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40 个结果
  • 简介:植物黄绿叶突变体不但在植物光合作用、叶绿素合成代谢途径、叶绿体遗传分化与发育系列基础研究中具有重要作用,而且还可以作为标记性状应用到育种研究上。本研究以前期化学诱变得到番茄黄绿叶突变体为材料,其主要表型与光合作用特征特性进行鉴定分析,发现突变体从第1片真叶开始变黄,植株矮小,叶片叶绿素含量净光合速率相对野生型极显著降低,叶绿体类囊体片层结构畸形。突变体野生型进行正反交,分析其遗传方式。发现其F2群体正常叶与黄绿叶分离比为3∶1,表明黄绿叶由单个基因突变引起隐性性状。本研究为后期基因定位研究奠定了基础。

  • 标签: 番茄 黄绿叶突变体 表型鉴定 遗传分析
  • 简介:荧光定量PCR(qRT-PCR)研究分子生物学中基因表达种新型核酸定量技术,具备快速高效、特异性强、重复性好、灵敏度高自动化程度高等优点,因而根据相应实验材料选择适宜内参基因对于提高qRT-PCR分析准确性显得尤为重要。Actin基因表达范围广且表达稳定,常常作为内参基因应用于qRT-PCR表达分析中。前期利用转录组测序(RNA-seq)技术获得了西葫芦低温弱光转录组数据库,本研究从中筛选到1条长达2543bpcDNA,并其进行了序列分析。生物信息学分析结果表明,该序列包含1开放读码框(ORF),大小为2064bp,预测编码氨基酸数为682,理论分子大小约为79.67kD,蛋白质电点为6.28。WolfPsort分析发现,CpActin蛋白亚细胞定位于细胞核中。MotifScan分析显示,CpActin蛋白质氨基酸序列207~406位558~682位分别为Actin中端C端保守区域。同源性分析表明,基因编码蛋白质与同为南瓜属中国南瓜印度南瓜同源蛋白相似性达到99%,具有高度保守性。基于所获得基因全长cDNA序列,设计了基因ORF全长引物CpActin-F、CpActin-R,经PCR扩增得到条特异、明亮条带,经测序验证,序列与RNAseq数据库cDNA序列致,基因命名为CpActin,GenBank登录号为MH211008。在此基础上,设计了荧光定量PCR引物CpActin-Fq、CpActin-Rq,分析显示,该引物具有较高特异性扩增效率,且在西葫芦不同组织(根、茎、花果)不同胁迫处理[正常(25℃,300μmol/m^2·s)、低温处理(4℃,300μmol/m^2·s)、弱光处理(25℃,80μmol/m^2·s)、低温弱光处理(4℃,80μmol/m^2·s)、强光处理(25℃,2000μmol/m^2·s)高温处理(38℃,300μmol/m^2·s)]叶片中均能稳定表达,适合在西葫芦基因qRT-PCR表达分析研究中作为候选内参基因。

  • 标签: 西葫芦 内参基因 CpActin 表达分析
  • 简介:InDel在基因组中分布密度仅次于SNP,可作为动植物群体遗传分析、分子辅助育种研究领域有效分子标记。花生世界范围内重要油料作物之。目前,花生栽培种全基因组已经公布,为准确挖掘花生基因组信息提供了重要参考。本研究通过169份花生核心种质GBS(Genotyping-by-sequencing)测序比对,共获得大小分布在1~14bp范围内10401InDels。染色体Arahy.16上分布InDels最多,达741;而在染色体Arahy.08上分布最少,有263。参考基因组注释信息,仅有1167InDels分布在功能基因相关区域。经GO注释,InDel分子功能主要包括催化活性(catalyticactivity)结合(binding);生物过程主要涉及代谢过程(metabolicprocess)、单组织过程(single-organismprocess)细胞过程(cellularprocess)。经KEGG通路分析发现,InDels所在基因区域功能主要与代谢相关。本研究开发出全基因组水平InDel标记,并做了相应功能分类注释,为进步分子验证利用提供丰富基因资源。

