简介：

简介：目的构建HCV感染相关干扰素IFNL4蛋白融合His标签的真核表达载体,并将其在293-T细胞中表达后进行初步纯化鉴定。方法采用PCR法从含人IFNL4基因序列的质粒pFC14A-p179中扩增出目的片段,将其定向连接到pcDNA3.1-His真核表达载体中,经酶切和测序鉴定正确后,以脂质体法转染293-T细胞,培养72h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体行蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-IFNL4-His,转染后经Westernblot法检测显示20kDa位置有目的蛋白条带,大小与目的蛋白相符。结论我们成功构建了HCV感染相关IFNL4与His标签融合的真核表达载体,体外转染293-T细胞后鉴定其工作良好,为后续对干扰素在HCV感染及抗肝纤维化治疗中的研究奠定了基础。

简介：背景：研究表明GEF-H1能激活Rho蛋白，与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的：构建人pEGFP-GEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法：在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物，构建重组质粒pEGFP-GEF-H1，并转染结肠癌HCT116细胞，以转染空质粒和未转染的细胞分别作为空质粒组和空白对照组。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GEF-H1mRNA和蛋白表达水平。结果：成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体，测序结果表明序列正确。转染重组质粒pEGFP-GEF-H1后，荧光显微镜下可见较强的绿色荧光，GEF-H1mRNA和蛋白表达水平均较空质粒组和空白对照组明显上调。结论：体外成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体，且转染结肠癌HCT116细胞后高表达GEF-H1，为进一步探讨结肠癌与GEF-H1的关系提供了必要的实验材料。

简介：目的构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现库。方法分离大肠癌患者外周血淋巴细胞，提取淋巴细胞总RNA，逆转录成cDNA。用相应引物进行PCR，扩增出轻链和重链Fd段基因。经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接，再经电穿孔转化大肠杆菌XLl-Blue菌株，将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中。结果从分离出的淋巴细胞中提取到高质量RNA．RT-PCR分别扩增出约680bp大小的K、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化，成功地构建了人源性Fab抗体基因库，库容量达2．1×10^7。轻链K、λ和重链Fd基因均插入pComb3的重组率为50％。结论构建了大肠癌患者自然致敏抗体Fab段噬菌体呈现库，为筛选大肠癌相关抗体打下基础。

简介：目的构建表达针对HBsAg小发卡RNA（shRNA）的重组腺相关病毒载体,以观察该病毒在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法将表达针对HBsAg的shRNA定向克隆到pAAV/U6-hrGFP质粒中,获得重组表达质粒（pAAV-shHBs-hrGFP）;采用磷酸钙转染法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染AAV293细胞,进行rAAV-shHBs-hrGFP重组病毒包装。收获病毒感染HepG2.215细胞;采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平。结果酶切鉴定、测序结果表明,pAAV-shHBs-hrGFP载体成功构建。包装收获的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215细胞,并且可以抑制HBsAg和HBeAg的表达。结论制备的rAAV-shHBs-hrGFP病毒载体能够抑制HBV在体外的抗原表达。

简介：

简介：目的：利用乳链菌穿梭载体构建肿瘤特异标记表达系统，为肿瘤特异性口服疫苗的研究开辟一个新领域。方法采用体外基因拼装的方法得到PEG-3启动子，经酶切鉴定并测序验证。然后利用基因克隆技术，将PEG-3启动子、EGFP、PolyA亚克隆到乳链菌载体pTRKH2中，成功得到肿瘤特异标记质粒pTR-peg3-egfp。最后，转染肿瘤及非肿瘤细胞初步验证其肿瘤特异性标记能力。结果通过PCR基因拼装得到460bp左右目的片段，测序结果与设计完全一致。获得了肿瘤特异标记的乳链菌穿梭质粒pTR-peg3-egfp，并在细胞水平得到初步验证。结论PEG-3启动子介导的乳链菌穿梭质粒具有肿瘤特异性，这一实用新颖的系统将为研究乳链菌疫苗应用于肿瘤标记及靶向治疗奠定基础。

