简介：摘要目的探讨抑制树突状细胞相关RIG-1的表达从而抑制小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟并促进免疫耐受的作用及其机制。方法体外培养BMDC，并于第5天转染慢病毒载体Lv-RIG-1-RNA干扰(RNAi)(MOI＝100)，将其分为未成熟DC组，DC-绿色荧光蛋白(DC-GFP)组和DC-RIG-1-RNAi组，检测树突状细胞(DC)转染前后细胞表型[白细胞分化抗原(CD)40、CD80、CD86和主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅱ]和功能变化；建立小鼠同种异体胰岛移植模型，术前3 d和1 d受体分别通过尾静脉注射1×106个DC-RIG-1-RNAi、DC-绿色荧光蛋白(GFP)和100 μl磷酸盐缓冲液(PBS)，观察各组移植术后胰岛存活时间，于术后第7天收集并比较受体糖耐量、胰岛移植物的病理学改变、脾脏T细胞亚群含量的变化。所有数据使用SPSS 22.0软件进行统计学分析，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。结果Lv-RIG-1-RNAi组DC中等水平表达CD80、CD86，低水平表达CD40、MHC Ⅱ，脂多糖(LPS) 刺激后白细胞介素(IL)-12分泌水平[(135.4±7.3) ng/L]低于imDC组[(823.0±30.9) ng/L，t＝68.483，P<0.05]和DC-GFP组[(896.4±47.7) ng/L，t＝49.870，P<0.05]，差异均有统计学意义，IL-10分泌水平[(556.6±50.4) ng/L]高于imDC组[(279.4±66.2) ng/L，t＝10.535，P<0.05]和DC-GFP组[(291.8±65.6) ng/L，t＝10.122，P<0.05]，差异均有统计学意义，并且其抗原提呈功能被有效抑制，具有一定程度的未成熟属性。DC-RIG-1-RNAi组胰岛生存时间[(38.5±3.8) d]高于对照组[(22.0±3.1) d，t＝8.241，P<0.05]和DC-GFP组[(9.5±2.1) d，t＝16.361，P<0.05]，差异均有统计学意义。术后第7天，DC-RIG-1-RNAi组胰岛移植受体葡萄糖耐量较其他两组好，病理学检测结果提示DC-RIG-1-RNAi组胰岛活性更好。DC-RIG-1-RNAi组辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)比值(0.08±0.02)低于DC-GFP组(0.28±0.02，t＝11.670，P<0.01)和对照组(0.48±0.08，t＝20.110，P<0.01)，差异均有统计学意义。结论抑制RIG-1表达的DC表现出一定程度的未成熟表型和功能，保护小鼠胰岛移植物，诱导免疫耐受。

简介：摘要目的探讨抑制NLRC5调控CD4＋T细胞功能对小鼠移植物的免疫保护作用。方法体外培养、纯化和富集小鼠(购自中山大学动物实验中心)脾脏来源CD4＋T细胞，转染短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体NLRC5-RNA干扰(RNAi)-绿色荧光蛋白(GFP)；随机分为3组，分别为对照组、T细胞组和NLRC5-RNAi组，每组5只。建立小鼠胰岛移植和皮肤移植模型，术前回输已转染慢病毒的CD4＋T细胞，术后观察各组胰岛和皮肤移植物生存情况，并于术后第7天检测移植胰岛和移植皮肤外周血细胞因子白细胞介素(IL)-10和干扰素(IFN)-γ的表达水平，流式细胞术检测小鼠脾细胞内淋巴细胞亚群分化情况。组间差异采用t检验。结果移植术后NLRC5-RNAi组胰岛移植物葡萄糖耐受更好。NLRC5-RNAi组胰岛中位生存时间[(19.0±3.4) d]较对照组[(11.6±1.9) d，t＝5.156，P<0.01]和T细胞组[(10.0±1.4) d，t＝4.151, P<0.01]延长，差异有统计学意义。NLRC5-RNAi组皮肤移植物的中位生存时间[(15.4±3.8) d]较对照组[(8.0±0.9) d，t＝3.375, P<0.05]和T细胞组[(7.8±0.8) d，t＝3.848, P<0.05]延长，差异有统计学意义。外周血酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提示胰岛移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(344.0±4.1) ng/L]较其他组升高(t＝124.141，P<0.01)，IFN-γ表达量[(85.1±6.6) ng/L]较其他组降低(t＝7.633，P<0.05)，差异有统计学意义；皮肤移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(275.9±12.5) ng/L]较其他组升高；IFN-γ表达量[(96.6±2.5) ng/L]较其他组降低，差异有统计学意义(t＝7.490，P<0.01)；流式细胞术提示胰岛移植NLRC5-RNAi组脾脏细胞中辅助性T细胞(Th2)含量[(0.190±0.053)%]较其他组升高(t＝5.220，P<0.05)，Th1含量[(0.810±0.036)%]较其他组降低(t＝6.219，P<0.05)；皮肤移植NLRC5-RNAi组Th2含量[(0.130±0.012)%]较其他组升高(t＝21.060，P<0.01)，Th1含量[(0.180±0.026)%]较其他组降低，差异有统计学意义(t＝9.248，P<0.05)。结论抑制NLRC5基因表达后，CD4＋T细胞分化偏向Th2，表达Th2型细胞因子增多，一定程度上延长了移植物存活时间，对移植免疫耐受的诱导具有积极意义。