简介：Theproinflammatorycytokinetumornecrosisfactor-α(TNF-α)regulatesimmuneresponses,inflammationandprogrammedcelldeath.TheultimatefateofacellexposedtoTNF-αisdeterminedbysignalintegrationbetweenitsdownstreameffectors,includingcaspases,IKBkianse(IKK)andc-JunN-terminalproteinkinase(JNK).However,themolecularmechanismsareincompletelyunderstood.Weinvestigatedthisissueusinggeneticandbiochemicalapproaches.WeidentifiedIKKβ,acatalyticsubunitoftheIKKcomplexthatisrequiredforNF-KBactivationandcellsurvivalinresponsetoTNF-α,wasproteolyzedbycasp-3-relatedcaspases.ThisproteolysiseliminatedIKKactivityandpromotedTNF-α,killing.Point

简介：Objective:Cancercellradioresistanceisastumblingblockinradiationtherapy.TheactivityinthenuclearfactorkappaB(NFκB)pathwaycorrelateswithanti-apoptoticmechanismsandincreasedradioresistance.TheIKKcomplexplaysamajorroleinNFκBactivationuponnumeroussignals.Inthisstudy,weexaminedtheinteractionbetweenionizingradiation(IR)anddifferentmembersoftheIKK-NFκBpathway,aswellasupstreamactivators,RAF1,ERK,andAKT1.Methods:Theeffectof4GyofIRontheexpressionoftheRAF1-ERK-IKK-NFκBpathwaywasexaminedinA549andH1299lungcancercelllinesusingWesternblotanalysisandconfocalmicroscopy.WeexaminedchangesinradiationsensitivityusinggenesilencingorpharmacologicalinhibitorsofERKandIKKβ.Results:IKKα,IKKγ,andIκBαincreaseduponexposuretoIR,therebyaffectingnuclearlevelsofNFκB(phospho-p65).ERKinhibitionorsiRNA-mediateddown-regulationofRAF1suppressedthepost-irradiationsurvivaloftheexaminedlungcancercelllines.AsimilareffectwasdetectedonsurvivaluponsilencingIKKα/IKKγorinhibitingIKKβ.Conclusions:ExposureoflungcancercellstoIRresultsinNFκBactivationviaIKK.ThegeneticorpharmacologicalblockageoftheRAF1-ERK-IKK-NFκBpathwaysensitizescellstotherapeuticdosesofradiation.Therefore,theIKKpathwayisapromisingtargetfortherapeuticinterventionincombinationwithradiotherapy.

简介：IKK复合物由IKKα、IKKβ和IKKγ组成，是NF-κB通路中的重要分子，主要调控NF-κB通路的活化。近年的研究发现，IKK复合物还存在许多NF-κB非相关性的功能，主要涉及肿瘤发生、应激反应、转录调控、免疫功能及细胞周期调控等方面。IKK复合物的NF-κB非相关性的功能研究集中于IKKα和IKKβ亚基，并且存在激酶活性依赖和非依赖2种作用方式。对于该功能的深入探讨，对全面理解IKK分子的生理病理功能十分重要，并且为IKK分子的研究提出了一个新的方向。

简介：目的观察黄芩苷对脂多糖（LPS）刺激下人牙周膜细胞NF-κB非经典途径IKKα表达的影响。方法酶消化法体外分离、培养、鉴定人牙周膜细胞（hPDLCs）;CCK-8检测黄芩苷对hPDLCs增殖的影响;实验分空白对照组（NC）、LPS组、LPS＋黄芩苷1~4组;酶联免疫吸附试验检测炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β的分泌,蛋白质免疫印迹法（WesternBlot）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检查IKKα蛋白及mRNA的表达。结果0.001~50mg/L黄芩苷对hPDLCs增殖起促进作用;ELISA结果显示,LPS组与NC组相比,IL-1β、TNF-α分泌量增加,LPS＋黄芩苷1~4组随着黄芩苷浓度的增加炎症因子分泌量减少;WesternBlot结果显示IKKα蛋白的表达在LPS组较NC组高,LPS＋黄芩苷1~4组较LPS组低,且RT-PCR结果与WesternBlot结果相一致。结论黄芩苷介导了LPS刺激下人牙周膜细胞中NF-κB非经典途径IKKα表达下调,对牙周膜细胞的炎症损伤起保护作用。

