简介：摘要重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rb-bFGF）联合羊膜对压疮的修复与再生问题的影响。方法选择选择2011年1月至2013年1月收治的患者46例，男21例，女25例，年龄60～82岁，平均73.5岁。将rb-bFGF负载到羊膜上，用于清创并控制局部感染的压疮皮肤缺损创面。结果Ⅱ期压疮患者中，治疗组5d创面愈合率高于对照组，愈合时间较对照组明显缩短；Ⅲ期压疮患者中，治疗组10d创面愈合率高于对照组，愈合时间较对照组明显缩短；瘢痕指数明显低于对照组。两组治疗过程未见明显不良反应。结论重组牛碱性成纤维细胞生长因子联合羊膜用于压疮创面，能显著加快压疮的愈合速度，愈合时间缩短，提高愈合质量，减少瘢痕的形成，现报道如下。

简介：目的：观察猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用，为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法：体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞，加入不同浓度的猫眼草提取物，24h后观察细胞形态学，以LDH为指标，观察细胞毒性。用MTT法检测其增殖活性。结果：不同浓度的猫眼草提取物均能改变成纤维细胞形态，抑制细胞增殖，浓度在500μg/mL以下无明显的细胞毒作用。结论：猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，具有防治增生性瘢痕的应用前景。

简介：摘要目的探讨刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞（Fb）生长的影响及作用机制。方法采用实验研究方法。收集北部战区总医院2018年10月—2019年3月收治的6例增生性瘢痕患者［男1例、女5例，年龄20~51（37±8）岁］的增生性瘢痕组织，培养第3~7代人增生性瘢痕Fb用于后续实验。取细胞，分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组，分别加入生理盐水，终物质的量浓度为100、200、400 μmol/L的刺五加皂苷E。取细胞，分为单纯小干扰RNA（siRNA）-阴性对照组、单纯siRNA-血小板反应蛋白1（THBS1）组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，单纯siRNA-阴性对照组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-阴性对照，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-THBS1，转染24 h后单纯siRNA-阴性对照组和单纯siRNA-THBS1组细胞加入生理盐水，siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞加入终物质的量浓度为400 μmol/L的刺五加皂苷E。于处理后0（即刻）、12、24、36、48 h，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。取细胞分为生理盐水组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组，另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，相应处理同前，于处理后24 h，行Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况。取细胞分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组，另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，相应处理同前，于处理后24 h，采用蛋白质印迹法检测细胞THBS1蛋白水平。以上实验每组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验、Bonferroni校正。结果处理后0 h，生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（P>0.05）。处理后12、24、36、48 h，100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值均明显低于生理盐水组（t=7.64、28.94、13.69、5.87，6.96、22.83、14.75、11.52，21.09、20.15、29.52、23.12，P<0.05或P<0.01）。处理后0 h，单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（P>0.05）；处理后12、24、36、48 h，单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值明显低于单纯siRNA-阴性对照组（t=7.14、44.87、20.67、40.98，9.26、11.08、15.33、20.56，P<0.05或P<0.01），单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组相近（P>0.05）。处理后24 h，与生理盐水组比较，200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加。处理后24 h，与单纯siRNA-阴性对照组比较，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加；单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量相近。处理后24 h，100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平（0.87±0.12、0.38±0.07、0.20±0.09）均明显低于生理盐水组（1.83±0.17，t＝16.61、16.17、17.29，P<0.01）。处理后24 h，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平（0.61±0.07、0.58±0.07）均明显低于单纯siRNA-阴性对照组（1.86±0.07，t＝71.06、83.80，P<0.01），单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组（0.63±0.11）相近（P>0.05）。结论刺五加皂苷E能够通过下调人增生性瘢痕Fb中THBS1蛋白表达，发挥抑制人增生性瘢痕Fb生长的作用。