  • 标签: InDels检测 InDels分布 功能分析
  • 简介:目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内响应和变化。方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内线粒体内钙离子相对浓度2种钙探针cyto-GCaMP64mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内表达情况;在表达2种钙探针细胞培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP响应。结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上细胞表达了对应钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3~6s)升至10倍,200s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)时间稍滞后(5~8s),并且回落更慢,300s时至1.5倍。在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理实验组,上述胞浆钙线粒体钙浓度上升不明显。结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激细胞实验体系,为进步深入探究ATP危险信号导致细胞炎性损伤机制奠定了基础。

  • 标签: 基因编辑钙探针 ATP 钙稳态 钙瞬变 线粒体钙 胞浆钙
  • 简介:【目的】水椰八角铁甲椰心叶甲均为棕榈科植物重要入侵害虫,两者外部形态、取食部位危害特征相似。研究它们寄主选择性有助于了解这2种害虫扩散成灾机制。【方法】在室内用椰子银海枣2种寄主植物分别饲养水椰八角铁甲椰心叶甲,研究在不同寄主植物上水椰八角铁甲椰心叶甲存活率、产卵率、发育历期以及这2种害虫不同寄主植物选择性。【结果】水椰八角铁甲在2种寄主上存活率差异显著,除了卵期蛹期之外,幼虫期各虫态在银海枣上存活率明显比在椰子上存活率高;椰心叶甲在椰子上存活率高于银海枣,各虫态平均存活率分别为95%86%。取食银海枣水椰八角铁甲达标准卵量概率为0.23,取食椰子产卵,无法完成整个世代;取食椰子椰心叶甲达标准卵量概率为0.86,取食银海枣产卵,也无法完成整个世代;水椰八角铁甲取食银海枣完成世代实验种群趋势指数为12.55,椰心叶甲取食椰子完成世代实验种群趋势指数为66.55。【结论】水椰八角铁甲椰心叶甲分别对银海枣椰子这2种寄主植物具有明显选择性。在海南椰子树数量远远超过银海枣,该实验结果在定程度上解释了椰心叶甲在海南岛广泛分布而水椰八角铁甲只是零星发生原因。

  • 标签: 水椰八角铁甲 椰心叶甲 寄主植物 选择性
  • 简介:目的:以角鲨烯、山梨醇、吐温为组分,在琥珀酸缓冲液中混和甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白制备复合佐剂Nano-fla,评价该佐剂人二倍体狂犬疫苗免疫效果安全性。方法:以人二倍体细胞制备狂犬灭活疫苗为抗原,BALB/c小鼠设置PBS对照组、全剂量疫苗组、半剂量疫苗组、低剂量佐剂组(含半剂量抗原+5μg鞭毛蛋白)、中等剂量佐剂组(含半剂量抗原+10μg鞭毛蛋白),免疫程序为在0、3、7d肌肉注射,并在首针免疫后第7、14d尾静脉采血分离血清,通过快速免疫荧光灶抑制实验检测中和抗体,通过酶联免疫斑点实验检测细胞因子水平。结果:首针免疫后第7d,中等剂量佐剂组中和抗体达保护效力水平,显著高于全剂量疫苗组低剂量佐剂组;第14d时中等剂量佐剂组IgG抗体浓度显著高于全剂量疫苗对照组;第14d中等剂量佐剂组与全剂量疫苗组相比,分泌IFN-γIL-4淋巴细胞数量显著增加。结论:复合佐剂Nano-fla应用到狂犬疫苗中,能有效刺激小鼠体液免疫细胞免疫应答,更早地产生中和抗体,且能有效降低抗原用量,具有潜在应用价值。

