简介:目的:探讨肝脏17-α羟化酶(Cyp17A1)在糖异生中的作用。方法:采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测正常C57BL/6小鼠在进食-饥饿-再进食状态下的肝脏糖异生关键酶[磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase,PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)]基因及Cyp17A1的表达,比较正常小鼠与瘦素受体缺陷(db/db)小鼠肝脏中上述基因的表达差异;给予正常小鼠腹腔注射Cyp17A1下游产物17-羟孕酮(17-hydroxyprogesterone,17-OHP),并检测小鼠糖异生能力的改变和糖异生相关基因的表达;采用荧光素酶报告基因实验,检测17-OHP对糖皮质激素受体转录活性的调控作用。结果:在正常小鼠饥饿状态下及db/db小鼠中,肝脏糖异生关键酶基因(PEPCK及G6Pase)表达上调,肝脏Cyp17A1表达上调,其下游产物17-OHP含量升高;17-OHP处理组小鼠血糖升高,肝脏PEPCK及G6PasemRNA水平显著增加;17-OHP通过激活糖皮质激素受体的转录活性,呈剂量依赖性上调糖异生关键酶基因(PEPCK、G6Pase)的mRNA水平。结论:肝脏Cyp17A1酶通过其下游产物17-OHP激活糖皮质激素受体转录活性,上调糖异生关键酶基因的mRNA水平,从而促进糖异生过程。
简介:目的探讨Roux—en-Y胃旁路术(RYGB)对肥胖症大鼠空肠糖异生的影响及作用机制。方法将高脂诱导肥胖症的40只sD大鼠按随机数字表法分为空白组(未行手术)、假手术组(与手术组对应位置切开缝合)、匹配饮食组(行假手术并保持与手术组相同进食量)和手术组(行RYGB),每组10只。(1)定期测量大鼠体质量、进食量;(2)术前、术后2周及10周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、胰岛素耐量试验(ITT)评价大鼠糖耐量及胰岛素敏感性;(3)术后10周检测各组大鼠空腹血清TC、TG、游离脂肪酸水平(FFA);(4)留取大鼠空肠组织行病理学检查;(5)采用RT.PCR和Westernblot检测各组大鼠空肠黏膜组织中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖6磷酸酶仅(G6Pase)mRNA和蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以x±s表示,多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验。重复测量数据采用重复测量方差分析。结果(1)空白组、假手术组、匹配饮食组、手术组大鼠术前至术后10周体质量变化分另1为(325±9)g~(451±18)g、(327±11)g-(446±14)g、(330±8)g~(442±15)g、(328±10)g-(364±23)g。4组大鼠术前至术后10周体质量变化趋势比较,差异有统计学意义(F=422.03,P〈0.05)。术后1~4周,假手术组大鼠体质量与空白组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。假手术组与匹配饮食组大鼠术后体质量各时间点比较,仅术后6周差异有统计学意义(P〈0.05),其他时间点差异无统计学意义(P〉0.05)。术后4~10周,手术组大鼠体质量分别与空白组、假手术组和匹配饮食组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。空白组、假手术组、手术组大鼠术前至术后10周进食量变化分别为:(25.3±1.4)g~(27.0±1.9)g、(24.9±1.3)g~(27.8
简介:摘要目的探讨慢加急(亚急)性肝衰竭(ACLF)患者以及氧化应激损伤大鼠肝细胞沉默信息调节因子6(SIRT6)和糖异生限速酶表达的变化以及可能机制。方法选取2016年8月至2018年5月首都医科大学附属北京佑安医院10例ACLF患者纳入ACLF组,10例正常肝移植供者纳入正常对照组。收集入选者空腹血糖、总胆红素、白蛋白、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等资料。分离Sprague Dawley大鼠肝细胞,分为对照组(无任何干预)、模型组(H2O2干预6 h)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激活组(模型组基础上加入mTOR激活剂)、mTOR抑制组(模型组基础上加入mTOR抑制剂)。蛋白质电泳和聚合酶链反应检测葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、SIRT6以及mTOR的相对表达。结果ACLF组ALT、总胆红素高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ACLF组SIRT6含量(0.15±0.07)μg/L、空腹血糖(3.19±0.59)mmol/L,明显低于正常对照组(0.46±0.15)μg/L、(7.07±2.07)mmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ACLF组肝组织PEPCK、G6P蛋白相对表达明显低于正常对照组。模型组SIRT6、PEPCK、G6P mRNA相对表达低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。激活mTOR后PEPCK、G6P、SIRT6相对表达高于模型组,抑制mTOR后PEPCK、G6P、SIRT6相对表达低于模型组。结论ACLF时SIRT6可能与mTOR信号途径相互作用,抑制糖异生,并与低血糖的发生相关,降低SIRT6水平,可能起到延缓ACLF进展的作用。
简介:摘要目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏胆汁酸信号及糖异生的影响。方法将16只健康雄性Sprague-Dawley大鼠通过高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM,随机数字表法分为假手术组(n=8)和手术组(n=8)。手术组行RYGB术,假手术组在与手术组相同位置行胃肠横断并原位吻合。术前及术后第1、2、4、6、8周测各组摄食量和空腹血糖;术前、术后2、8周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素敏感试验(ITT);术后8周留取空腹血清检测总胆汁酸水平,留取肝脏组织用反转录聚合酶链反应检测法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA表达水平,应用SPSS 20.0软件进行统计分析,组间比较采用t检验。结果手术组术后第4、6、8周摄食量[(18±2)、(19±3)、(20±4) g/d]显著低于假手术组[(24±3)、(28±4)、(26±3) g/d],手术组术后第2、4、6、8周空腹血糖[(6.9±0.9)、(6.0±1.1)、(6.4±0.8)、(6.8±0.7) mmol/L]显著低于假手术组[(12.9±1.4)、(10.8±0.8)、(9.4±1.1)、(9.0±1.0) mmol/L],差异有统计学意义(t=4.707、5.091、3.394、9.209、9.982、6.239、5.098,P<0.05);术后2周,手术组OGTT、ITT曲线下面积[(898±118)、(428±85) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 508±108)、(788±98) mmol/(L·min)],术后8周,手术组OGTT、ITT曲线下面积[(975±102)、(455±76) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 575±96)、(775±86) mmol/(L·min)],差异有统计学意义(t=10.790、7.849、12.120、7.886,P<0.05);术后8周,手术组大鼠血清总胆汁酸[(105.17±14.81) μmol/L]显著高于假手术组[(68.87±10.81) μmol/L],差异有统计学意义(t=5.600,P<0.05);手术组与假手术组比较,肝脏FXR和SHP mRNA的表达显著上调(1.67±0.31比1.17±0.11、2.37±0.21比1.33±0.18),PEPCK和G6Pase mRNA的表达显著下调(0.77±0.12比1.15±0.14、0.87±0.08比1.05±0.10),差异有统计学意义(t=4.299、10.640、5.829、3.976,P<0.05)。结论RYGB术改善T2DM大鼠糖代谢的作用机制可能与术后肝脏胆汁酸信号上调进而抑制糖异生有关。