简介：目的观察淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5)衰老的干预作用与机制,为明确淫羊藿苷作为有效干预衰老的候选中药单体提供实验依据。方法MRC-5进行体外培养,利用淫羊藿苷进行干预,观察细胞的传代次数;利用β-半乳糖苷酶染色观察衰老细胞阳性率;MTT法检测细胞活力;分别使用单细胞凝胶电泳和流式细胞仪检测H2O2诱导细胞DNA损伤和凋亡变化。结果淫羊藿苷能够延缓MRC-5细胞的复制性衰老,促进细胞增殖,减轻H2O2诱导的细胞DNA损伤,促进受损细胞的凋亡。结论淫羊藿苷能够延缓二倍体细胞的复制性衰老,这可能与其能够减轻细胞DNA损伤有关。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞源外泌体(hucMSC-exo)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)生物学行为和纤维化的作用。方法培养人脐带间充质干细胞(hucMSC)，收集培养上清提取外泌体。将HKF分为对照组(NC)和实验组(Exo)，对照组在培养到70%~80%融合后，用基础培养基处理；实验组用含hucMSC-exo的基础培养基处理，外泌体终质量浓度为2 μg/ml，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验检测细胞增殖与迁移，检测羟脯氨酸(HYP)含量，并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)对各组转化生长因子β1(TGF-β1)、转化生长因子β2(TGF-β2)、SMAD家族蛋白2(Smad2)、SMAD家族蛋白3(Smad3)信使RNA(mRNA)水平进行分析。应用图像处理软件Image J和统计软件分析，两组间比较采用Student-t检验。结果实验组吸光度值在处理后的每个时间点都低于对照组，0 h(Exo＝1.421±0.114比NC＝1.403±0.104，t＝0.267，P>0.05)，12 h(Exo＝1.688±0.102比NC＝1.730±0.073，t＝0.745，P>0.05)，24 h(Exo＝1.755±0.089比NC＝1.829±0.036，t＝1.711，P>0.05)，36 h(Exo＝1.875±0.154比NC＝1.955±0.183，t＝0.747，P>0.05)，48 h(Exo＝2.054±0.035比NC＝2.110±0.067，t＝1.621，P>0.05)，60 h(Exo＝2.086±0.034比NC＝2.126±0.042，t＝1.656，P>0.05)和72 h(Exo＝2.063±0.175NC＝2.094±0.065，t＝0.378，P>0.05)。对培养了48 h的细胞划痕区域面积进行统计分析，实验组划痕面积为对照组0.997±0.020倍，t＝0.087，P>0.05，差异无统计学意义。实验组培养上清中HYP含量低于对照组[(15.310±1.083) μg/ml比(19.560±0.737) μg/ml，t＝3.243，P<0.05)，结果差异有统计学意义。实验组TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3的表达量均低于对照组(TGF-β1＝0.814±0.048比1.076±0.066，t＝3.210，P<0.05；TGF-β2＝0.925±0.037比1.135±0.075，t＝2.657，P<0.05；Smad2＝0.911±0.061比1.139±0.075，t＝2.394，P<0.05；Smad3＝0.913±0.038比1.043±0.025，t＝2.850，P<0.05)，结果差异有统计学意义。结论hucMSC-exo有抑制HKF增殖迁移的趋势，并能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的纤维化。