  • 标签: 鞭毛蛋白 狂犬病疫苗 佐剂
  • 简介:目的:从污染环境中分离耐低温石油降解菌,并其降解特性进行研究。方法:采用摇瓶富集培养和平板划线分离方法,得到株能以原油为碳源、能源生长细菌菌株,采用分子生物学方法该降解菌进行初步鉴定。结果:从天津大港油田污染土壤水体中分离到株耐低温石油降解菌DSY171,该菌株能够在10℃条件下,以石油为惟碳源生长。经过其形态特征、生理生化及16SrDNA序列分析,初步鉴定该菌株归属红球菌属。菌株DSY171在低温条件下(10~15℃)12d石油降解率显著优于常温条件(20~30℃),原油降解率为60%左右;菌株DSY171pH适应范围较广,初始pH值为6~9时均能代谢生长,但在偏碱性环境下(pH7~9)代谢生长好于偏酸性环境(pH6~7)。除了降解石油外,菌株DSY171柴油、食用油不同碳源也均能够降解代谢,具有碳源利用广谱性。结论:耐低温石油降解菌DSY171分离及其降解特性研究,为生物学方法解决低温环境石油污染问题提供了高效菌种,在环境微生物学理论研究实践应用中具有意义价值。

  • 标签: 生物降解 低温 石油烃 红球菌
  • 简介:目的:探讨尼古丁在诱导小鼠肺泡巨噬细胞自噬及肺炎发生中作用。方法:通过碘化丙啶(PI)/Hoch.est33258染色法检测尼古丁诱导巨噬细胞MH-S死亡;通过Western印迹电子透射显微镜检测尼古丁诱导MH-S细胞自噬发生;采用中性红摄取实验检测尼古丁处理后巨噬细胞吞噬能力;通过攻毒实验检测尼古丁诱导肺炎。结果:不同浓度尼古丁作用下PI染色死细胞呈上升趋势;LC3BⅡ蛋白表达具有尼古丁剂量依赖性,并且1μmol/L尼古丁能够增强LPS预刺激MH-S细胞自噬发生。电子透射显微镜结果显示在1μmol/L尼古丁作用下,细胞内自噬体数量增加;MH-S中性红摄取能力与尼古丁浓度剂量呈负相关性;尼古丁能够诱导小鼠发生肺炎,并降低小鼠体重。结论:尼古丁能够增强肺泡巨噬细胞自噬水平,并且可以诱导肺炎发生,有助于进步研究吸烟与肺炎关系。

  • 标签: 尼古丁 巨噬细胞 细胞自噬 肺炎模型
  • 简介:【目的】紫茎泽兰种世界性恶性入侵杂草,侵入我国后迅速扩散至多个省市,严重阻碍了当地农、林、牧业发展。研究丛枝菌根真菌紫茎泽兰生长繁殖影响,解析土壤中丛枝菌根真菌在紫茎泽兰入侵、传播扩散过程中作用,能为开展紫茎泽兰防控工作提供参考。【方法】通过盆栽实验,测定接种丛枝菌根真菌紫茎泽兰株高、叶片数、总叶面积、节间距、地径,并统计单株花序数、单花序种子量、种子量、种子千粒重、含水率、发芽率、发芽势、发芽指数。【结果】丛枝菌根真菌紫茎泽兰株高、地径有极显著影响(P<0.01),接种丛枝菌根真菌后,紫茎泽兰单株花序数、单花序种子数、总种子量分别增加了5.03、1.51、7.64倍;种子长度、宽度、含水率、发芽率、发芽势、发芽指数分别增加了15.24%、23.08%、19.46%、29.22%、391.01%、183.56%(P<0.05)。【结论】丛枝菌根真菌可显著促进紫茎泽兰生长,控制丛枝菌根真菌数量可有效抑制紫茎泽兰生长,并抑制紫茎泽兰花序数、种子量及种子生命力,降低其扩散蔓延速度。

