简介:摘要目的探究微小RNA-425-5p(miR-425-5p)在大鼠心肌梗死(MI)诱发实验性心肌纤维化中的调控作用及其潜在的作用机制。方法在体水平选用雄性SD大鼠20只,采用随机数字表法分为假手术组、MI模型组。采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠MI模型,假手术组开胸后只做冠状动脉穿线并不结扎。模型建立4周后,取心肌组织进行Masson染色及胶原含量测定,分析两组大鼠心肌纤维化程度。采用实时荧光定量PCR检测miR-425-5p及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达,借助Western Blot检测TGF-β1蛋白的表达水平。为验证miR-425-5p是否可以调控TGF-β1的表达,采用氯化钴及低糖培养液处理来源于胚胎期BD1X大鼠心脏组织的亚克隆细胞系H9c2,构建体外细胞模型模拟在体MI模型,并将H9c2细胞分为对照组、模型组、miR-425-5p mimic处理组。采用RT-PCR及Western Blot分别检测上述三组细胞中miR-425-5p和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达。结果Masson染色及胶原含量测定结果显示,与假手术组比较,MI模型组大鼠心肌组织内胶原纤维粗大,大量胶原堆积,胶原含量显著增加(0.68±0.09比0.34±0.08,t=0.153, P<0.01);miR-425-5p水平显著降低,TGF-β1的mRNA及蛋白表达显著增加(均为P<0.01)。体外细胞实验表明,miR-425-5p mimic可以逆转氯化钴诱导H9c2细胞缺氧模型细胞中TGF-β1表达上调(P<0.05)。结论miR-425-5p参与MI诱发的实验性心肌纤维化的调控,其作用可能与调控TGF-β1信号通路密切相关。
简介:摘要:VTG增压器是一种智能化增压系统,其工作原理基于可变几何涡轮技术。这种技术使得涡轮可以在不同的柴油机负载和转速下产生更高的增压压力,并在柴油机高速运行时减小增压压力,以达到最佳燃油效率。
简介:摘要 目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)TMPO-AS1通过调节miR-204-3p的表达对胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染技术沉默U251细胞中TMPO-AS1,qPCR检测TMPO-AS1和miR-204-3p的表达情况,噻唑蓝比色法( MTT)、流式细胞术和Transwell实验分别检测沉默TMPO-AS1对U251细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响,Western blot 检测U251细胞中凋亡及侵袭相关蛋白的表达。结果:沉默TMPO-AS1促进miR-204-3p的表达(P < 0 . 0 5 ),TMPO-AS1能够降低miR-204-3p野生型细胞的相对荧光素酶活性(P < 0 . 0 5 )。沉默TMPO-AS1能够明显抑制U251细胞增殖和侵袭能力(P < 0 . 0 5 ),降低增殖相关蛋白及侵袭相关蛋白的表达( P < 0 . 0 5 );促进U251细胞凋亡相关蛋白的表达(P < 0 . 0 5 )。结论: 抑制TMPO-AS1比表达可通过上调miR-204-3p的表达抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡。
简介:摘要目的探究桥本甲状腺炎(HT)患者外周血miR-454、miR-146a水平及意义。方法选取2018年1月至2020年6月来芜湖市第一人民医院就诊的桥本甲状腺炎患者56例作为HT组,并根据甲状腺功能分成甲状腺功能正常(HT-A组)16例,亚临床甲状腺功能减退(HT-B组)19例,临床甲状腺功能减退(HT-C组)21例,同期选取体检健康者50名作为健康组,比较HT组与健康组的甲状腺功能[促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)]、及外周血miR-454、miR-146a表达水平,探究miR-454、miR-146a与HT病情的关系。结果HT-A组、HT-B组、HT-C组外周血miR-454及miR-146a表达水平均高于健康组,随HT患者甲状腺功能减退而升高(P均<0.05);miR-454与TSH、TgAb、TPOAb均呈正相关,与FT3、FT4呈负相关(P<0.05);miR-146a与TSH、TgAb、TPOAb均呈正相关,与FT3、FT4呈负相关(P均<0.05)。结论HT患者外周血中miR-146a及miR-454水平均较健康人高,miR-146a及miR-454可能与甲状腺功能减退相关。
简介:摘要目的检测肾移植受者术后血浆外泌体miR-21、miR-210和miR-4639表达变化,分析外泌体miR-21、miR-210和miR-4639单独及联合对肾移植术后并发慢性移植肾肾病(CAN)的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月苏州大学附属第三医院泌尿外科实施的同种异体肾移植受者临床资料,最终纳入34例受者,根据肾移植术后是否发生CAN将其分为CAN组及对照组。采用凝胶排阻色谱法提取血浆外泌体,采用Nanosight NS300分析外泌体粒径,采用蛋白质印迹法(WB)分析外泌体表面标志物(CD63和Alix)表达情况。采用卡方检验比较CAN组和对照组受者性别比例。采用成组t检验比较两组受者移植前年龄、末次血清肌酐、血清尿素氮和估算肾小球滤过率(eGFR)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体miR-210、miR-21和miR-4639对肾移植术后并发CAN的诊断效能。P<0.05为差异有统计学意义。结果CAN组(n=18例)和对照组(n=16例)受者性别以及移植前年龄、末次血清肌酐、血清尿素氮和eGFR差异均无统计学意义(χ2=0.04、t=0.86、-1.84、-1.83和0.85,P均>0.05)。透射电镜、Nanosight NS300及WB检测结果均提示提取样本为血浆外泌体。CAN组与对照组血浆外泌体miR-210、miR-21和miR-4639相对表达量差异均有统计学意义(t=4.13、3.38和2.33,P均<0.05)。miR-210预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.854(95%CI:0.730~0.979,P<0.05),当截断值=1.320时,敏感度为66.7%,特异度为93.8%。miR-21预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.774(95%CI:0.618~0.931,P<0.05),当截断值=1.243时,敏感度为55.6%,特异度为93.8%。