简介：摘要目的探讨敲低肿瘤坏死因子（TNF）-α对骨癌痛大鼠的镇痛作用和对脊髓和背根神经节（DRG）中瞬时受体电位香草酸受体1（TRPV1）的调节机制。方法构建稳定敲低TNF-α的病毒载体（AAV9-shRNA-TNF-α）后，40只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为4组（n=10），假手术组：大鼠左后肢胫骨骨腔中植入煮沸的Walker 256细胞构建假手术组；肿瘤细胞植入组（TCI组）：将Walker 256细胞植入大鼠左后肢胫骨骨腔中诱导骨癌痛模型；TCI+AAV9-shRNA-TNF-α组：TCI大鼠鞘内注射AAV9-shRNA-TNF-α；TCI+AAV9-shRNA-NC组：TCI大鼠鞘内注射AAV9-shRNA-TNF-α的阴性对照（NC）。各组大鼠造模前1 d及造模后1、3、7、14、21 d分别使用von Frey纤维测痛仪以及热板痛觉测试仪检测大鼠左后足的机械痛阈值和热痛觉缩足潜伏期；于造模后21 d处死各组大鼠取L4~L5节段脊髓和DRG。采用qRT-PCR和Western blot检测DRG和脊髓中TNF-α和TRPV1的表达。采用免疫荧光化学法检测脊髓TNF-α的水平。结果与假手术组比较，TCI组机械痛阈值在3 d（8.174±0.181）g、7 d（7.089±0.582）g、14 d（6.344±0.222）g、21 d（7.603±0.122）g降低（P值依次为0.006、0.021、0.016、0.022），热痛觉缩足潜伏期在3 d（6.41±1.05）s、7 d（6.21±0.15）s、14 d（6.58±0.12）s、21 d（6.42±0.47）s也降低（P值依次为0.003、0.018、0.012、0.032）；与假手术组比较，TCI组21 d时的DRG中TNF-α的mRNA和蛋白表达均升高（P=0.013与0.008），脊髓中TNF-α蛋白表达升高（P=0.017），DRG中TRPV1的mRNA升高（P=0.006），脊髓中TRPV1 mRNA和蛋白表达增加（P分别为0.016，0.009）。与TCI+AAV9-shRNA-NC组比较，TCI+AAV9-shRNA-TNF-α组机械痛阈值在3 d（12.224±0.802）g、7 d（15.331±1.917）g、14 d（18.903±5.882）g、21 d（21.321±4.695）g升高（P值依次为0.011、0.023、0.018、0.006），热痛觉缩足潜伏期在3 d（10.18±0.23）s、7 d（11.91±0.53）s、14 d（11.76±0.17）s、21 d（12.15±0.26）s也升高（P值依次为0.015、0.032、0.009、0.017）；与TCI+AAV9-shRNA-NC组比较，TCI+AAV9-shRNA-TNF-α组21 d的DRG中TNF-α的mRNA和蛋白表达均降低（P=0.029与0.017），脊髓中TNF-α蛋白表达降低（P=0.031），DRG中TRPV1的mRNA降低（P=0.036），脊髓中TRPV1 mRNA和蛋白表达降低（P=0.016，0.009）。结论沉默TNF-α可缓解骨癌痛模型大鼠的疼痛行为并抑制大鼠脊髓和DRG中TRPV1 mRNA水平及脊髓的TRPV1蛋白水平。