简介：摘要目的评价缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在氢抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞炎症反应中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞，按照随机数字表法分为4组(n＝24)：对照组(C组)、LPS组(L组)、富氢液＋LPS组(H＋L组)和富氢液＋LPS ＋HIF-1α抑制剂二甲氧基雌二醇(2ME2)组(H＋L＋M组)。L组加入LPS 1 μg/ml孵育6 h；L＋H组先加LPS，换培养基为0.6 mmol/L富氢液共孵育6 h；H＋L＋M组先给予2ME2 10 μmol/L孵育30 min，然后加入LPS和富氢液孵育6 h。采用Western blot法测定HIF-1α、Beclin-l、BNIP3和LC3的表达；采用ELISA法检测上清液TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度，采用透视电镜观察细胞自噬小体数量。结果与C组比较，L组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，巨噬细胞HIF-1α、Beclinl和BNIP3表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，自噬小体数量增多(P<0.05)；与L组比较，H＋L组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β浓度降低，巨噬细胞HIF-1α、Beclin-l、BNIP3表达上调、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增高，自噬小体数量增多(P<0.05)；与H＋L组比较，H＋L＋M组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度降低，巨噬细胞HIF-1α、Beclin-l和BNIP3表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，自噬小体数量减少(P<0.05)。结论HIF-1α介导细胞自噬激活参与了氢抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症反应的过程。

简介：摘要目的研究人去势抵抗前列腺癌(CRPC)中YES相关蛋白1(YAP1)与前列腺特异性抗原(PSA)的关系，探究YAP1对PSA的调控机制。方法用荧光素酶报告基因检测LNCaP和C4-2细胞过表达YAP1后PSA基因启动子区活性变化；用免疫蛋白印迹实验检测过表达YAP1基因对不同前列腺癌细胞系内PSA蛋白的影响，并观察沉默YAP1对C4-2细胞内PSA蛋白的影响；使用Q-PCR进一步验证在C4-2细胞内过表达YAP1基因对其PSA mRNA表达量的改变；使用免疫蛋白印迹实验探究YAP1对C4-2细胞内雄激素受体(AR)的作用。结果发现在CRPC中过表达YAP1后，luciferase实验发现C4-2细胞实验组和对照组比值平均值为3.17815892>2，P<0.001，Q-PCR检测所有过表达YAP1各基因片段后，发现实验组PSA mRNA测定值为2.306667，1.553333333，2.613333333，2.673333333均高于对照组1，且P<0.001，提示PSA表达量显著增高；western blot实验发现C4-2细胞过表达Yap1后，AR条带相比于对照组明显增强，提示YAP1过表达组细胞核内AR蛋白表达水平明显增高。结论YAP1可能在CRPC中正向调控PSA的表达，且有促进AR入核发挥作用的能力。