简介：摘要目的探究低剂量紫杉醇(PTX)对转化生长因子-β1(TGF-β1)激活的人成纤维细胞(HFs)增殖、迁移能力和硬膜外纤维化的影响及机制。方法HFs(购自中国科学院上海细胞库)分为对照组、TGF-β1(5 μg/L)、TGF-β1(5 μg/L)+PTX(10 nmol/L)和PTX(10 nmol/L)组。使用倒置显微镜观察细胞形态，划痕和Transwell实验检测细胞迁移，流式细胞仪分析细胞周期百分比及凋亡率；蛋白印迹法(Western blot)检测各组Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平；使用随机数字法将36只成年雄性SD大鼠分为假手术组、对照组和PTX组，每组12只。术后4周使用苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察各组硬膜外纤维性情况，多组间采用单因素方差分析。结果(1)划痕实验结果显示，TGF-β1组HFs 12 h和24 h迁移率为[(31.50±3.98)%、(77.73±3.03)%，F＝60.312，P<0.05]显著高于对照组[(23.47±3.19)%、(50.31±5.31)%]，而PTX组[(14.59±0.58)%、(20.93±0.72)%，F＝52.385，P<0.05]则显著低于对照组。(2)流式细胞学结果显示，TGF-β1组S期细胞百分比显著高于对照组[(30.07±0.39)%比(25.62±1.06)%，F＝27.335，P<0.05]，PTX组G2期细胞百分比显著高于对照组[(37.55±1.71)%比(24.94±0.51)%，F＝149.725，P<0.05]，而PTX组与对照组之间的细胞凋亡率差异无统计学意义(F＝1.263，P>0.05)。(3)Western blot实验结果显示，TGF-β1组p-Smad3/Smad3显著高于对照组[(129.05±7.66)%，F＝39.615，P<0.05]，而PTX组则显著低于对照组[(42.30±1.73)%，F＝1 215.471，P<0.05]，各组α-SMA和COL1A1的蛋白表达水平与p-Smad3/Smad3趋势一致。(4)动物实验结果表明，对照组观察到更显著的硬膜外纤维化，PTX组成纤维细胞数目和胶原密度[78.00±13.00)、(456.94±112.69) μm2]显著低于对照组[(194.67±7.09)、(1 456.00±71.84) μm2，F＝186.170、168.671，P<0.05]。结论低剂量PTX抑制HFs增殖、迁移能力及TGF-β1/Smad3信号途径的激活，改善椎板切除术后硬膜外纤维化。

简介：

简介：摘要目的探讨成纤维细胞焦亡在创面愈合中的作用及虎杖苷对其的影响。方法以5 μg/ml脂多糖（LPS）刺激成纤维细胞建立实验模型，并随机分为4组：对照组细胞不接受任何处理；实验组细胞接受5 μg/ml LPS处理；治疗组细胞接受5 μg/ml LPS及50 μmol/L虎杖苷处理；抑制剂组细胞接受5 μg/ml LPS及100 nmol/L VX-765处理。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；试剂盒检测caspase-1活性；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养基白细胞介素（IL）-1β、IL-18及Ⅲ型胶原蛋白含量。结果与对照组比较，实验组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著增加为（475.4±39.9）%、（254.9±19.4）pg/ml及（212.6±22.4）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著下降为（72.5±3.4）%及（0.06±0.01）μg/L（均P＜0.05）；与实验组比较，治疗组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著下降为（292.1±28.5）%、（167.5±11.8）pg/ml及（165.5±19.9）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著增加为（86.8±5.5）%及（0.10±0.02）μg/L（均P＜0.05）；与实验组比较，抑制剂组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著下降为（185.5±16.1）%、（127.4±16.5）pg/ml及（129.5±17.2）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著增加为（83.1±7.7）%及（0.09±0.01）μg/L（均P＜0.05）。结论抑制LPS诱导的成纤维细胞焦亡可以促进其增殖并分泌胶原蛋白，虎杖苷可能通过抑制成纤维细胞焦亡促进创面愈合。

简介：摘要肺癌是世界范围内首位恶性肿瘤死亡原因，也是目前肿瘤防治中面临最严重的挑战。肺癌肿瘤微环境(TME)中完全的免疫抑制状态是肺癌发生和快速发展的重要原因。肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是一种在肿瘤发生发展初期被异常激活的胞外基质细胞。TME中免疫相关炎症因子是介导CAFs激活的重要因素，激活后的CAFs可以通过减弱抑肿瘤反应、促进免疫抑制细胞募集活化、重塑TME的胞外基质等来加快TME中完全免疫抑制状态的形成。临床上多种耗竭成纤维细胞的新型制剂在肺癌患者的治疗中收效甚微，主要是因为TME功能的可塑性决定了调整CAFs的功能状态比单纯消除更有效。

