简介：目的：构建人snail基因真核表达载体并鉴定。方法：使用RT-PCR法获取人snail基因全长cDNA,经BamHI、EcoRI双酶切、连接,插入pcDNA3.1（＋）真核表达载体,转化TOP10感受态细胞,用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆,提取质粒双酶切电泳及测序鉴定,瞬时转染siha细胞Western-blot从蛋白水平鉴定重组质粒在真核细胞内的表达。结果：pcDNA3.1-snail重组质粒经酶切电泳符合预期片段,测序鉴定插入片段与NCBIGenBank文库中人snail序列一致,重组质粒瞬时转染后snail蛋白表达量明显增高。结论：成功构建pcDNA3.1-snail重组质粒载体,为进一步探讨snail基因生物学功能奠定了基础。

简介：自英国生态学家查尔斯.艾尔顿1958年撰写的《动植物的入侵生态学》出版至今,半个世纪已经过去,这部著作被公认为是生物入侵在科学研究方面的开端。这期间生物入侵研究经历了萌芽期（20世纪80年代之前）、成长期（20世纪80年代）和快速发展期（20世纪90年代末期至今）。在这个过程中,越来越多的概念、假说、方法和技术被提出和整合到生物入侵研究之中,由此催生了一门生态学领域的新兴学科——入侵生物学。本文在对近50年来生物入侵专著和论文的统计分析基础上,介绍了国际生物入侵研究的发展脉络和现状。同时综述了中国入侵生物学在基础和应用研究方面的相关进展,着重阐述了主要科学问题（＂入侵潜力与成功入侵的关系＂、＂入侵种种群的扩张与扩散＂、＂入侵种的生态适应性与进化＂及＂本地生态系统对入侵的响应及可入侵性＂）和预防与控制的技术体系（风险评估与早期预警、检测与监测、狙击与灭除、生物防治、生态修复与干扰调控）,并进一步介绍了中国入侵生物学学科体系的构建和框架,提出入侵生物学是研究外来物种的入侵性与生态系统的可入侵性,以及外来物种预防与控制的科学,是一门多领域交叉的学科。最后展望和讨论了中国入侵生物学学科发展可能遇到的一些问题。

简介：利用覆盖水稻12条染色体的64个分子标记，对广西境内已发现的283个野生稻自然居群按居群取样原则采集4173份代表性样本进行遗传结构分析并构建核心种质。结果显示，64个标记位点共检测出1180个等位变异，平均等位变异数为18．4375，Shannon指数为1．7367，Nei＇s多样性指数0．7182，表明广西普通野生稻资源遗传多样性十分丰富。同时，基于广西普通野生稻群体结构，构建了包含351份种质的广西普通野生稻核心种质，占原样本数的8．41％。广西普通野生稻核心种质，代表广西普通野生稻的多样性和特异性，为野生稻遗传资源的深入研究提供基础，从而为水稻育种提供应用信息。

简介：以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素，包括Mg^2＋、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等，建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系：在20μl反应体系中，模板DNA为50ng，Mg^2＋浓度为2．0mmol／L，dNTP浓度为0．2mmol／L，引物浓度为0．75μmol／L，Taq酶用量为1U。适宜的扩增程序为94℃5min；94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，51℃lmin，72℃1min，30个循环；72℃7min。对体系的验证结果表明本研究建立的莴苣SRAP体系重复性好、分辨率高、多态性丰富，在莴苣属蔬菜种盾资源评价、分子标记辅助选择言种等骞方面躲有专耍作用。

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：为满足植物功能基因组学研究及转基因安全性需要,本研究根据一些国内外引进或商业化的植物表达载体及其相关元件,构建了3个适合于植物,尤其是单子叶植物转化的表达载体,即pAH006、pWMB022和pWMB025。pAH006载体包含由玉米泛素ubi启动子调控的GUS基因和bar基因的完整T-DNA区域,此区段能够被酶切回收,可用于单子叶植物农杆菌介导转化效率评价及基因枪介导线状DNA转化效果研究;pWMB022载体携带由双35S启动子调控的玉米色素基因Lc和C1,可用作基因枪介导的共转化筛选标记,直观筛选含目标基因转基因材料;pWMB025载体携带由ubi启动子调控的、商业化转基因植物中广泛利用的EPSPS基因,可用于禾谷类作物农杆菌或基因枪介导的遗传转化,载体多克隆位点可通过酶切方式更换目标基因。酶切鉴定结合农杆菌或基因枪介导的小麦幼胚愈伤组织或叶片转化验证此3个载体表明,载体构建正确,其标记基因、可视化基因和报告基因均能正常表达。这3个载体的构建对于小麦等植物转化效率提升、安全型转基因作物获得和植物功能基因组学研究等具有重要意义。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：以白桦240个家系的胸径、树高、材积和纤维素含量数据为依据,采用马氏距离计算家系间距离、10%的取样比例和优先取样法,研究了最短距离法、最长距离法、中间距离法、重心法、类平均法、加权配对算术平均法、可变法和离差平方和聚类法建构的核心种质与原种质的遗传参数、性状相关性及分布格局。结果表明,最短距离法构建白桦初级核心种质均值差异百分率、极差符合率、方差差异百分率和极差符合率分别为0、100%、75%和143%,4个性状相关性显著、相关系数均超过0.5,保持了原种质资源的空间分布格局,是构建白桦核心种质最佳方法。