  • 标签: 紫茎泽兰 丛枝菌根真菌 生长 繁殖
  • 简介:【目的】随着香蕉枯萎病菌4号生理小种热带型(简称FocTR4))在云南入侵、传播蔓延,云南香蕉产业产生严重威胁。通过实时荧光定量PCR分析蕉园定植香蕉后7月内土壤中枯萎病病原菌TR4含量动态变化,明确不同香蕉品种大田抗性表现以及不同肥料防控效果,为枯萎病防控提供技术参考。【方法】选用巴西蕉、桂蕉1号、南天黄自主选育云蕉1号为供试品种开展田间试验,设置虾肽有机肥+虾肽特护+虾肽果叶康(简称:虾肽有机肥处理)、常规有机肥+微生物制剂(简称:微生物处理)常规有机肥(简称:对照)3处理,调查4品种在4时间段枯萎病发病率3种肥料防治效果。【结果】在月平均枯萎病病原菌TR4含量均超过2000拷贝土壤条件下,4品种发病率在3施肥处理中均表现出差异性,南天黄、云蕉1号发病率与其他2主栽感病品种发病率差异达显著水平;3种施肥处理间发病率达显著差异,发病率从高到低表现为对照>虾肽有机肥处理>微生物处理。【结论】施用微生物制剂降低枯萎病发病率起作用。南天黄抗病性较强,云蕉1号也表现出较强抗性,但还有待进步改良提高抗性。

  • 标签: 香蕉枯萎病4号生理小种热带型 发病率 品种 微生物制剂
  • 简介:【目的】为持续有效防控白背飞虱,研究云南东部白背飞虱种群常用5种杀虫剂敏感性及药剂田间防治效果。【方法】采用室内稻茎浸渍法测定白背飞虱种群5种杀虫剂敏感性,同期通过田间小区试验评价5种杀虫剂对白背飞虱种群防治效果。【结果】与敏感种群比较,噻虫嗪、噻嗪酮、吡虫啉、吡蚜酮毒死蜱滇东白背飞虱种群LC50分别为0.208、0.459、0.608、3.108、1.256mg·L-1,抗性倍数分别为2.2、10.4、5.6、6.5、5.3倍;白背飞虱噻虫嗪无抗性,吡虫啉、吡蚜酮毒死蜱为低水平抗性,噻嗪酮为中等水平抗性;5种杀虫剂药后1、510d对白背飞虱种群田间防控效果均有显著差异。除了吡蚜酮外,其他药剂防效均在80%以上,其中以吡虫啉噻嗪酮持续期较长,药后10d仍在90%以上;噻虫嗪吡虫啉药后15d防效达90%以上;吡蚜酮药效在供试药剂中防效最低,在64.88%~77.82%之间。【结论】滇东师宗白背飞虱种群噻嗪酮为中等水平抗性,吡虫啉、吡蚜酮毒死蜱均为低水平抗性,噻虫嗪无抗性,田间防控效果以吡虫啉噻嗪酮为最好。建议滇东稻区可以使用吡虫啉噻嗪酮药剂防控白背飞虱,注意控制吡蚜酮使用次数与用量。

  • 标签: 白背飞虱 杀虫剂 敏感性 防效
  • 简介:目的:探讨生长激素(growthhormone,GH)实验大鼠牙齿移动过程中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在牙周组织中表达影响方法:将40只7周龄雄性Wistar大鼠根据是否注射生长激素分为实验组(E)对照组(C)。将50g力值加于近中左侧上颌第磨牙:E组C组分别腹部皮下注射GH(0.15IU/公斤/天)及剂量生理盐水:大鼠分别在第1、3、7、1421天处死。上颌第磨牙及其牙周组织切片行VEGF免疫组织化学染色,并进行图像分析统计:结果:无论张力侧及压力侧VEGF在实验组表达量均高于对照组,第3天组中张力侧及压力侧实验组平均光密度值分别为174.47土7.53345.80+25.46与其各自对照组相比较数据具有统计学意义(P<0.05),两侧实验组VEGF表达强度峰值均出现在第7天,分别为669.97+3.22923.77+18.41差异具有统计学意义(P

