简介：目的：采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统，筛选与甲状旁腺素1型受体（PTH1R）相互作用的蛋白。方法：将全长P册JR基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵，用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTHIR和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中，检测Mell报告基因的表达，并进行相互作用的验证。结果：测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTH1R相互作用；根据对SNAPIN基因的功能分析，其可能与细胞内钙稳态的调控有关。结论：为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的机制提供了一定的线索。

简介：目的：研究SARS冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法：应用免疫共沉淀、GST—pulldown、BIACORE实验验证SARS—CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用，BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS—CoVN蛋白的亲和常数为Ko=4．3×10^-11。结论：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物，这为进一步探讨SARS—CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。

简介：生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是上世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,FancL(也叫Pog)的缺失是产生gcd突变小鼠的原因.FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物中的组分之一.在生殖细胞中,FANCL与GGN1和GGN3相互作用,而GGN1和GGN3蛋白的功能还不清楚.为了研究GGN3的功能,揭示更多的参与该过程的蛋白质,运用Clontech公司新开发的第三套酵母双杂交系统以GGN3为诱饵从成年小鼠睾丸cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白分子.发现了一个精子生成期间在睾丸中特异性高表达的基因Ggnbp2,免疫共沉淀分析表明,Ggnbp2编码的蛋白质产物GGNBP2在哺乳动物细胞中与GGN3特异相互作用.通过构建突变体,确定了GGNBP2蛋白与GGN3相互作用的区域.以上结果为揭示GGN3和GGNBP2在生殖发育中的功能、丰富生殖细胞发育的蛋白调控网络及其调控规律奠定了一定的基础.

简介：目的：研究SOX4和p53蛋白之间的相互作用。方法：应用GSTpull-down、免疫共沉淀实验验证相互作用。结果：GSTpulldown实验证实SOX4能结合GST-p53融合蛋白,但不能结合GST蛋白;免疫共沉淀实验也证明,SOX4与p53能在细胞内发生相互作用。结论：SOX4能与p53发生相互作用,为p53信号通路的研究提供了新的线索。

简介：ＳＡＭＤｓ是ＴＧＦβ家族的细胞内信号介导者。为了研究ＳＭＡＤ３的信号传递过程，我们以ＳＡＭＤ３为诱饵蛋白用酵母双杂交系统筛选与ＳＡＭＤ３相互作用的蛋白，发现ＣｙｃｌｉｎＢ可以与ＳＭＡＤ３发生相互作用，并在ＣＯＳ７细胞中证实了该相互作用。提示ＴＧＦβ可能通过ＳＭＡＤｓ与细胞周期素的相互作用来调节细胞周期的变化。

简介：生命中无时无刻不存在生物大分子之间的相互作用,其中包括核酸之间、核酸与蛋白质之间以及蛋白质之间的相互作用。以往研究蛋白质之间的相互作用通常采用生化技术,如偶联、免疫共沉淀等方法。1989年,Fields和Song创立了一种崭新的遗传学方法用于研究蛋白质之间的相互作用,即酵母双杂交系统(Yeast

简介：利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4的相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体的同源和异源相互作用的双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递的功能区在中间连接区,SMAD3的功能区在C末端。

简介：利用同源模建方法预测了t-PAK1区的三维结构。通过结构叠合确定了t-PAK1、K2区,纤溶酶原K1、K4区及UKK区的赖氨酸结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在t-PAK2区以及纤溶酶原K1、K4区与纤维蛋白裸露的赖氨酸之间存在明显的静电势互补和疏水面契合。确定了影响Kringle区结合口袋与赖氨酸亲和的重要氨基酸,分析了t-PAK1区、UKK区不能结合赖氨酸的原因,由此设计了具有赖氨酸亲和力的新型t-PAK1区及UKK区突变体。利用模拟残基突变技术预测了突变体的结构变化,分析了突变后t-PAK1区及UKK区与赖氨酸亲和力的变化,初步在理论上肯定了设计方案的合理性。

简介：人工合成了芋螺毒素SO3的基因片段,通过链延伸方法获得了SO3的全长基因.在此基础上,将SO3基因插入到含抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因的pTIG-Trx表达载体中,构建含抗大鼠转铁蛋白受体单链抗体和SO3融合基因的重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)和Origmia(DE3)/DsbC并得到了表达,该融合蛋白主要以包涵体形式存在.为进一步研究芋螺毒素SO3跨血脑屏障转运和治疗作用奠定了基础.

简介：Toll样受体在对抗外来病原微生物的天然免疫应答中发挥中心作用.新发现的一种分子识别模型受体Toll样受体-9(TLR9),能特异性识别CpGDNA并起动信号转导级联反应,在不同种类中的TLR9具有对序列识别的特异性.本文概述国外在TLR9识别作用机制和生物学活性研究中已取得的进展,并提出了今后研究的发展方向.

