简介:目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a(TNFa)引起的NF-kB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
简介:【背景】紫茎泽兰潜在的化感效应可能是其具有极强入侵性的重要原因。目前,针对紫茎泽兰潜在化感活性物质的研究主要集中于偏小极性的萜烯类化合物,而对大极性化学物质的研究相对较少。【方法】采用活性跟踪分析法对紫茎泽兰乙酸乙酯提取物大极性亚组分进行潜在化感活性物质的跟踪分离,并用现代波谱技术解析其化学结构,最后就分离获得的单体成分与已报道的化感活性物质羟基泽兰酮(2)和泽兰二酮(3)以及信号分子JA-Ile在抑制拟南芥种子萌发和幼苗根生长方面进行潜在化感活性的对比分析。【结果】分离鉴定出一个具有潜在强化感活性的大极性化合物2.香豆酸葡萄糖苷(1),研究发现该化合物虽然对拟南芥种子萌发的抑制作用不显著,但在0.1mmol·L^-1的浓度条件下对拟南芥幼苗根生长却有着比羟基泽兰酮和泽兰二酮更为显著的抑制活性,且其抑制作用的浓度一活性关系与信号分子JA-Ile类似。【结论与意义】紫茎泽兰中潜在大极性的非萜烯类化感活性物质对于紫茎泽兰的综合化感效应可能同样具有重要而不可或缺的作用,化合物1等潜在大极性化感活性物质的逐步揭示对于系统解析紫茎泽兰的化感效应机制具有重要意义。
简介:heterotrimericguanine核苷酸绑定蛋白质(G蛋白质)被表明了各种各样的发信号调停在植物的小径。然而,它在发信号的phytochromeA(phyA)的角色留下逃犯。在这研究,我们发现新调停phyA的显型指明了far-red照耀(FR)preconditioned房间死亡,它仅仅在跟随暴露到白光(WL)的FR-grown幼苗的胚轴发生。房间死亡在G变异的gpa1被减轻,但是与野类型(WT)比较在G变异的agb1加重了,在调停phyA的房间死亡小径的GPA1和AGB1的对抗角色的陈述语气。进一步的调查显示nonphotoconvertibleprotochlorophyllide(Pchlide633)的导致FR的累积,在暴露上产生反应的氧种类(ROS)到WL,为前提FR的房间死亡被要求。而且,ROS主要在叶绿体被检测用荧光灯探查。有趣地,到黑暗成年的幼苗的H2O2的申请导致类似于前提FR的房间死亡的显型。这表明ROS是为房间死亡的一个批评调停人。另外,我们观察到agb1比WT幼苗对H2O2更敏感,显示G蛋白质可以也修改到ROS应力的幼苗的敏感。一起拿这些结果,我们推断G蛋白质可以涉及表明小径调整Arabidopsis胚轴的前提FR的房间死亡的phyA。在phyA位于G蛋白质的参与下面发信号的可能的机制在这研究被讨论。
简介:Thestudyofsmalldrugmoleculesinteractingwithnucleicacidsisanareaofintenseresearchthathasparticularrelevanceinourunderstandingofrelativemechanisminchemotherapeuticapplicationsandtheassociationbetweengenetics(includingsequencevariation)anddrugresponse.Inthiscontribution,wedemonstratehowthesequence-specificbindingofananticancerdrugDacarbazine(DTIC)tosinglebase(A-G)mismatchcouldbesensitivelydetectedbycombiningelectrochemicaldetectionwithbiosensingsurfacebasedongoldnanoparticles.
简介:UnderstandingthecouplingspecificitybetweenGprotein-coupledreceptors(GPCRs)andspecificclassesofGproteinsisimportantforfurtherelucidationofreceptorfunctionswithinacell.IncreasinginformationonGPCRsequencesandtheGproteinfamilywouldfacilitatepredictionofthecouplingpropertiesofGPCRs.Inthisstudy,wedescribeanovelapproachforpredictingthecouplingspecificitybetweenGPCRsandGproteins.ThismethodusesnotonlyGPCRsequencesbutalsothefunctionalknowledgegeneratedbynaturallanguagepro-cessing,andcanachieve92.2%predictionaccuracybyusingtheC4.5algorithm.Furthermore,rulesrelatedtoGPCR-Gproteincouplingaregenerated.Thecom-binationofsequenceanalysisandtextminingimprovesthepredictionaccuracyforGPCR-Gproteincouplingspecificity,andalsoprovidescluesforunderstandingGPCRsignaling.
简介:AcomputationalsystemforthepredictionandclassificationofhumanG-proteincoupledreceptors(GPCRs)hasbeendevelopedbasedonthesupportvectormachine(SVM)methodandproteinsequenceinformation.ThefeaturevectorsusedtodeveloptheSVMpredictionmodelsconsistofstatisticallysignificantfeaturesselectedfromsingleaminoacid,dipeptide,andtripeptidecompositionsofproteinsequences.Furthermore,thelengthdistributiondifferencebetweenGPCRsandnon-GPCRshasalsobeenexploitedtoimprovethepredictionperformance.ThetestingresultswithannotatedhumanproteinsequencesdemonstratethatthissystemcangetgoodperformanceforbothpredictionandclassificationofhumanGPCRs.
