.046 ΔCt比7.597 ΔCt，t＝2.849，P<0.05)。结论血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。