简介：据调查显示,自从2000年开始,中国就相继启动了一系列的卫生监督体系的改革,这些卫生监督体系的改革为中国的卫生行业的发展提供更多的发展机会,也是中国的卫生体系非常大的进步。而作为卫生监督体系中非常重要的组成部分,精神文化建设也取得了非常显著的成绩。近年来,随着中国卫生监督系统的逐渐完善,专家和学者将更多的精力放在卫生监督精神文化建设这一层面上,旨在形成一个较为系统并且较为完整的精神文化建设体系。现如今,随着新时期的到来,精神文化建设也取得了一定的成就,这对发展中国卫生监督系统有着非常重要的意义。

简介：采用2种分层方法、3种确定组内取样量方法和2种个体选择方法，分析了3255份燕麦种质资源的12个农艺性状的数据，构建出13个初级核心种质样本。为确定这些样本代表性，分别与总体进行了7个指标的比较，包括数量性状的极差、符合度、平均数、表型方差、遗传多样性指数方差、变异系数及质量性状的频率分布。结果表明。2种分层方法产生的样本在代表性上差异不明显；3种确定组内取样量方法以比例法的代表性最好，对数法的代表性其次，平方根法的代表性最差；在个体选择中，聚类法明显好于随机法。因此，在燕麦核心种质的构建中，先按省份分组，再按比例法确定组内取样量，通过聚类结果选择个体为最佳取样策略。

简介：新疆甜瓜地方种质资源具有丰富的遗传多样性，是新疆哈密瓜遗传改良的重要基因库。以121份新疆甜瓜地方品种为研究对象，结合按来源分组和系统聚类选择的方法，通过多重比较29个表型性状数据确定适宜的取样比例，筛选出25份地方品种为初选核心种质。在初选核心种质取样量上，人工定向补充5份优异种质和极值材料确定了核心种质，约占地方品种总数量的25％。对表型保留比例、遗传多样性指数、变异系数、表型频率方差、板差符合率、均值符合率、标准差符合率等检验参数进行了检验和评价。结果表明：调整后的核心种质除标准差符合率降低外，其余参数均优于或等于初选核心种质，更能代表原始样品；所构建的核心种质很好地保留了所有地方品种资源的遗传多样性和变异幅度。

简介：根据Ｇｅｎｂａｎｋ中大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）基因的核苷酸序列，设计并合成了一对引物，以大肠杆菌基因组ＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，并将扩增产物定向连接到克隆、测序及真核表达载体ＰＣＤＮＡ３中，进行酶切鉴定、测序及序列分析。结果表明ＰＣＲ扩增出７４１ｂｐ大小的片段，通过酶切和序列分析证明含完整的ＰＮＰ基因序列且基因插入方向正确，此序列与文献报道的ＰＮＰ基因的同源性为９９．７％。说明克隆的ＰＮＰ基因与文献报道的基本一致，ｐｃＤＮＡ３－ＰＮＰ的构建成功为今后用其进行基因转染来研究ＰＮＰ／Ｍｅｐ－ｄＲ自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。

简介：目的：检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达状况及构建pcDNA3.1-FHIT真核表达载体。方法：RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达，构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT，通过酶切法、PCR扩增法和DNA序列分析鉴定重组质粒后，用脂质体转染至FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，经G418筛选后RT-PCR鉴定。结果：FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达，在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。FHIT基因cDNA正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中，并成功转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45。结论：FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。成功构建pcDNA3.1-FHIT，并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，使其FHIT基因阳性表达。

简介：由于现代化的发展,图书馆已投入到市场经济的竞争中,怎样构建图书馆的核心竞争力已成为图书馆将来生存和发展的关键。文章解释了图书馆核心竞争力的定义,目前图书馆核心竞争力的现况,并从资源、人才、管理理念、服务创新等几方面论述了图书馆核心竞争力的构建。

