简介：Werecentlyreportedtheuseofagene-trappingapproachtoisolatecellclonesinwhichareportergenehadintegratedintogenesmodulatedbyT-cellactivation.WehavenowtestedapanelofclonesfromthatreportandidentifiedtheonethatrespondstoavarietyofG-proteincoupledreceptors(GPCR).TheβlactamasetaggedEGR-3JurkatcellwasusedtodissectspecificGPCRsignalinginvivo.ThreeGPCRswerestudied,includingthechemokinereceptorCXCR4(Gicoupled)thatwasendogenouslyexpressed,theplateletactivationfactor(PAF)receptor(Gq-coupled),andβ2adrenergicreceptor(Gs-coupled)thatwasbothstablytransfected.Agonistsforeachreceptoractivatedtranscriptionoftheβ-lactamasetaggedEGR-3gene.InductionofEGR-3throughCXCR4wasblockedbypertussistoxinandPD58059,aspecificinhibitorofMEK(MAPK/ERKkinase).NeitheroftheseinhibitorsblockedisoproterenolorPAF-mediatedactivationofEGR-3.Conversely,β2-andPAF-mediatedEGR-3activationwasblockedbythep38,specificinhibitorSB580.Inaddition,bothβ2-andPAF-mediatedEGR-3activationcouldbesynergisticallyactivatedbyCXCR4activation.ThiscombinedresultindicatesthatEGR-3canbeactivatedthroughdistinctsignaltransductionpathwaysbydifferentGPCRsandthatsignalscanbeintegratedandamplifiedtoefficientlytunethelevelofactivation.

简介：生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是上世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,FancL(也叫Pog)的缺失是产生gcd突变小鼠的原因.FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物中的组分之一.在生殖细胞中,FANCL与GGN1和GGN3相互作用,而GGN1和GGN3蛋白的功能还不清楚.为了研究GGN3的功能,揭示更多的参与该过程的蛋白质,运用Clontech公司新开发的第三套酵母双杂交系统以GGN3为诱饵从成年小鼠睾丸cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白分子.发现了一个精子生成期间在睾丸中特异性高表达的基因Ggnbp2,免疫共沉淀分析表明,Ggnbp2编码的蛋白质产物GGNBP2在哺乳动物细胞中与GGN3特异相互作用.通过构建突变体,确定了GGNBP2蛋白与GGN3相互作用的区域.以上结果为揭示GGN3和GGNBP2在生殖发育中的功能、丰富生殖细胞发育的蛋白调控网络及其调控规律奠定了一定的基础.

简介：利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4的相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体的同源和异源相互作用的双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递的功能区在中间连接区,SMAD3的功能区在C末端。

简介：利用PCR技术扩增HCVns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性.HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.

简介：卡介苗(BacilledeCalmette-Guerin,BCG)是世界上应用最广泛的菌苗,而且也是最安全,最稳定的疫苗,还是目前所知最强的免疫佐剂之一。由于在免疫学上具有许多独特优点,如:可研制成活菌苗、提高免疫力、延长保护期、适合表达免疫原性弱的抗原基因、方便、成本低等,使卡介苗在90年代迅速成为基因工程疫苗研究中的热点。要将BCG改造成为活的重组多价疫苗载体,集佐剂与抗原于一身,就需要在分枝杆菌中建立与E.coil类似的基因转化系统,使重组

简介：在已明确我国存在甲霜灵抗性菌株的基础上，通过单游动孢子分离技术获得马铃薯晚疫病菌DZO1和HZO1无性后代菌系。研究了无性单游动孢子后代菌系的生物学特性及甲霜灵抗性，主要结果如下：对无性后代菌系的菌落形态、生长量和产孢能力进行测定，发现被测的DZO1和HZO1无性后代菌系大部分菌株的生物学性状与亲本菌株相比没有发生明显的变异，个别菌株的生物学性状与亲本菌株有显著差异。说明晚疫病菌的无性繁殖未引起较大的变异；对后代菌系的甲霜灵抗性水平进行测定，结果表明DZO1和HZO1无性后代菌系的甲霜灵抗性水平与其对应的亲本菌株基本相同。

简介：测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3"LTR，以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术，从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3"LTR，并克隆入pGEM-Teasy载体，将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3’端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号；其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致，同源性分析表明其与PERV-MSL的3"LTR具有81％的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3’LTR，将有利于PERV全基因的克隆。

简介：<正>WeandothershavefirmlyestablishedthatsurfaceIgMreceptor(sIgM-R)crosslinkingwithantibodiestotheiheavychain(anti-i)leadstogrowtharrestandapoptosisinaseriesofwellcharacterizedB-celllymphomas.Thisrequiresablationofc-Mycproteinexpressionandtheconcomitantinductionofthecyclin-dependent-kinaseinhibitor,p27Kip1.Thesignalingmechanismsregulatingc-Mycandp27Kip1proteinexpressionarepoorlyunderstood.However,werecentlyestablishedthatsIgM-Rmediateddown-modulationofthePI-3Kpathwaydirectlyaffectedc-Mycandp27Kip1expressionandaccuratelypredictedgrowtharrest

简介：人工合成了芋螺毒素SO3的基因片段,通过链延伸方法获得了SO3的全长基因.在此基础上,将SO3基因插入到含抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因的pTIG-Trx表达载体中,构建含抗大鼠转铁蛋白受体单链抗体和SO3融合基因的重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)和Origmia(DE3)/DsbC并得到了表达,该融合蛋白主要以包涵体形式存在.为进一步研究芋螺毒素SO3跨血脑屏障转运和治疗作用奠定了基础.

简介：OverexpressionandactivationofHER-2/neu(alsoknownasc-erbB-2),aproto-oncogene,wasfoundinabout30%ofhumanbreastcancers,promotingcancergrowthandmakingcancercellsresistanttochemo-andradio-therapy.Wild-typep53iscrucialinregulatingcellgrowthandapoptosisandisfoundtobemutatedordeletedin60-70%ofhumancancers.Andsomecancerswithawild-typep53donothavenormalp53function,suggestingthatitisimplicatedinacomplexprocessregulatedbymanyfactors.Inthepresentstudy,weshowedthattheoverexpressionofHER-2/neucoulddecreasetheamountofwild-typep53proteinviaactivatingPI3Kpathway,aswellasinducingMDM2nucleartranslocationinMCF7humanbreastcancercells.BlockageofPI3KpathwaywithitsspecificinhibitorLY294002causedG1-Sphasearrest,decreasedcellgrowthrateandincreasedchemo-andradio-therapeuticsensitivityinMCF7cellsexpressingwild-typep53.However,itdidnotincreasethesensitivitytoadriamycininMDA-MB-453breastcancercellscontainingmutantp53.OurstudyindicatesthatblockingPI3KpathwayactivationmediatedbyHER-2/neuoverexpressionmaybeusefulinthetreatmentofbreasttumorswithHER-2/neuoverexpressionandwild-typep53.