简介：摘要目的探讨虎杖苷对脂多糖（LPS）诱导的皮肤成纤维细胞凋亡、氧化应激及炎性反应的保护作用。方法2021年1月至4月，以5 mg/L LPS刺激成纤维细胞建立实验模型，并随机分为4组：正常对照组细胞不接受任何处理；药物对照组细胞接受50 μmol/L虎杖苷处理；实验组细胞接受5 mg/L LPS处理；治疗组细胞接受5 mg/L LPS及50 μmol/L虎杖苷处理。细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活力；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法［terminal dexynucleotidyl transferase（TdT）-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL］检测细胞凋亡；试剂盒检测细胞丙二醛（malonaldehyde，MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量；酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测培养基肿瘤坏死因子（TNF）-α及白介素（IL）-6含量。结果与正常对照组比较，实验组细胞凋亡率、MDA含量、培养基TNF-α及IL-6含量分别显著增加为（12.70±0.11）%、（3.38±0.29）nmol/（mg·pr）、（483.5±38.4）ng/L及（784.4±49.6）ng/L，细胞活力及SOD含量分别显著下降为（78.00±5.90）%及（11.5±1.3）U/（mg·pr）。与实验组比较，治疗组细胞凋亡率、MDA含量、培养基TNF-α及IL-6含量分别显著下降为（7.50±0.08）%、（2.18±0.19）nmol/（mg·pr）、（283.6±25.3）ng/L及（518.5±42.2）ng/L，细胞活力及SOD含量分别显著增加为（89.00±7.50）%及（19.1±2.2）U/（mg·pr）。结论虎杖苷显著抑制LPS诱导的成纤维细胞凋亡、氧化应激及炎性反应，并促进细胞增殖。

简介：Grothe〔1〕和Meisinger〔2〕1997年报道了bFGF及其受体在周围神经的表达和损伤后变化的研究结果,观察发现bFGF在损伤后2小时开始表达,而bFGF及其受体在周围神经的表达及损伤后变化的研究正在开展

简介：目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)治疗脑梗塞的疗效。方法：对照组40例（常规治疗），治疗组50例（常规治疗基础上加bFGF)，以治疗前，治疗后做神经功能缺损评分判定疗效。结果：治疗组总有效率较对照组效果好，两组总有效率相比有显著性差异（P＜0．05），治疗后两组神经功能缺损积分比较，治疗组积分减少明显，两组比较差异显著（P＜0．05），结论：FGF是治疗脑梗塞有效药物，在常规治疗基础上加用bFGF治疗，能取得更好的疗效。

简介：

简介：摘要癌相关成纤维细胞（cancer associated fibroblasts，CAF）是肿瘤间质的主要成分，既可促进肿瘤增殖、转移和耐药，又可抑制肿瘤演进，具有功能异质性。CAF可起源于不同细胞，具有来源多样性，其来源多样性导致其功能异质性。不同来源的CAF具有不同的分子标志物，这将有助于对CAF进行分子分型。CAF的分子分型将为肿瘤精准治疗提供新思路和新靶标。

简介：摘要目的观察钛合金片（简称钛片）表面沟槽化修饰对成纤维细胞黏附、增殖及分化的影响，研究成纤维细胞在不同沟脊宽度（简称脊宽）钛片表面的生物学特点。方法制备脊宽分别为50、80、100、150和200 μm的沟槽化修饰钛片，5个实验组沟宽均为50 μm，沟深均为10 μm；无沟槽的钛片作为对照组。将成纤维细胞接种各组钛片后，于不同时间通过扫描电镜（SEM）观察细胞的黏附状态，采用细胞增殖活性检测（CCK-8）和细胞免疫荧光染色检测细胞的增殖情况，通过黏着斑蛋白染色观察沟脊宽度对细胞黏附部位的影响，通过免疫荧光观察沟脊宽度对α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的作用。结果SEM显示接种48 h后，细胞黏附于钛片的沟脊部位；脊宽较小组（50~150 μm），细胞形态细长，并沿沟脊方向延伸生长。CCK-8提示不同脊宽对细胞增殖无显著影响，6组间差异无统计学意义（P>0.05）。细胞荧光染色显示细胞可顺沟脊方向有序排列，其中50 μm组细胞长轴与沟脊的延伸方向一致性最好，6组间差异有统计学意义（P<0.05）。黏着斑蛋白荧光染色检测发现细胞黏着斑蛋白分泌集中于沟脊部位，半定量分析显示50 μm组黏着斑蛋白分泌最多，6组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。α-SMA检测结果显示脊宽对成纤维细胞的成肌分化有调节作用，其中50 μm组α-SMA表达最强，6组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论钛片表面沟脊修饰可对成纤维细胞的排列、黏附和成肌分化产生影响。当脊宽50 μm时，细胞排列极性更强、黏附相关蛋白分泌更多、成肌分化趋势更显著。