miR-4639预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.670(95%CI:0.482~0.859,P<0.05),当截断值=0.936,敏感度为66.7%,特异度为75.0%。随后,构建基于miR-210、miR-21和miR-4639 3个指标的联合诊断模型,回归方程z=5.293×[miR-210]+5.046×[miR-21]+0.433×[miR-4639]-13.373,联合预测概率值p=ez/(1+ez)。miR-210、miR-21和miR-4639联合预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.938(95%CI:0.860~1.015,P<0.05),当截断值=0.587,敏感度为83.33%,特异度为93.75%。当联合预测值为0.587时,CAN组有83.3%(15/18)的个体被联合预测模型诊断出阳性结果,而对照组有93.8%(15/16)的个体被联合预测模型诊断出阴性结果,表明该联合预测模型有较好的诊断价值。结论miR-210、miR-21和miR-4639组成的miRNA阵列可能可以用于早期诊断肾移植术后并发CAN。
简介:摘要目的探讨RNCR2对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及作用机制。方法体外培养肾小球系膜细胞SV40-MES-13,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-RNCR2组、高糖+miR-NC组、高糖+miR-130b组、高糖+si-RNCR2+anti-miR-NC组和高糖+si-RNCR2+anti-miR-130b组,RT-qPCR检测RNCR2、miR-130b、MCP-1和IL-6的mRNA表达水平,酶联免疫吸附法检测MDA和SOD水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Caspase3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证RNCR2与miR-130b调控关系。结果与对照组比较,高糖组SV40-MES-13细胞中RNCR2水平(3.66±0.11比0.97±0.09)、MDA含量[(14.52±0.60)nmol/ml比(5.71±0.44)nmol/ml]、细胞凋亡率、Caspase3蛋白及MCP-1和IL-6的mRNA水平均升高(P<0.05),SOD水平[(14.84±0.43)U/ml比(39.59±1.19)U/ml]降低(P<0.05)。与高糖+si-NC组比较,高糖+si-RNCR2组SV40-MES-13细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Caspase3蛋白及MCP-1和IL-6的mRNA水平均降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。RNCR2在SV40-MES-13细胞中负调控miR-130b表达。与高糖+miR-NC组比较,高糖+miR-130b组SV40-MES-13细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Caspase3蛋白及MCP-1和IL-6的mRNA水平均降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。与高糖+si-RNCR2+anti-miR-NC组比较,高糖+si-RNCR2+anti-miR-130b组SV40-MES-13细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Caspase3蛋白及MCP-1和IL-6的mRNA水平均升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05)。结论干扰RNCR2表达可能通过负调控miR-130b降低高糖诱导的肾小球系膜细胞SV40-MES-13氧化应激、炎症反应和凋亡,保护细胞损伤。
简介:摘要目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清let-7、微小RNA-26b(miR-26b)表达水平及与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2018年3月至2019年3月本院内分泌科收治的60例初诊T2DM患者作为T2DM组,及同期本院70例健康体检者作为对照组。收集两组受试者临床资料,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清let-7、miR-26b表达水平;观察T2DM患者血清let-7、miR-26b表达水平及其与其他临床指标相关性,并采用ROC曲线分析血清let-7、miR-26b表达水平对T2DM患者发生IR的预测价值。结果T2DM组患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著高于对照组(P<0.05),胰岛素敏感性指数(ISI)、稳态模型评估的胰岛素β细胞功能指数(HOMA-β)均明显低于对照组(P<0.05)。T2DM组患者血清let-7、miR-26b表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。T2DM组患者血清let-7、miR-26b表达水平与TC、TG、HbA1c、FPG、FINS及HOMA-IR均呈负相关(P<0.05),与ISI、HOMA-β均呈正相关(P<0.05)。ISI、HOMA-IR及血清let-7、miR-26b表达水平均是影响T2DM患者发生IR的独立危险因子(P<0.05)。血清let-7表达水平预测T2DM患者发生IR的曲线下面积(AUC)为0.858,最佳截断值为0.73,灵敏度和特异度分别为77.50%、80.00%;血清miR-26b表达水平预测T2DM患者发生IR的AUC为0.908,最佳截断值为0.60,灵敏度为80.00%,特异度高达92.50%。结论T2DM患者血清let-7、miR-26b表达水平均显著下调,两者可能共同参与IR发生、发展,对T2DM患者发生IR均具有一定预测价值,且miR-26b预测效果更优。