简介:目的探讨兔肠道组织抗菌有效成分的组成及其性质.方法将新鲜兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测抗菌活性,再经SephadexG100和SephadexG75凝胶柱过滤层析,收集具有抗菌活性的蛋白组分,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色后,为一条蛋白带,其相对分子质量约为43×103.用琼脂糖弥散法和活菌计数实验检测纯化物对9株细菌的抑菌作用.结果分离得到一种纯的兔肠源抗菌蛋白,纯化的兔肠源抗菌蛋白对9株细菌的均有明显的抑菌作用,杀菌率介于78%与98%之间,显示了较强的抗菌活性.结论初步显示了兔肠源抗菌蛋白在细菌性疫病的防治方面的应用前景.
简介:G-proteincoupledreceptors(GPCRs)areaclassofseven-helixtransmembraneproteinsthathavebeenusedinbioinformaticsasthetargetstofacilitatedrugdiscoveryforhumandiseases.AlthoughthousandsofGPCRsequenceshavebeencollected,theligandspecificityofmanyGPCRsisstillunknownandonlyonecrystalstructureoftherhodopsin-likefamilyhasbeensolved.Therefore,identifyingGPCRtypesonlyfromsequencedatahasbecomeanimportantresearchissue.Inthisstudy,anoveltechniqueforidentifyingGPCRtypesbasedontheweightedLevenshteindistancebetweentworeceptorsequencesandthenearestneighbormethod(NNM)isintroduced,whichcandealwithreceptorsequenceswithdifferentlengthsdirectly.Inourexperimentsforclassifyingfourclasses(acetylcholine,adrenoceptor,dopamine,andserotonin)oftherhodopsin-likefamilyofGPCRs,theerrorratesfromtheleave-one-outprocedureandtheleave-half-outprocedurewere0.62%and1.24%,respectively.Theseresultsarepriortothoseofthecovariantdiscriminantalgorithm,thesupportvectormachinemethod,andtheNNMwithEuclideandistance.
简介:目的研究薰衣草精油对白念珠菌的体外抗菌活性和生物膜的影响,为临床真菌感染的治疗提供实验依据。方法采用纸片扩散法、连续稀释法测定薰衣草精油对白念珠菌的敏感性、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);采用XTT法检测其抑制白念珠菌生物膜50%细胞活性的浓度(SMIC50),镜下观察对生物膜形态的影响。结果白念珠菌对薰衣草精油高度敏感,薰衣草精油对白念珠菌的MIC为12.5μL/mL,MBC为25μL/mL;对生物膜的SMIC50是100μL/mL,对白念珠菌的菌丝生长有抑制作用。结论薰衣草精油在体外对白念珠菌有抑菌作用。
简介:目的:建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法,快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法:将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞,提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物,在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品,建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论:建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法,可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。
简介:目的:利用点击化学反应合成四氮唑类化合物,寻找温和的反应条件。对合成的四氮唑类化合物进行体外抑菌活性研究,以期发现抑菌活性化合物并初步研究其构效关系。方法:以氰基类化合物和叠氮钠为原料,溴化锌为催化剂,通过点击化学反应合成一类四氮唑结构化合物并研究其合成工艺条件的优化。利用微量二倍稀释法对合成的四氮唑类化合物进行体外抑菌活性测试。结果:利用所得到的优化点击化学反应条件合成了11个四氮唑类化合物,并发现化合物2h具有广谱抑菌活性。结论:优化后的点击化学反应条件温和,后处理方便,产率较高。抑菌活性和构效关系研究为后续的四氮唑类化合物抑菌活性研究工作提供了一定的基础,
简介:抽象Trehalose在保护有机体免受各种各样的压力的伤害起一个重要作用。Trehalose-6-phosphatesynthase(TPS)是在trehalose合成的关键酶,但是在昆虫,一些仅仅TPS基因被识别了,他们的功能很好没被描绘。更好在昆虫理解TPS的功能,完全的TPS互补DNA(cDNA)克隆从蝗虫草之小穗migratoriamanilensis的胖身体被获得(GenBank就职数字:EU131894)。全身的cDNA是2806bp,包括2442bp的一个开的读物框架,它与91976道尔顿的计算分子的重量和6.14的一个等电位的点编码813氨基酸蛋白质。推出的氨基酸顺序高度类似于另外的出版昆虫TPS,它的C终端也有对trehalose磷酸盐phsophatase(TPP)相应的一个区域。半量的分析显示TPS抄本不仅在胖身体,而且在内脏,血淋巴和腿肌肉被表示。这些数据可以在昆虫便于TPS功能的研究并且改进我们trehalose新陈代谢的理解。