简介:目的:研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路调控作用的机制。方法:利用免疫共沉淀和免疫印迹在HEK-293T细胞中研究TRAF6与NLRP3的相互作用;通过检测乳酸脱氢酶(LDH),在THP-1细胞中研究TRAF6对NLRP3炎症小体信号通路活性的影响。结果:TRAF6通过与NLRP3的相互作用增加NLRP3的稳定性,进而促进NLRP3炎症小体信号通路介导的LDH的释放。结论:TRAF6通过增加NLRP3的稳定性正调控NLRP3炎症小体信号通路。
简介:目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系。方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中的表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F的细胞单克隆株,最终Western印迹检测细胞单克隆株中pA3F的表达。结果:菌落PCR和序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×10^8TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白的表达;经Western印迹鉴定,筛选得到的单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白。结论:建立了稳定表达pA3F的PK15细胞单克隆株,为进一步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用下的免疫逃逸机制奠定了基础。
简介:MultitoxinBt-cropsexpressinginsecticidaltoxinswithdifferentmodesofaction,forexample,CryandVip,areexpectedtoimproveresistancemanagementintargetpests.WhileCry1Aresistancehasbeenrelativelywellcharacterizedinsomeinsectspecies,thisisnotthecaseforVip3A,forwhichnomechanismofresistancehasyetbeenidentified.HereweappliedHT-SuperSAGEtoanalyzethetranscriptomeoftheguttissueoftobaccobudwormHeliothisvirescens(F.)laboratory-selectedforVip3Aaresistance.Fromatotalof1324252sequencereads,5895126-bptagswereobtainedrepresenting17751nonsingletonuniquetranscripts(UniTags)fromgeneticallysimilarVip3Aa-resistant(Vip-Sel)andsusceptiblecontrol(Vip-Unsel)strains.Differentialexpressionwassignificant(≥2.5foldor≤0.4;P<0.05)for1989sequences(11.2%oftotalUniTags),where420representedoverexpressed(OE)and1569underexpressed(UE)genesinVip-Sel.BLASTNsearchesmapped419UniTagstoH.virescenssequencecontigs,ofwhich,416(106OEand310UE)wereunambiguouslyannotatedtoproteinsinNCBInonredundantproteindatabases.GeneOntologydistributed345ofannotatedUniTagsin14functionalcategorieswithmetabolism(includingserine-typehydrolases)andtranslation/ribosomebiogenesisbeingthemostprevalent.AUniTaghomologoustoaparticularmemberoftheREsponsetoPAThogen(REPAT)familywasfoundamongmostoverexpressed,whileUniTagsrelatedtotheputativeVip3Aa-bindingribosomalproteinS2(RpS2)wereunderexpressed.qRT-PCRofasubsetofUniTagsvalidatedtheHT-SuperSAGEdata.ThisstudyisthefirstprovidinglepidopteranguttranscriptomeassociatedwithVip3Aaresistanceandafoundationforfutureattemptstoelucidatetheresistancemechanism.
简介:目的:探讨卡前列素氨丁三醇注射液联合缩宫素用于剖宫产产后出血的预防效果及对纤维蛋白原(FBI)、D-二聚体(D-D)水平的影响。方法:选择2014年1月至2016年10月我院接诊的92例剖宫产产妇,通过随机数表法分为观察组(n=46)和对照组(n=46)。对照组在胎儿娩出后给予缩宫素的宫内注射及静脉滴注,观察组在胎儿娩出后,先给予缩宫素的宫内注射,再在子宫肌壁注射卡前列素氨丁三醇注射液。比较两组产后出血情况、宫缩持续时间、子宫底下降速度、恶露持续时间、FIB、D-D水平及不良反应的发生情况。结果:观察组产后2h、24h出血量及产后出血率明显低于对照组(P<0.05),宫缩持续时间长于对照组(P<0.05),子宫底下降速度快于对照组(P<0.05),恶露持续时间明显短于对照组组(P<0.05)。两组治疗前FIB、D-D水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组FIB、D-D水平均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组FIB、D-D水平均明显低于对照组(P<0.05);两组恶心呕吐、面部潮红、胸闷、头痛发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在剖宫产产妇中应用卡前列素氨丁三醇注射液联合缩宫素可降低产后出血发生率,且安全性高,可能与有效减少FIB、D-D表达有关。
简介:Pheromone-bindingproteins(PBPs)arethoughttobindandtransportsexpheromonesontotheolfactoryreceptorsonthedendritemembraneofolfactoryneurons,andthusplayavitalroleinsexpheromoneperception.However,thefunctionofPBPshasrarelybeendemonstratedinvivo.Inthisstudy,twoPBPs(PBP1andPBP3)ofChilosuppressalis,oneofthemostnotoriouspyralidpests,wereinvivofunctionallycharacterizedusinginsectswiththePBPgeneknockedoutbytheCRISPR/Cas9system.First,throughdirectinjectionofPBP-singleguideRNA(sgRNA)/Cas9messengerRNAintonewlylaideggs,ahighrateoftarget-geneediting(checkedwithpolledeggs)wasinducedat24hafterinjection,21.3%forPBPl-sgRNAinjectedeggsand19.5%forPBP3-sgRNAinjectedeggs.Second,byanin-crossingstrategy,insectswithmutantPBP1orPBP3(bothwithaprematurestopcodon)werescreenedandhomozygousmutantswereobtainedintheG3generation.Third,themutantinsectsweremeasuredforelectroantennogram(EAG)responsetofemalesexpheromones.Asaresult,bothPBPmutantmalesdisplayedsignificantreductioninEAGresponse,andthisreductioninPBP1mutantswashigherthanthatinPBP3mutants,indicatingamoreimportantroleofPBP1.Finally,therelativeimportanceoftwoPBPsandthepossibleofftargeteffectinducedbysgRNA-injectionarediscussed.Takentogether,ourstudyprovidesadeeperinsightintothefunctionofandinteractionbetweendifferentPBPgenesinsexpheromoneperceptionofC.suppressalis,aswellasavaluablereferenceinmethodologyforgenefunctionalstudyinothergenesandothermothspecies.
简介:目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5mmol/LIPTG诱导10h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10^5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。
简介:目的:探讨围手术期应用ω-3多不饱和脂肪酸对胃癌根治术患者术后恢复及生活质量的影响。方法:选择2015年1月~2016年12月期间南充市中心医院收治并行胃癌根治术的胃癌患者100例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组50例。对照组接受常规静脉营养支持治疗,观察组在此基础上接受ω-3多不饱和脂肪酸治疗。检测并比较两组患者术前、术后1d、术后2周血清视黄醇结合蛋白(RBP)、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)、转铁蛋白(RTF)、CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞水平,并于术前、术后2周应用生活质量核心量表(EORTCQLQ-C30)评价患者生活质量。结果:两组患者术后1d以及对照组术后2周的RBP、PA、ALB、RTF、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均较术前显著降低(P<0.05),而CD8~+均较术前显著升高(P<0.05),术后1d、术后2周观察组RBP、PA、ALB、RTF、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于对照组(P<0.05),而CD8~+显著低于对照组(P<0.05);术后两组患者EORTCQLQ-C30功能量表各项评分较术前均显著提高,症状量表各项评分较术前显著降低(P<0.05),术后观察组功能量表各项评分显著高于对照组,症状量表各项评分显著低于对照组(P<0.05)。结论:应用ω-3多不饱和脂肪酸能够促进胃癌根治术后患者机体免疫功能的恢复,改善患者的营养状况,提高患者的生活质量。