简介:目的建立-种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法(C法),洗脱效率能达到75%-93%;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度(10^0-10^-5),r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX—100法更省时,更简便,经济性更好。采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7%~104.0%且灵敏度达到1cfu/ml。结论c法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。
简介:本报记者上海讯:2014年3月24日,中国食品添加剂和配料协会第五届会员代表大会在上海喜来登由由酒店隆重召开.中国轻工业联合会会长步正发,中国轻工业联合会副会长钱桂敬,中国轻工业联合会副会长陶小年,国家食品药品监督管理总局食品监管—司正局级稽查员李玉家,国务院国有资产监督管理委员会行业协会办公室主任张涛,中国食品添加剂和配料协会理事长齐庆中,副理事长兼秘书长薛毅,副理事长杜雅正,协会名誉理事长吕坚东,中国轻工业联合会国际合作部主任、中国贸促会轻工行业分会会长王本和,黑龙江省食品和药品监督管理总局副局长张守文,北京工商大学副校长、中国工程院院士孙宝国教授,中国农业大学食品科学与营养工程学院院长罗云波教授,协会副理事长单位、常务理事单位、理事单位,协会各专业委员会秘书长、专家,以及海内外会员单位和FIC2014部分参展商代表共230人出席了大会.