简介：摘要目的探讨微小RNA-429(micro RNA-429，miR-429)对神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞增殖、侵袭和转移的影响，及其在NB细胞中对IKKβ是否有调控作用及其调控机制。方法选择2016年6月至2018年6月青岛大学附属医院小儿外科术中切除的NB原发肿瘤组织和瘤旁正常组织。采用RT-PCR检测NB组织和正常对照组织中miR-429的表达水平；RT-PCR检测miR-429在NB细胞SH-SY5Y、SK-N-SH和对照细胞HUVEC中的表达情况；在SH-SY5Y和SK-N-SH中抑制miR-429的表达，采用细胞集落形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验和流式细胞术检测NB细胞增殖、侵袭和转移能力的变化；在SH-SY5Y和SK-N-SH中过度表达miR-429，采用细胞集落形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验和流式细胞术检测NB细胞增殖、侵袭和转移能力的变化；基因软件预测miR-429的靶基因并用荧光素酶报告实验进行验证；过度表达miR-429，采用RT-PCR和Western blot检测其对NF-κB通路下游基因cyclinD1、IL-8、Bcl2的影响，并用MTT检测过表达IKKβ后，miR-429对NB细胞抗肿瘤作用影响的变化。结果RT-PCR检测显示miR-429在NB组织中的表达为0.46±0.08，明显低于对照组织1.11±0.12，且差异有统计学意义(P<0.05)；miR-429在SH-SY5Y和SK-N-SH中的表达分别为0.37±0.06和0.45±0.08，明显低于HUVEC中的1.07±0.11，且差异有统计学意义(P<0.01)。抑制miR-429表达后，RT-PCR显示miR-429 mRNA在SH-SY5Y和SK-N-SH分别为0.42±0.07和0.27±0.03，与对照组相比抑制作用明显(P均<0.01)。抑制miR-429表达后，细胞集落形成实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞集落形成分别为(255±6)个和(275±9)个，明显高于对照组(67±2)个和(82±3)个，且差异有统计学意义(P均<0.01)；细胞划痕实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞的愈合率分别为55%和61%，较对照组25%和36%高，且差异有统计学意义(P均<0.05)；细胞侵袭实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞侵袭数量分别为(74±2)个和(96±4)个，与对照组(34±1)个和(45±1)个比较，细胞侵袭能力明显增强(P均<0.05)；流式细胞术显示，各组NB细胞的凋亡显著降低(P均<0.05)。过度表达miR-429后，RT-PCR显示miR-429 mRNA在SH-SY5Y和SK-N-SH的相对表达量为9.2±0.5和8.8±0.4，与对照组相比，过表达作用明显(P均<0.01)。过度表达miR-429后，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞集落形成分别为(20±1)个和(29±2)个，较对照组(76±2)个和(98±3)个低，且差异有统计学意义(P均<0.01)；划痕实验中SH-SY5Y和SK-N-SH细胞愈合率为5%和7%，均较对照组22%和30%低，且差异有统计学意义(P均<0.05)；侵袭实验中，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞侵袭数量分别为(15±1)个和(11±1)个，均较对照组(38±1)个和(43±2)个低，且差异有统计学意义(P均<0.05)；流式细胞术中，各组NB细胞的凋亡增加(P均<0.05)。过度表达miR-429后，RT-PCR检测cyclinD1、IL-8、Bcl2在SH-SY5Y(0.73±0.04、0.71±0.03、0.78±0.04)和SK-N-SH(0.65±0.03、0.73±0.03、0.58±0.02)的表达均较对照组降低，Western blot显示cyclinD1、IL-8、Bcl2蛋白表达下降，MTT显示IKKβ的过度表达，与对照组相比细胞增殖增加上述指标组间比较，差异均有统计学意义(P<0.01或<0.05)。结论miR-429可能通过靶向调控IKKβ进而调节NF-κB炎症信号通路抑制NB细胞体外增殖、侵袭和转移，miR-429可以尝试作为阻断NB进展的潜在靶点。

简介：摘要目的探讨IKKε对小鼠腹主动脉瘤形成过程中血管平滑肌细胞自噬的影响。方法将载脂蛋白E敲除(ApoE-/-)的小鼠与载脂蛋白E和IKKε双敲(ApoE-/-IKKε-/-)的小鼠用生理盐水(saline)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)分别刺激28天，检测小鼠的代谢水平以及用超声心动图检测小鼠的动脉直径，应用HE染色检测动脉瘤的病理性变化，马松染色检测小鼠动脉的纤维化水平，荧光法检测活性氧的产生和释放水平，免疫组化和Western blot检测自噬相关因子的表达变化情况。结果ApoE-/-IKKε-/-双敲小鼠与ApoE-/-单敲小鼠代谢水平差异无统计学意义，ApoE-/-IKKε-/-双敲小鼠动脉直径显著小于ApoE-/-单敲小鼠。ApoE-/-IKKε-/-双敲小鼠纤维胶原化水平显著低于ApoE-/-单敲小鼠，且ApoE-/-IKKε-/-双敲小鼠中活性氧的产生水平明显低于ApoE-/-单敲小鼠。免疫组化与Western blot结果均发现，ApoE-/-IKKε-/-双敲小鼠中LC3B与Beclin-1的表达水平均较ApoE-/-单敲小鼠有明显的降低。结论小鼠IKKε基因的敲除能够明显抑制血管平滑肌细胞自噬，从而减少小鼠腹主动脉瘤的形成。

简介：AIMProstaglandinA1(PGA1)isacyclopentenoneprostaglandin.Recently,wereportedthatPGA1caninhibitexcitotoxin-inducedapoptosisofstriatalneuronsinvivoandrotenone-inducedapoptosisofculturedSH-SY5Ycells,suggestingthatPGA1mayhaveneuroprotectiveefficacy,possiblymediatedbyinhibitionofNF-kBactivation.ThepresentstudyevaluatedtheneuroprotectivepotentialofPGA1anditseffectonIKK/I(B/NF-kB/c-mycsignalingpathwayinratmodelsofpermanentfocalcerebralischemia.METHODSPermanentmiddlecerebralarteryocclusion(pMCAO)modelwasconstructedbyintraluminalsuturecannulationthroughtheinternalcarotidarteryinWistarrats.