简介：根据已发表的植酸酶基因phyA序列(GI:4815609和GI:22901877)设计引物,以米曲霉(AsperillusoryaeCohn,编号:ACCC30155)的总DNA为模板,利用PCR扩增得到目的片段.将此片段克隆到表达载体pPIC9K的EcoRⅠ酶切位点构建重组质粒,通过电转化方式将重组质粒转化毕赤酵母(Pichiapastoris).检测结果表明,植酸酶基因在毕赤酵母中得到了表达.

简介：目的：制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法：采用杂交瘤技术，获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶（rUOX）的杂交瘤细胞McAb17和McAb3；采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果：McAb17和McAb3的腹水效价达到1：512000，纯化后获得纯度大于95％的单抗，抗体亚类（型）分别为IgG1／k型和IgG2a／k型；ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase（商品化rUOX）可发生特异反应。结论：制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3，为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。

简介：目的：对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化，找出最佳的外源蛋白表达条件。方法：在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养，优化最佳产酶条件。结果：以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100～200mL/L、甲醇浓度1g/L、pH6.0～7.0、诱导时间96h时酶的表达量最高；摇瓶模拟高密度培养表明影响酵母生长的最主要因素葡萄糖和硫酸铵的最佳浓度分别为20～45和11.5g/L；利用培养基F1进行高密度培养优于其他培养基，工程菌生长符合指数生长曲线，细胞生长延迟期为1.36h，比生长速率μ为0.4846h-1。结论：以葡萄糖为碳源，采用葡萄糖-甲醇混合诱导和100%甲醇单一诱导相结合，在菌体鲜重约为280g/L时连续诱导96h，菌体生长良好，不会出现自溶，且酶的表达量最高，为摇瓶培养的3倍多，酶活最高可达540U/mL。

简介：目的：研究柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU阻断后的产物（13s）-13-二氢柔红霉素及其他发酵产物的变化。方法：利用同源重组的原理，以大肠杆菌质粒pUC18为基础构建了dnrU基因交换质粒，通过在SIPI-1482染色体上的dnrU基因中插入安普霉素抗性基因来筛选dnrU的阻断突变株。结果和结论：PCR验证表明成功地阻断了dnrU基因。dnrU基因敲除后，重组菌发酵产物中（13s）-13-二氢柔红霉素消失，而其他发酵中间产物也有一定变化。