  • 标签: 生长激素 牙齿移动:VEGF 正畸
  • 简介:百合百合科大百合属重要野生植物资源,本文采用基因测序法,利用叶绿体DNArpl16序列10百合居群进行了遗传多样性遗传结构分析,旨在为其资源保护开发利用提供理论基础。结果显示:rpl16序列矩阵长度为699bp,共检测到14变异位点12单倍型,单倍型多态性(Hd)为0.604;总遗传多样性(HT)为0.660。该居群间遗传变异(71.53%)大于居群内遗传变异(28.47%),说明居群间变异其居群主要变异来源;居群间遗传分化很高(Gst-=0.677,Nst-=0.614,Fst=0.71531),基因流较低(Nm=0.0995)。失配分析结果表明种群在进化过程中曾经历过快速扩张,中性检验支持上述结果:Tajima'sD=-1.74368(P>0.05);FuandLi'sD=-2.69366(P<0.05);FuandLi'sF=-2.79896(P<0.05)。研究结果表明:百合居群遗传多样性较高,居群间存在较高遗传分化,主要与其生活史特征相关。基于得到居群遗传信息,建议采取就地保护为主保护策略。

  • 标签: 大百合 rpl16 遗传多样性 遗传结构
  • 简介:【目的】为探究转Cry1Ac/1Ab基因棉花异色瓢虫生长发育及其捕食功能影响。【方法】以转Cry1Ac/1Ab基因棉与其亲本常规棉为实验材料,利用取食不同棉花品种叶片棉铃虫饲喂异色瓢虫幼虫。【结果】与常规亲本棉相比,取食饲喂转基因棉花叶片初孵棉铃虫幼虫异色瓢虫幼虫从1龄发育至化蛹期时间延长0.77d,但差异不显著;除1龄幼虫体重增加(0.0773mg)外,其余各龄期幼虫体重均有所下降,但差异均不显著;异色瓢虫1、2、3、4龄幼虫初孵棉铃虫捕食量均随棉铃虫密度增加而增加,捕食功能反应均符合HollingⅡ圆盘方程。【结论】转Cry1Ac/1Ab基因棉花异色瓢虫生长发育无显著影响,饲喂取食转Cry1Ac/1Ab基因棉花棉铃虫异色瓢虫捕食功能无显著差异。

  • 标签: 转Cry1Ac/1Ab棉花 异色瓢虫 棉铃虫 捕食功能反应
  • 简介:目的:探讨围手术期应用ω-3多不饱和脂肪酸胃癌根治术患者术后恢复及生活质量影响。方法:选择2015年1月~2016年12月期间南充市中心医院收治并行胃癌根治术胃癌患者100例,按照随机数字表法分为对照组观察组,每组50例。对照组接受常规静脉营养支持治疗,观察组在此基础上接受ω-3多不饱和脂肪酸治疗。检测并比较两组患者术前、术后1d、术后2周血清视黄醇结合蛋白(RBP)、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)、转铁蛋白(RTF)、CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞水平,并于术前、术后2周应用生活质量核心量表(EORTCQLQ-C30)评价患者生活质量。结果:两组患者术后1d以及对照组术后2周RBP、PA、ALB、RTF、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均较术前显著降低(P<0.05),而CD8~+均较术前显著升高(P<0.05),术后1d、术后2周观察组RBP、PA、ALB、RTF、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于对照组(P<0.05),而CD8~+显著低于对照组(P<0.05);术后两组患者EORTCQLQ-C30功能量表各项评分较术前均显著提高,症状量表各项评分较术前显著降低(P<0.05),术后观察组功能量表各项评分显著高于对照组,症状量表各项评分显著低于对照组(P<0.05)。结论:应用ω-3多不饱和脂肪酸能够促进胃癌根治术后患者机体免疫功能恢复,改善患者营养状况,提高患者生活质量。

