简介:摘要目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细胞,电泳检测rRNA断裂水平和Western blot检测凋亡相关分子信号,初步确定NTV诱导的早期细胞凋亡的通路与机制。结果在细胞形态学方面观察到被NTV感染的细胞,与VTT相比,能够在较早时间出现细胞变圆、皱缩等病变现象。DAPI染色观察到被NTV感染的细胞核在早期会出现染色质高度凝聚、边缘化的现象并随着时间的增加而崩解。rRNA断裂水平检测结果说明被NTV感染16 h后的rRNA已发生断裂和降解。Western blot检测结果说明在NTV感染HeLa细胞中能够检测到比正常细胞中更强的PARP、caspase-3及caspasee-9的分子信号,但caspasee-8并没有明显增加,而VTT的结果则与NTV相反。结论NTV在早期能够诱导细胞凋亡,为痘苗病毒载体改造提供理论依据。
简介:摘要目的阐释miR-340-5p对HBV复制的影响及其调控机制,并为HBV感染后的生物标志物和治疗用药提供新的策略。方法在肝癌细胞HepG2.2.15中转染miR-340-5p的模拟物(340-mimic)和抑制剂(340-inhibitor)及其对应的阴性对照。通过ELISA检测上清中HBeAg和HBsAg的水平变化。同时收取细胞,提取RNA和壳体化DNA,并采用qRT-PCR分别检测HBV总RNA和pgRNA的水平及HBV DNA拷贝数的变化;分子克隆构建STAT3的过表达质粒pEF-flag-stat3,通过qRT-PCR和western blot对STAT3的mRNA和蛋白表达加以验证;此外,共转染miR-340-5p的模拟物和pEF-flag-stat3后通过northern blot,qPCR和ELISA对HBV的复制情况进行检测。结果miR-340-5p过表达后,HBV转录生成总RNA和逆转录模板pgRNA的水平明显下降至对照组的45.89%、61.46% (P=0.001、P=0.003);壳体化DNA的合成及HBeAg和HBsAg的分泌水平分别受到72.46%、18.27%、14.42%的抑制( P<0. 001、P<0. 001、P=0.005);干扰内源性miR-340-5p则与对照组相比分别增加44.02%、45.56%、22.66%、11.85%、14.04%(P=0. 009、P=0. 01、P=0. 011、P=0.013、P=0.027)。相比之下在此基础上过表达信号转导和转录激活因子(STAT)3能够减弱被miR-340-5p抑制的HBV复制。进一步的实验结果也表明STAT3对HBV的复制有促进作用。结论miR-340-5p能够通过靶向作用于STAT3抑制其转录和翻译进而抑制HBV的复制。
简介: 摘要:在高三复习的过程中,学生会遇到一些疑难问题,找不到方法,更不会总结规律,这时需要教师加以指引。细胞增殖与同位素标记的DNA复制两个板块知识的综合运用,成为学生眼中的难点和失分点。本文基于此学情,归纳整理出这一类题型的解题方法和经验规律,让学生能够学有所得、学以致用。本文主要内容如下:第一,构建了一个DNA半保留复制与染色体放射性标记变化情况的模型。第二,解决了两类问题,第一类问题是DNA复制两次,细胞连续进行两次有丝分裂的过程中,染色体放射性标记的变化情况;解决的第二类问题就是DNA复制一次,而细胞连续分裂两次的减数分裂过程中,染色体放射性标记的变化情况。第三,通过例题证明前面两类问题的结论的正确性。
简介:摘要:一份完成的投标文件包含了资审、施组、报价三个部分。认真细致的研读招标文件,是编制科学合理投标报价的基础;合理的投标报价能体现出投标单位的管理能力和施工水平,是关系到能否中标的关键性影响因素;应给予足够的重视。而资审部分的编制则关系到参与投标的资格以及后期评审加分的情况,也是至关重要的影响因素。施工组织设计编制之前,应由经营开发部组织召开会议,工程部、运营部等相关人员参会,由投标项目负责人介绍工程概况、招标文件的要求、现场勘察及标前会议的具体情况,明确工程质量要求和验收标准,指出工程中的重点、难点。施工组织编制应交由现场施工经验丰富的工程技术人员进行,并由工程部长或公司技术负责人进行审核;最终形成统一、合理的施工组织方案,并且完全响应招标文件的要求,紧扣设计者和业主的设计意图。本文总结工程投标过程中的注意要点和标书细节方法,有助于工程投标工作的顺利开展。
简介:摘要:在提质增效的大背景下,为了提高检索的效率,首先必须要全面阅读理解本申请,不仅仅只在独立权利要求上下功夫,还需要把握涉及发明点的从属权利要求以及说明书中的内容,只有全面透彻地理解本申请的发明构思,才能在检索的过程中做到有的放矢,进而提高专利审查的效率。