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  • 简介:摘要目的在体外研究结直肠癌细胞中人类无翅相关集合位点家族2号基因(Wnt2)对糖激酶2(HK2)表达的影响,探讨其调控机制。方法使用慢病毒构建高表达Wnt2的人结直肠腺癌细胞(Caco2)稳转株细胞(Caco2-Wnt2、Caco2-NC)和低表达Wnt2的人回盲肠癌细胞(HCT8)稳转株细胞及其对照组(HCT8-shWnt2、HCT8-shNC);通路富集分析(GSEA)探究Wnt2参与结直肠癌发生发展的可能机制,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测转染效率和稳转株中8种有氧糖酵解相关分子的表达;信号传导与转录激活因子3(STAT3)通路抑制剂酪氨酸磷酸化抑制剂(AG490)分别在50 mmol/L和100 mmol/L浓度下抑制STAT3磷酸化,固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt2、HK2、STAT3、磷酸化信号转导与转录活化因子3(pSTAT3)的mRNA和蛋白表达水平。组间差异比较采用t检验。结果Wnt2基因被富集到氨基糖和核苷酸糖代谢通路;Caco2-Wnt2组中HK2的mRNA表达水平高于Caco2-NC组(1.937±0.076比1.029±0.013,t=11.789,P<0.01),差异有统计学意义,HCT8-shWnt2组中HK2的mRNA表达水平低于HCT8-shNC组(0.375±0.029比1.064±0.016,t=20.920,P<0.01),差异有统计学意义;Western blot结果显示,Caco2-Wnt2组中的pSTAT3蛋白表达水平高于Caco2-NC组(0.350±0.004比0.170±0.008,t=19.068,P<0.01),差异有统计学意义,HCT8-shWnt2组中的pSTAT3蛋白表达水平低于HCT8-shNC组(0.275±0.014比0.530±0.035,t=6.829,P<0.01),差异有统计学意义;同时,Caco2-Wnt2+50 mmol/L组中的HK2的蛋白表达水平低于Caco2-Wnt2+DMSO组(0.362±0.013比1.524±0.023,t=44.703,P<0.01),差异有统计学意义;Caco2-Wnt2+100 mmol/L组中的HK2的蛋白表达水平低于Caco2-Wnt2+二甲基亚砜(DMSO)组(0.405±0.018比1.524±0.023,t=38.749,P<0.01),差异有统计学意义。结论Wnt2通过STAT3通路调控结直肠癌细胞Caco2和HCT8中HK2的表达。

  • 标签: 结直肠癌 己糖激酶2
  • 简介:摘要目的将聚内酯(PCL)薄膜与1,1′-双十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基吲哚碳菁高氯酸盐(DiI)标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养,制备细胞补片。方法取1只清洁级SD大鼠作为实验对象,通过分离培养获得大鼠BMSCs,并进行流式细胞仪鉴定表面标志物。BMSCs培养至3代后,使用DiI染料对BMSCs标记,将DiI标记的BMSCs与PCL制成的薄膜共培养,24 h后在荧光显微镜下观察细胞生长情况,并固定进行电镜扫描,在培养的1、4、7、10 d分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD分析。结果BMSCs流式细胞术鉴定:CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。荧光显微镜下,可见DiI标记的BMSCs发红光,呈梭形或多边形。扫描电镜下,PCL薄膜与DiI标记的BMSCs共培养形成的细胞补片,其表面细胞数量多,细胞状态正常。CCK-8测定结果显示第1天吸光度(A)值为0.330±0.025;第4天A值为0.620±0.012,第7天A值为1.033±0.144,第10天A值为1.223±0.133。各时间点A值之间差异有统计学意义(F=66.441,P<0.05)。结论PCL薄膜可以作为一种DiI标记示踪的支架材料,用于干细胞治疗。

  • 标签: 干细胞治疗 聚己内酯 骨髓间充质干细胞 支架
  • 简介:目的探讨对新生儿缺氧缺血性脑病应用单唾液酸四糖神经节苷脂钠注射液联合高压氧治疗的临床效果,分析对患儿血清相关因子的影响。方法选取2012年1月—2017年5月安康市中心医院诊治的缺氧缺血性脑病患儿96例,根据随机数字表法分成2组,分别是对照组和研究组,每组各48例,将常规治疗联合高压氧治疗应用于对照组,将单唾液酸四糖神经节苷脂钠注射液联合高压氧治疗应用于研究组,共治疗3个疗程。对比两组患儿的治疗总有效率、意识反射恢复时间、可吸吮恢复时间、意识恢复时间、肌张力恢复时间,血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等水平。结果治疗后对照组患儿的肌张力恢复时间、意识反射恢复时间、可吸吮恢复时间、意识恢复时间显著高于研究组(P〈0.05);对照组患儿治疗后的总有效率为81.2%,显著低于研究组患儿治疗后的总有效率93.7%(P〈0.05)。治疗后,两组血清IGF-1、GH水平均显著高于治疗前(P〈0.05),血清sICAM-1水平显著低于治疗前(P〈0.05);且研究组治疗后血清IGF-1、GH水平均显著高于对照组(P〈0.05),血清sICAM-1水平显著低于对照组(P〈0.05)。结论对新生儿缺氧缺血性脑病患者应用单唾液酸四糖神经节苷脂钠注射液联合高压氧治疗的临床效果佳,可以有效降低患儿血清sICAM-1水平,有效提高患儿血清IGF-1水平和GH水平,值得推广。

  • 标签: 缺氧缺血性脑病 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液 高压氧治疗 血清相关因子