简介：摘要目的比较不同实验条件下SpyTag/SpyCatcher体系共价连接的效率，分析得出优化后的连接条件，为今后相关纳米颗粒疫苗的开发提供实验依据。方法用大肠埃希菌表达分别带有SpyTag和SpyCatcher结构的两种蛋白，摸索共价连接的反应时间、温度、缓冲体系和混合比例，采用非还原型凝胶电泳检测共价连接的效率。结果反应时间对共价连接的影响有统计学意义(F＝22.028，P<0.05)，带有SpyTag和SpyCatcher结构的两种蛋白质可形成稳定的共价键，6 h后连接效率约为50%，偶联蛋白在25 ℃稳定存在至少72 h。反应温度和缓冲体系对共价连接的影响没有统计学意义。SpyTag和SpyCatcher结构蛋白比例为物质的量比1.0∶2.0混合。结论SpyTag/SpyCatcher共价连接体系的关键工艺参数为反应时间，且该体系能适用于多种温度和缓冲条件。
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