简介:目的:建立并改良磁珠提取基因DNA的方法,以应用于HLA常规测序分型。方法:使用磁珠法自动提取系统从全血中提取基因组DNA,利用DNA定量仪测定DNA浓度与纯度,利用测序仪对PCR扩增产物进行测序及相关的分析软件进行HLA分型结果分析。比较改良前后DNA浓度与纯度、HLA分型结果成功率、信噪比及测序胶图的反应格局。结果:改良后96份DNA浓度的均一性、纯度均优于改良前;32份HLA分型结果中HLA-A、B位点成功率改良后高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32人份HLA-B第二外显子信噪比(N/S)合格率均高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32份分型胶图反应格局均优于改良前。结论:改良磁珠提取DNA法能稳定、可靠地应用于HLA测序分型,具有快速、高通量化的特点和广泛的应用前景。
简介:目的建立HLA分型基因微阵列新技术,并与PCR-SSO(PCR-顺序特异性寡核苷酸)、PCR-SSP(PCR-序列特异性引物)及SBT(DNA测序)进行方法学比对。方法基于反向SSO原理设计引物和探针→探针点样→标本处理和标记→杂交检测分析,其依据的原理和主要步骤为:(1)PCR扩增;(2)DNA杂交;(3)酶联染色;(4)结果判断。以此构建HLA-B27分型基因微阵列系统,并检测88例标本,将此结果与PCR-SSO、PCR-SSP及金标准的SBT三种方法进行比对。结果成功构建了HLA-B27分型基因微阵列系统。其与PCR-SSO、PCR-SSP及SBT方法相比总体一致率为98.86%;B27阳性标本结果的一致率为97.72%(86/88);B27阴性标本结果的一致率为100%(4/4)。结论与目前常用的PCR-SSO,PCR-SSP及SBT等方法相比,HLA分型基因微阵列具有高效、快速、稳定、经济等特点,可同时进行HLA-B27基因检定与等位基因分型,不失为临床及造血干细胞库大规模HLA分型(中低分辨)的一种新方法。
简介:摘要HLA分型技术在骨髓库上海分库高分辨检测工作中的初步应用。方法使用ABI3730xlDNA测序仪,采用SBT单链直接测序法,对上海地区的960份自愿加入中华骨髓库的志愿者血液标本进行DNA测序,其中HLA-I类基因对第2,3和4外显子单链单向测序,II类基因对第2外显子单链单向测序,以得HLA高分辨分型结果;对部分呈现血清学表达不一致的模棱两可高分辨结果标本,通过SSO技术确认;对部分呈现血清学表达一致的模棱两可高分辨结果标本,通过SSP或对2,3,4以外的外显子单链检测作进一步确认。结果960份中华骨髓库上海分库的样本进行HLA的PCR-SBT高分检测,用DNA单链测序法一次性获得高分辨结果为720例;对部分呈现血清学表达一致的模棱两可高分辨结果标本,通过SSP技术或2,3,4以外的外显子单链检测做进一步确认,共计标本211例;对于部分呈现血清学表达不一致的21例模棱两可高分辨结果标本我们采用SSO技术最终确认了唯一的高分结果;此外,还检测到待确认新基因4例。完成了本次实验标本100%高分结果入库要求。结论SBT单链测序技术为主,PCR-SSO,PCR-SSP联合为辅,是骨髓库开展HLA高分辨分型工作的有力工具。
简介:摘要目的评估利用中、高分辨人类白细胞抗原(HLA)分型方法计算供受者功能性表位(Eplet)错配的一致性。方法收集2015年1月至2019年12月西安交通大学第一附属医院实施肾移植1 487例供、受者HLA中、高分辨分型资料,利用HLA Matchmaker软件计算Eplet错配数,比较供、受者中、高分辨HLA配型Eplet错配数的一致性。测定HLA分型方法之间存在Eplet错配差异的供、受者比例。结果供受者HLA中分辨Ⅰ类和Ⅱ类位点Eplet错配的中位数分别为14(0~38)和8(0~24);HLA高分辨Ⅰ类和Ⅱ类位点Eplet错配的中位数分别为14(0~38)和7(0~23)。使用中分辨和高分辨分型方法计算的HLA Ⅰ类[95%置信区间(CI):0.989(0.988~0.991)]和Ⅱ类[95% CI :0.990(0.989~0.992)]位点的Eplet错配数的相对一致性和绝对一致性都非常相似。两种方法计算的HLA Ⅰ和Ⅱ类分子Eplet错配数差别在0~2个之间的供、受者的比例分别为92.5%和97.5%,Eplet错配数差别≥3的供、受者比例分别为7.5%和2.5%。结论利用供、受者HLA中分辨分型及高分辨分型计算Eplet错配数的一致性较好;HLA中分辨分型转换为HLA高分辨分型所计算的Eplet错配数与实际Eplet错配数基本一致。
简介:我们用流式细胞术(FCM)检测了以腰腿痛为主诉的初诊患者280例的HLA—B27抗原表达,探讨HLA—B27抗原对腰腿痛患者的诊断和鉴别诊断的临床意义。
简介:摘要目的探讨急性白血病的FAB分型与免疫学分型的相互关系,分析并确立免疫分型在急性白血病分型诊断中的临床价值及意义。方法对依据FAB分型初诊的72例患者进行流式细胞术(FCM)的免疫分型,对两种方法进行了比较分析。结果1.在40例经FAB分型诊断为AML的病例中,有38例细胞形态学诊断与免疫表型相符合。2.28例FAB分型诊断为ALL的病例中,通过免疫表型的分析检测可明确的区分为T-ALL(9例)和B-ALL(18例)以及T、B混合型ALL(1例)。结论比较FAB与免疫学分型,在AML中白血病抗原表达的专一性不如ALL强,不如细胞学直观、分型仔细;在ALL中,免疫学分型显示出其独特的价值和不可替代的作用。