简介：目的建立c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞（hUMSC）,为治疗肝衰竭作为种子细胞.方法培养hUMSC,经流式细胞技术检测细胞表面表型,转染c-Met慢病毒载体,在荧光显微镜下观察转染效率,确定最佳多重感染复数（MOI）.采用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达c-Met的hUMSC细胞系,采用Western-blot法检测细胞c-met蛋白表达量.结果P5代细胞高表达CD44、CD90和CD105抗原,不表达CD31、CD45和CD34相关造血细胞抗原,符合人脐带间充质干细胞的特性;构建成功的c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞最佳MOI=80,经嘌呤霉素筛药,在荧光显微镜下观察发现荧光阳性率为100%,且经Western-blot法检测证实该细胞过表达c-Met蛋白.结论成功构建过表达c-Met基因的脐带间充质干细胞,为进-步实验打下了基础.

简介：幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)是上消化道疾病的主要致病菌,它的感染不但与B型胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系,而且与非溃疡性消化不良,MALT淋巴瘤和胃癌也有重要关系,并已被世界卫生组织列为胃癌等肿瘤的相关致病菌[1,2,3].Hp在我国普通人群的感染率较为高50%～80%[4].随着分子生物学技术的发展,幽门螺杆菌致病机理研究的进一步深入,有效抗原的筛选,以及基因工程菌株构建的运用,将预防和根治Hp的感染成为了可能.因此,本实验以Hp特快特异性基因--18kDa外膜蛋白基因,经PCR扩增,构建重组载体,为在原核生物表达创造条件,同时为疫苗的研究以及快速诊断试剂盒的开发奠定基础.

简介：目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com（含有CTGF和TIMP-1）,进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF＋TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组（Com组,20±2%,P〈0.05）;在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF＋TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%（P〈0.05）.结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高.

简介：院内感染是指住院病人入院时存在的感染是以前在医院获得的，或与医院接触后发生的感染。目前院内感染已成为医学界的重要研究课题。研究表明，医护人员手上携带的细菌包括一过性和定居的细菌与院内感染密切相关。手是院内感染传播的主要媒介，在诊疗护理过程中医护人员的手直接接触病人，极易引起交叉感染，为此笔者于2001-01／2001-12对医护人员洗过的手进行采样，52份，合格者38份(标准细菌数<8个/cm2)，占73．1％，不合格者14份，占26．9％。

简介：细胞内钾占体内总钾量的98％,其中3/4存在于肌细胞内。细胞外液中钾仅占2％,其浓度为3.5～5.0mmol/L,主要以离子状态存在。人体内钾主要来自食物,多在小肠吸收,90％由肾排泄,其余10％主要由大肠排泌,少量从汗液排出。肝硬

简介：铁是人体必需的微量原素之一,正常人体内含铁3～5g(平均4.5g),其中2/3分布于红细胞的血红蛋白中,约1/3以铁蛋白(ferritin)、含铁血黄素(homosiderin)的形式存于肝、脾、骨髓等组织的单核-巨噬细胞系统。正常人血清铁为14.3～26.9μmol/L,铁蛋白男性为15～200μg/L,女性为102～150μg/L。血清转铁蛋白含量为2～4g/L,转铁蛋白饱和度为33％～35％。铁的生理功能不仅参加制造血红蛋白和肌红蛋白,而且铁与氧的运输和生物氧化反应关系亦甚密切,还参与细胞色素氧化酶、过氧化物酶等的合成,电子传递

简介：硒是人体中一种必要的微量元素,具有二价、四价和六价三种异构体。NcKeeban等指出硒在人胚胎发育至成年时期均有重要作用,缺硒可产生心、肝、肾和肌肉等多种组织病变,硒过多则可导致硒中毒。一、硒的主要生理功能(一)参与谷胱甘肽过氧化物酶的合成和抗氧化作用硒是谷胱甘肽过氧化

