简介:β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与Cas9mRNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。
简介:去年这一年,我们依然在各自的生活中辛勤奔波,依然见缝插针地走进旷野,或者像候鸟一样满世界飞翔,短暂停留后又赶赴下一场约会……但无论我们有多忙,走得有多远,却始终被对自然的热爱所温暖,被一种神秘的力量召唤。
简介:JointlyhostedbytheMinistryofScienceandTechnologyandtheU.S.EnvironmentalProtectionAgency,the1stChina-USWorkshoponEnvironmentalS&TCooperationwasheldinBeijingfromApril1to3,2008.China-USWorkshoponEnvironmentalS&TCooperationlastedforthreedaysandincludedkeynotespeech,paralleldiscussionandvisittokeylaboratory.ExpertsfrombothcountriesgaveintroductionstonationalenvironmentalS&TpoliciesandR&Defforts,andheldin-depthdiscussionsondrinkingwatersecurity,newtechnologiesandenvironmentaltechnologyverification(ETV)andgreen
简介:Inordertodefinethemortalitycriteriaofplanarianobjectively,acasestudyofDugesiajaponicaexposedto1-octyl-3-methylimidazoliumbromide([C8mim]Br)wasperformedfollowedbyarecoveryculture.Theresultsshowedthatdefiningplanarianmortalityinlightofitsbodydisintegrationwasappropriate.Ifthedisintegratedtissueofaplanarianwasmorethan1/4ofitsbodylength,itwouldcompletelydegenerate.However,aplanarianwouldregeneratethelosttissueandreturntonormalafterafewdays’recoverycultureifthedisintegratedpartwaslessthan1/4ofbodylength.Therefore,weproposetousebodydisintegrationastheendpointofplanarianmortality,i.e.,1/4bodylengthdegeneratedisthecriticalthresholdofmortalityandsurvivalofplanarianswhenexposedtotoxicants.Thiscriterioncouldbeadaptedinthestandardizationoftestingprotocolsandcomparabilityofacutetoxicitytestorothertoxicologicalresearchusingplanarianasthetestanimal.
简介:铬(chromium)是一种在工业生产过程中广泛使用的重金属,进入人体后可导致急慢性中毒,具有神经毒性、基因毒性、致癌性和免疫毒性。了解六价铬(hexavalentchromium,Cr(Ⅵ))的细胞毒性,进一步探究Cr(Ⅵ)的毒作用机制,可为防治Cr(Ⅵ)对人群健康的损害提供实验依据。电压依赖性阴离子通道蛋白1(voltage-dependentanionchannel-1,VDAC1)参与调控线粒体外膜通透性,影响细胞凋亡;同时VDAC1也是BCL-2家族的重要结合位点,它可与BAX/BAK相互作用形成孔道,使线粒体内的凋亡相关蛋白,如细胞色素C等,进入胞浆,引起细胞凋亡。但VDAC1影响细胞凋亡的确切路径与分子机制,目前尚未完全研究清楚。使用L02人正常肝细胞作为实验对象,通过慢病毒包装法建立VDAC1低表达细胞系,检测在相同浓度Cr(Ⅵ)处理的条件下,与非染毒组相比,不同受试细胞的生存率、凋亡情况、活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ROS)生成量、线粒体功能和凋亡诱导因子(AIF)的变化情况是否存在差异。结果表明,与VDAC1正常表达的细胞相比,VDAC1低表达组在Cr(Ⅵ)染毒的情况下,细胞生存率升高,凋亡率下降,细胞内ROS生成量减少,MPTP活性增加不明显,胞浆内细胞色素C(CytochromeC,CytC)和AIF含量降低。上述研究结果表明VDAC1参与了由六价铬诱导的线粒体依赖性肝细胞凋亡,并且抑制VDAC1的表达可减轻因Cr(Ⅵ)暴露而引起的L02肝细胞损伤。