简介：泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内降解蛋白质的重要途径，对于维持细胞的正常功能起着重要作用。雌激素受体α（ERα）作为转录因子，与乳腺癌的发生及进展关系密切，抑制ERα的功能已经成为治疗乳腺癌的主要策略之一。目前发现泛素-蛋白酶体途径能够促进ERα降解，影响其转录。简要综述了泛素-蛋白酶体途径对雌激素受体α的转录及降解调控的研究进展。

简介：HLA-B27阳性患者人群中,内质网氨基肽酶1（ERAP1）基因多态性与强直性脊柱炎（AS）密切相关。内质网中,ERAP1可有效剪切抗原肽,使其成为适合HLA-Ⅰ类分子提呈的寡肽。ERAP1基因多态性决定N端抗原肽修剪功能的正常与否以及HLA-B27分子的稳定表达。细胞水平的研究表明,不同ERAP1等位基因组合对于抗原肽底物的修剪能力决定了B27分子能否在细胞表面稳定表达。但是,功能型与功能异常型ERAP1如何影响HLA-B27抗原肽加工、B27稳定表达,以及如何影响AS疾病进程和免疫病理学改变等均未得到阐明。

简介：目的：构建人血清白蛋白（hSA）与小鼠乳清酸蛋白（mWAP）调控序列的杂合基因座。方法与结果：在pBR322载体上连入预先无痕连接的3对同源臂,利用基于Red同源重组系统的缺口修复（gap-repair）技术,分别对8kb的mWAP基因座3′调控区、16kb的hSA基因组编码序列及13kb的mWAP基因座5′调控区进行连续3次基因抓捕,最终将全长37kb的乳蛋白杂合基因座构入pBR322载体;通过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,确定mWAP基因座中的编码序列被精确地置换为hSA的基因组编码序列。结论：构建了整合有mWAP-hSA杂合基因座的pBR322载体,为研究杂合基因座在乳腺中的表达效果及置换型基因座表达的可行性提供了数据。

简介：目的：在类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜（FLS）细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2（DDR2）的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法：首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RAFLS细胞侵袭能力的影响。结果：Ⅱ型胶原刺激引起RAFLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示FcDDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RAFLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RAFLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论：波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RAFLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RAFLS细胞的侵袭。

简介：雄激素受体（AR）信号通路在前列腺癌的发生、进展和转移中发挥着重要作用,但AR介导组织对雄激素的特异应答是通过与其相互作用的AR共调节因子共同完成的,许多AR共调节因子的功能已被广泛研究。简要综述了目前发现的部分AR共调节因子在调节AR转录活性及前列腺癌发生、进展中的生物学作用。

简介：绿脓杆菌是烧伤及外科手术感染的主要病原菌之一,而绿脓杆菌外毒素A(PEA)是该菌的最主要的毒力因子之一,极微量的PEA便可引起肝、肾等组织细胞死亡,进而导致肝、肾等多器官功能衰竭,这是临床上绿脓杆菌感染后高死亡率的主要原因。同时,PEA还严重影响创口的愈合。目前临床上对于绿脓杆菌感染的控制以及对PEA毒血症的防治尚无有效的方法与手段。本实验是利用基因工程手段克隆表

简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

简介：ＳＭＡＤ４蛋白在嗜甲醇酵母中表达后，纯化鉴定。将纯化产生与两株胰腺癌细胞株共同孵育，用ＤＮＡ序列梯图谱和ＴｄＴ末端标记两种方法考察了此蛋白对体外培育的胰腺癌细胞生长的作用。结果显示ＳＭＡＤ４对胰腺癌细胞株ＳＷ１９９０有明显的促调亡作用，而对胰腺癌细胞株ＣａｐａｎⅡ未见这种作用。

简介：在真核生物细胞中,许多具有生物活性的多肽和蛋白是在其分泌过程中由前体蛋白经内切蛋白酶切割后激活形成的.弗林蛋白酶(Furin)就是这个内切蛋白酶家族重要成员之一,它可以识别剪切多种蛋白质,如生长医子、血清蛋白、基质金属蛋白酶、受体、病毒囊膜蛋白和细菌外毒素等.近年来Furin得到了迅速而广泛的研究,本文简介了它的表达与加工运输、生物学功能、与病毒侵染的关系,以及它的抑制剂.

简介：核受体是一类高度保守的配体依赖性转录因子家族，在哺乳动物发育、繁殖、免疫应答、心血管功能、组织生长、肿瘤形成、外源物清除及糖类和脂质代谢等生理过程中发挥重要作用。机体对外源物质的清除主要是由孕烷X受体等核受雄介导的。孕烷X受体最早是作为外源物感受器而被研究的，可以被大多数亲脂性药物等外源性化合物及一些内源性化合物如胆汁酸等结构差异很大的配体激活，进而与视黄醇类X受体等形成异源二聚体，结合在ER6、XREM等DNA元件上，调控下游靶基因（包括一相代谢酶、二相结合酶及药物转运体等基因）的表达。此外，孕烷X受体在能量代谢和免疫反应中也有重要作用，参与某些代谢疾病的发生发展，且已在动物模型中被证明是Ⅱ型糖尿病、血脂异常、肥胖症和动脉粥样硬化等代谢疾病治疗的有效靶标。我们主要就其发现、结构、组织分布、作用方式、自身表达的调节等方面的最新研究进行综述。