简介：锌是人体最重要的微量元素之一,有200多种代谢酶的活性需要锌的存在。成人锌的日需要量15mg。人血清锌正常值为7.65～22.95μmol/L。一、锌的生理作用锌是碳酸酐酶、胸腺嘧啶核苷激酶、DNA和RNA聚合酶、醛缩酶、脱氢酶、肽酶和磷酸酶的重要组成部分,对细胞呼吸及蛋白质和核酸的生物合成及分解代谢起着重要作用。锌具有肝保护作用,这与其消除自由基和膜稳定作用有关。谷胱甘肽是动物细胞生物膜上最重要的巯基(SH)化合物之一,有

简介：宫外孕由著名的阿拉伯外科医师Ablucasis于公元前963年首先报道，由于统计方法的不同，其结果有很大的差异，无论用什么统计方法，宫外孕的发病率在不断地增加是一个不争的事实。根据国外报道：绝育后发生的妊娠中15％～20％为宫外孕。用紧急避孕药者，宫外孕发病率增加。也有些作者报道，人工流产可以增加宫外孕的危险性。传统的观念认为，宫外孕的病因可分为两类：一类为影响受精卵到达宫腔的因素，另一类为孕卵的内在因素。

简介：一、铜的生理作用铜是人体必需的微量元素之一,是铜兰蛋白、钢锌—超氧化物歧化酶（cu2n-SOD）、细胞色素氧化酶,过氧化酶、酪氨酸酶、单胺氧化酶、抗坏血酸氧化酶等的重要组成成分,影响线粒体能量代谢与细胞生长。铜和血浆铜兰蛋白参与造血过程,促进铁的吸收、运输和利用,加速红细胞成熟与释放。在正常情况下血清铜含量极微,仅占全身铜总量的5％～10％。机体缺铜时可出小细胞性贫血、中性粒细胞减少、骨质疏松、脑组织萎缩、神经元减少,神经发育受阻和嗜睡,皮肤和毛发脱色,甚至形成白化病。过多的铜可催化O2与H2O2作用产生毒性更大的OH,加重活性氧对组织的损害。铜还具有抗生育作用,使精子活力下降。

简介：在过去的一个世纪里,胃癌是威胁人类生命健康最常见的恶性肿瘤之一.在世界范围内,其发病率和死亡率仅次于肺癌.对胃癌的研究,尤其是关于胃癌的预防及早期诊断、早期治疗的研究,一直是人们关注的焦点.

简介：背景：直肠前膨出（RC）是一种多见于女性的肛肠疾病,与功能性排便障碍（FDD）的关系目前尚不明。目的：研究伴RC的FDD患者肛门直肠压力和感觉功能的变化,探讨RC与FDD的关系。方法：选取28例伴RC的FDD患者并分为伴轻度RC的FDD组和伴中-重度RC的FDD组,设不伴RC的FDD患者作为对照。所有患者行球囊排出试验、肛门直肠压力和感觉功能检测,并按照罗马Ⅲ标准将FDD患者进一步分为排便协同失调（F3a）和排便推进不足（F3b）两种亚型。结果：除伴中-重度RC的FDD组直肠排便收缩压显著低于不伴RC的FDD组外（P〈0.05）,其余各组间直肠静息压、肛管静息压、肛管最大缩榨压、直肠排便收缩压、肛门括约肌松弛率以及初始感觉容量、产生便意容量和最大耐受容量均无明显差异。与不伴RC的FDD组相比,伴RC的FDD组中F3b亚型比例显著升高（P〈0.05）。结论：伴中-重度RC的FDD患者直肠排便收缩压明显降低,伴RC的FDD患者多表现为F3b亚型,提示RC与FDD的发病可能具有相关性。

简介：Ghrelin是由Kojima等于1999年发现的一种28肽，该物质最初由大鼠胃组织提取物中分离得到，是生长激素促分泌物受体（growthhormonesecretagoguereceptor,GHSR）的天然内源性配体，能促进生长激素（GH）释放。进一步的研究表明．ghrelin主要来源于胃肠道，也可由下丘脑、垂体和多种外周组织器官产生。其受体在体内广泛分布，具有调节GH分泌、摄食和能量平衡，影响神经内分泌以及胃肠功能、心血管系统、记忆、睡眠等多种生物学作用，是近年来研究的热点。