简介：2.2PC对iNOS蛋白表达、活性及NO含量的影响对照组CFb具有iNOS蛋白表达及活性,1.2.5NO含量、iNOS活性测定各处理因素与CFb共孵育6h.检测细胞上清夜中NO含量及iNOS活性的变化.实验操作按NO,表明PC对CFb的iNOSNO系统的活性具有促进作用.此作用可表现在iNOS蛋白表达、iNOS活性、NO含量多个层次

简介：摘要目的探讨组蛋白甲基转移酶SMYD2对心脏成纤维细胞(CFs)的增殖和胶原合成的影响。方法体外分离培养CFs，通过转染SMYD2干扰RNA(siRNA)，在CFs中降低SMYD2的表达，利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理各组细胞，检测以下指标：(1)噻唑蓝(MTT)法检测CFs增殖；(2)Western Blot和qPCR检测SMYD2、促进转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原等指标的表达。结果AngⅡ诱导CFs中SMYD2的表达增加(P<0.01)。AngⅡ刺激CFs增殖和胶原合成(P<0.01)，SMYD2-siRNA和对照组相比，CFs增殖下降(P<0.05)，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1表达降低(P<0.05)。结论降低CFs中SMYD2表达可抑制AngⅡ引起的CFs增殖和胶原合成，提示SMYD2参与心肌纤维化的发生过程。

简介：目的探讨重组ANGPTL-1基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性，以及转染转染后对细胞增殖速率和I、Ⅲ型胶原合成的影响。方法体外重组ANGFPTL-1基因．借助真核表达载体系统．转入体外培养的人皮肤成纤维细胞．流式细胞仪检测基因表达及细胞转染效率；RT—PCR比较转染前后ANGPTL-1mRNA及I、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果基因转染后，（63±7．1）％的被转染细胞表达目的基因：转染组ANGPTL-1mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高（P〈0．01，n=5）：转染组I、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高（P〈0．01．n=5）。结论人皮肤成纤维细胞可作为ANGPTL-1转染的靶细胞，ANGPTL-1基因可能是促进I、Ⅲ型胶原合成的重要基因之一．