简介：构建核心种质是植物遗传资源的研究热点和重点之一，对种质资源的鉴定、保存、利用与交流具有重要意义。本文简要介绍了植物遗传资源核心种质的概念及其构建方法，综述了园艺作物核心种质构建的研究新进展，并对今后该领域的研究趋势进行了展望。提出了种质分组及取样策略是园艺作物核心种质构建方法研究的重点；应及时构建一批大宗园艺作物以及我国原产和特产园艺作物的核心种质；高度重视基于重测序技术快速、精准、高通量地挖掘园艺作物核心种质优异基因的研究以及要加强科研管理与协作，切实提高我国园艺作物核心种质研究成果的共享性等观点，为园艺作物种质资源的深入研究与高效利用提供理论依据和技术参考。

简介：采用省份分组-花型分组-聚类-分组法构建了山葡萄核心种质，在此基础上，考虑到山葡萄品种在生产上和雄株山葡萄在科学研究上的作用，把未进入核心种质的山葡萄品种和雄株山葡萄也并入核心种质。该核心种质包括48份资源（占资源总数的31％），其中来自吉林省的资源18份（占37．5％），黑龙江省的资源29份（占60．4％），辽宁省的资源1份（占2．1％）；两性花资源22份（占45．8％），雌能花资源21份（占43．8％），雄株5份（占10．4％）。除出汁率外，其他性状的符合度达72％以上；除果粒质量外，其他性状的变幅吻合度达79％以上。以上结果表明，所构建的核心种质较好地代表了评价的山葡萄资源。

简介：地衣是真菌和一种或多种光合微生物形成的稳定的共生联合体,既是先锋生物,又是敏感生物.环境的变化及生境的片断化,使得许多地衣种类处于濒危状态.保护珍稀濒危地衣物种的方法包括地衣体的移植,地衣中菌藻的分离培养及基因组文库的构建等.本研究用改进的CTAB方法提取基因组总DNA,以Lamb-daGEM-11为载体,构建了红脐鳞(Rhizoplacachrysoleuca)的基因组文库,文库中同时含有该地衣共生菌与共生藻的DNA.该文库包含8.5×105个重组子,插入片段的平均大小为19kb.文库的容量约为红脐鳞单倍体基因组的100倍.该基因组文库的构建为保护稀有与濒危地衣物种提供了一个新的途径,并可进一步开展有关地衣的分子操作研究,如地衣冰核蛋白的异源表达等.

简介：目的探讨miR-5572转基因小鼠构建病态窦房结综合征疾病模型的可行性。方法繁殖与鉴定了miR-5572F1及F2代野生型纯合子及杂合子小鼠,并通过形态学、心电图记录及窦房结组织Cav1.2、Cav1.3mRNA和蛋白表达水平测定来观察疾病模型。结果F2代miR-5572纯合子敲入小鼠在形态上较野生型小鼠生长缓慢,体型较小。相较于杂合子和野生型小鼠,纯合小鼠的平均心率明显偏低（P〈0.05）,差异有显著性。miR-5572纯合子小鼠窦房结组织Cav1.2、Cav1.3mRNA和蛋白表达水平低于野生型（P〈0.05）,差异有显著性。结论过表达miR-5572转基因小鼠可以构建病态窦房结综合征疾病模型。

简介：以商业栽培的25个香菇（Lentinulaedodes）品种为材料,应用SSR分子标记技术进行区别性分析。本研究使用14对引物,引物的多态性为100%,每对引物产生的等位基因数为2～9个,平均5.0个,基因型数为2～12个,平均6.3个。预期杂合度为0.1151～0.8131,平均预期杂合度为0.6126;PIC值为0.1064～0.7736,平均PIC值为0.5541。25个品种中,除申香10号和申香12号不能区分外,对其他23个品种清晰鉴别,为构建香菇栽培品种的SSR分子指纹图谱提供了依据和方法。本方法获得的数据可以成为重复性良好、实验室间可比对的香菇栽培品种标准指纹图谱,在品种特异性鉴定中不再需要已有所有品种做参照,较RAPD、ISSR、SRAP等鉴定方法工作量大大减少。

简介：目的研究阻断CD40-CD40L共刺激信号通路对移植皮肤免疫排斥反应的影响。方法通过RT-PCR技术克隆了呈可溶性表达的CD40L分子胞外区（sCD40L）,利用K14启动子构建了sCD40L皮肤特异性表达载体,并利用该载体制备了转基因小鼠。结果所克隆的CD40L胞外区片段其大小及序列符合预期;以哺乳动物表达载体PCI为骨架,通过DNA重组,获得了含K14启动子和sCD40L编码区的皮肤特异性表达载体K14-sCD40L;通过显微注射和胚胎移植,PCR筛选检测：49只G0代小鼠有1只小鼠扩增出特异性条带,阴性对照无条带。结论成功建立sCD40L转基因阳性小鼠。