简介：摘要目的探索原核表达新型冠状病毒受体结合蛋白（RBD）的制备方法，并对其在小鼠体内的免疫原性进行评价。方法用大肠埃希菌表达重组新型冠状病毒RBD，进行纯化、透析复性，比较了RBD复性前后的结构表征和抗原活性变化，最后将制备所得重组RBD免疫Babl/c小鼠，检测免疫小鼠体内的体液免疫和细胞免疫变化情况。结果完成了大肠埃希菌表达的新型冠状病毒重组RBD的制备。复性前后，RBD的自发荧光波长发生蓝移现象，从（363.33±0.47）nm蓝移至（333.00±0.82）nm，蛋白形状从无序状态折叠为（9.55±0.39）nm的颗粒，复性后RBD与ACE-2的结合活性是复性前的128倍。活病毒中和抗体检测结果显示：血清对原型株的滴度几何平均数为136.70，对贝塔株为101.59，两者无统计学差异(t=0.41，P=0.700)。试验组小鼠脾淋巴细胞产生的分泌特异性IFN-γ的效应T细胞为(308.50±144.11)个斑点形成细胞/5×105个细胞，低于对照组[(3.75±3.11)个斑点形成细胞/5×105个细胞]，差异有统计学差异(t=4.72，P=0.010)。结论成功制备原核表达的新型冠状病毒重组RBD，通过体外复性折叠，能够产生良好、全面的免疫原性。

简介：摘要目的构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒（Ad5-CD137L），并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒，共同转染HEK293细胞，构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后，对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果成功地构建了Ad5-CD137L，PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白，经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000，与理论值相符。与空腺病毒相比，Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ（t=6.315，P=0.003），抗肿瘤免疫效果更显著（t21 d=8.275，t29 d=4.492；t39 d=5.101，P均<0.001）。结论成功构建了Ad5-CD137L，该重组病毒具有特异性细胞免疫原性和抗肿瘤免疫效果。