  • 标签: 胃癌根治术 Ω-3多不饱和脂肪酸 免疫功能 营养 生活质量
  • 简介:目的:探讨卡前列素氨丁三醇注射液联合缩宫素用于剖宫产产后出血预防效果及纤维蛋白原(FBI)、D-二聚体(D-D)水平影响。方法:选择2014年1月至2016年10月我院接诊92例剖宫产产妇,通过随机数表法分为观察组(n=46)对照组(n=46)。对照组在胎儿娩出后给予缩宫素宫内注射及静脉滴注,观察组在胎儿娩出后,先给予缩宫素宫内注射,再在子宫肌壁注射卡前列素氨丁三醇注射液。比较两组产后出血情况、宫缩持续时间、子宫底下降速度、恶露持续时间、FIB、D-D水平及不良反应发生情况。结果:观察组产后2h、24h出血量及产后出血率明显低于对照组(P<0.05),宫缩持续时间长于对照组(P<0.05),子宫底下降速度快于对照组(P<0.05),恶露持续时间明显短于对照组组(P<0.05)。两组治疗前FIB、D-D水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组FIB、D-D水平均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组FIB、D-D水平均明显低于对照组(P<0.05);两组恶心呕吐、面部潮红、胸闷、头痛发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在剖宫产产妇中应用卡前列素氨丁三醇注射液联合缩宫素可降低产后出血发生率,且安全性高,可能与有效减少FIB、D-D表达有关。

  • 标签: 剖宫产 卡前列素氨丁三醇注射液 缩宫素 纤维蛋白原 D-二聚体
  • 简介:目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)PK15细胞系。方法:以实验室前期构建pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F细胞单克隆株,最终Western印迹检测细胞单克隆株中pA3F表达。结果:菌落PCR序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×10^8TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白表达;经Western印迹鉴定,筛选得到单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白。结论:建立了稳定表达pA3FPK15细胞单克隆株,为进步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用免疫逃逸机制奠定了基础。

  • 标签: 猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F 慢病毒载体 猪内源性反转录病毒
  • 简介:目的:外泌体活细胞分泌来源于多囊泡体膜性囊泡,其主要作用包括携带与运输。雪旺细胞周围神经再生中非常优秀种子细胞,但其迁移能力较差,影响修复效果.本文旨在探讨外泌体雪旺细胞共培养是否可以促进雪旺细胞迁移.方法:本实验通过分离纯化人脐带干细胞外泌体大鼠坐骨神经雪旺细胞并鉴定,随后将其共培养于Transwell小室观察雪旺细胞迁移率.结果:通过人脐带干细胞超高速离心法得到外泌体高表达干细胞标志物CD44(92.2±3.6%)、CD73(99.1±0.6%),并且低表达单核细胞表面抗原CD14(0.5±0.06%)以及造血千细胞表面抗原CD34(0.4±0.07%),外泌体鉴定高表达CD81CD9;雪旺细胞培养鉴定纯度达(92.3±2.7)%;均符合实验要求。通过Transwell小室实验发现外泌体可以明显促进雪旺细胞迁移,并且具有定剂量关系:结论:外泌体可以提高雪旺细胞迁移能力,从而使雪旺细胞在组织工程领域中应用产生巨大突破.

  • 标签: 外泌体 人脐带间充质干细胞 雪旺细胞 神经再生
  • 简介:目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA894bp特异区段(s-foxp3a),该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5mmol/LIPTG诱导10h条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清效价在1.6×10^5以上。结论:制备了高效价斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进步解析斑马鱼FOXP3A蛋白功能提供了基础工具。

  • 标签: 斑马鱼 FOXP3A 密码子优化 原核表达 多克隆抗血清
  • 简介:目的:悬浮细胞转染较贴壁细胞存在定难度,用多聚赖氨酸包被细胞培养板培养悬浮细胞使其贴壁,用脂质体2000按照贴壁细胞转染方法转染悬浮细胞,提供种高效转染悬浮细胞方法。方法:悬浮细胞Jurkat或CCRF-CEM培养于包被了0.1mg/mL多聚赖氨酸细胞培养板,16h后洗掉未贴壁细胞,用脂质体2000分别将pWPXLd质粒或靶向人ABL1基因小干扰RNA(siRNA)转染细胞,24h后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,鉴定质粒转染效率,或用Western印迹鉴定siRNA干扰效率。结果:pWPXLd成功转染2种细胞,siRNA成功抑制了ABL1表达。结论:质粒siRNA均能成功转染,提供了种高效可行转染悬浮细胞方法。

  • 标签: 悬浮细胞 转染 多聚赖氨酸 小干扰RNA 白血病