简介:摘要目的探究miR-20b通过调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)细胞外调节蛋白激酶(ERK)途径对慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型气道炎症改善情况及作用机制。方法SPF级成年SD雌性小鼠120只,使用随机数字表,将以上小鼠随机分为空白组、模型组、miR-20b组以及对照组,每组小鼠30只,分析4组小鼠的肺功能、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、炎性因子、ERK蛋白以及磷酸化蛋白水平之间的差异。结果4组小鼠的肺功能比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),其中空白组用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)、0.1 s呼气量(PEV0.1)高于miR-20b组、模型组和对照组,miR-20b组FVC、PEF、PEV0.1高于模型组和对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而模型组和对照组的FVC、PEF、PEV0.1之间比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);4组小鼠的MDA以及SOD水平比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),其中模型组和对照组MDA以及SOD水平高于miR-20b组、空白组,miR-20b组MDA以及SOD水平高于空白组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而模型组和对照组的MDA以及SOD水平比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);4组小鼠的白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),其中模型组和对照组IL-6、IL-8、TNF-α水平高于miR-20b组、空白组,miR-20b组IL-6、IL-8、TNF-α水平高于空白组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而模型组和对照组的IL-6、IL-8、TNF-α水平比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);4组小鼠的ERK蛋白以及磷酸化蛋白水平比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),其中空白组ERK蛋白水平高于miR-20b组、模型组和对照组,miR-20b组ERK蛋白水平高于模型组和对照组,空白组磷酸化蛋白水平低于miR-20b组、模型组和对照组,miR-20b组磷酸化蛋白水平低于模型组和对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而模型组和对照组的ERK蛋白以及磷酸化蛋白水平之间比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论miR-20b通过抑制性调节MAPK/ERK途径,显著改善COPD动物模型气道炎症反应。
简介:AIMToinvestigatetheroleofthecomplement5a(C5a)/C5areceptor(C5aR)pathwayinthepathogenesisofacuteliverfailure(ALF)inamousemodel.METHODSBALB/cmicewererandomlyassignedtodifferentgroups,andintraperitonealinjectionsoflipopolysaccharide(LPS)/D-galactosamine(D-GalN)(600mg/kgand10μg/kg)wereusedtoinduceALF.TheKaplanMeiermethodwasusedforsurvivalanalysis.Serumalanineaminotransferase(ALT)levels,atdifferenttimepointswithina1-wkperiod,weredetectedwithabiochemistryanalyzer.Pathologicalexaminationoflivertissuewasperformed36hafterALFinduction.Serumcomplement5(C5),C5a,tumornecrosisfactor-α(TNF-α),interleukin(IL)-1β,IL-6,high-mobilitygroupproteinB1(HMGB1)andsphingosine-1-phosphatelevelsweredetectedbyenzyme-linkedimmunosorbantassay.Hepaticmorphologicalchangesat36hafterALFinductionwereassessedbyhematoxylinandeosinstaining.ExpressionofC5aR,sphingosinekinase1(SphK1),p38-MAPKandp-p38-MAPKinlivertissue,peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andperitonealexudativemacrophages(PEMs)ofmiceorRAW264.7cellswasanalyzedbywesternblotting.C5aRmRNAlevelsweredetectedbyquantitativereal-timePCR.RESULTSActivationofC5andup-regulationofC5aRwereobservedinlivertissueandPBMCsofmicewithALF.BlockadeofC5aRwithaC5aRantagonist(C5aRaC5aRa)significantlyreducedthelevelsofserumALT,inflammatorycytokines(TNF-α,IL-1βandIL-6)andHMGB1,aswellasthelivertissuedamage,butincreasedthesurvivalrates(P<0.01forall).BlockadeofC5aRdecreasedSphK1expressioninbothlivertissueandPBMCssignificantlyat0.5hafterALFinduction.C5aRapretreatmentsignificantlydownregulatedthephosphorylationofp38-MAPKinlivertissuesofALFmiceandC5astimulatedPEMsorRAW264.7cells.Moreover,inhibitionofp38-MAPKactivitywithSB203580reducedSphK1proteinproductionsignificantlyinPEMsafterC5astimulation.CONCLUSIONTheC5a/C5aRpath