简介：摘要目的建立人真皮成纤维细胞（HDF）高糖老化模型，探讨人蜕膜间充质干细胞（dMSC）来源外泌体对高糖老化HDF增殖、迁移、凋亡的影响及其可能机制。方法采用实验研究方法。收集2021年1—3月解放军总医院第四医学中心收治的4例男性包茎患者（18~22岁）环切术后废弃包皮组织，分离培养获取原代HDF。取第6代HDF，按照随机数字表法分为低糖组和高糖组，分别采用低糖完全培养基和高糖完全培养基进行每72小时换液、不传代培养，10 d后取细胞，于接种后24 h，采用β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老情况；于接种后48 h，采用蛋白质印迹法检测细胞衰老相关蛋白p16、p53表达情况；于接种后24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞增殖情况；于接种后48 h，采用脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况；于接种后24 h，采用Transwell实验测定细胞迁移能力。取人dMSC培养48~72 h，采用差速高速离心法获取其外泌体，采用透射电子显微镜观察dMSC外泌体形态，采用纳米颗粒追踪分析法检测dMSC外泌体的粒径分布，采用蛋白质印迹法检测dMSC外泌体标志蛋白CD9、肿瘤易感基因101（TSG101）的表达。取dMSC外泌体及前述高糖完全培养基诱导老化的HDF共孵育24 h，采用PKH67试剂盒检测细胞摄取外泌体的情况。取前述高糖完全培养基诱导老化的HDF，同前分为单纯高糖组、高糖+低浓度外泌体组、高糖+高浓度外泌体组，分别于高糖完全培养基中加入等体积的磷酸盐缓冲液、终质量浓度为50 μg/mL dMSC外泌体、终质量浓度为100 μg/mL dMSC外泌体进行常规细胞培养。分组后同前于对应时间点采用CCK-8法和EdU染色法、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期和凋亡及细胞迁移情况。根据前述结果，另取经高糖完全培养基诱导老化的HDF，分为单纯高糖组、高糖+高浓度外泌体组并同前处理。分组培养48 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测单纯高糖组和高糖+高浓度外泌体组细胞衰老相关的微小RNA-145-5p（miR-145-5p）、miR-498、miR-503-5p及其靶基因钙/钙调素依赖性蛋白激酶1D（CAMK1D）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN基因）和细胞周期蛋白D1的mRNA表达情况。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验和独立样本t检验。结果接种后24 h，高糖组HDF β-半乳糖苷酶阳性染色率为（38.4±4.2）%，明显高于低糖组的（16.5±2.2）%（t=4.65，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的衰老相关蛋白p16和p53的表达量均明显高于低糖组（t值分别为11.85、3.02，P<0.05或P<0.01）。接种后24、48、72 h，高糖组HDF的增殖活性均明显低于低糖组（t值分别为4.13、9.90、15.12，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的EdU阳性染色率明显低于低糖组（t=3.83， P<0.05）。接种后48 h，高糖组HDF周期的G2/M+S亚群在3个亚群（G0/G1、S和G2/M）的占比明显低于低糖组（t=8.74，P<0.01）。接种后24 h，高糖组HDF穿过Transwell滤膜到达下室的细胞数量为（37±6）个，明显少于低糖组的（74±7）个（t=8.42，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF凋亡率明显高于低糖组（t=8.48，P<0.01）。dMSC外泌体为边缘清晰、大小分布均匀的杯状或者圆形囊泡，粒径基本处于80~200 nm。dMSC外泌体标志性蛋白CD9、TSG101表达均呈阳性。共孵育24 h，外泌体被HDF摄入胞内，主要分布于细胞核周围。分组培养24、48、72 h，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于单纯高糖组（t值分别为6.36、6.10、7.76，8.92、12.17、10.74，P<0.01），高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于高糖+低浓度外泌体组（t值分别为7.92、4.82、4.72，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率均明显升高（t值分别为5.32、9.88，P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组比较，高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率显著升高（t=5.27，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF中的G0/G1期亚群占比均显著降低（t值分别为3.81、4.31，P<0.05），G2/M+S亚群占比均明显升高（t值分别为3.81、4.31，P<0.05）。分组培养24 h，与单纯高糖组相比，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量均明显增多（t值分别为10.14、13.39，P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量明显增多（t=6.27，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF凋亡率均明显降低（t值分别为3.72、5.53，P<0.05或P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF的miR-145-5p、miR-498 mRNA表达量均明显上升（t值分别为13.03、8.90，P<0.01），miR-503-5p mRNA表达量明显下降（t=3.85，P<0.05）；高糖+高浓度外泌体组中HDF的CAMK1D、PTEN基因mRNA表达量均明显低于单纯高糖组（t值分别为8.83、5.97，P<0.01），细胞周期蛋白D1 mRNA表达量明显高于单纯高糖组（t=4.03，P<0.05）。结论人dMSC来源外泌体可显著提高高糖老化HDF的增殖和迁移能力，抑制其凋亡。这可能与HDF内miR-145-5p和miR-498表达增高抑制了CAMK1D和PTEN基因的表达及miR-503-5p表达下降促进了细胞周期蛋白D1的表达有关。

简介：摘要增生性瘢痕是创面愈合后成纤维细胞异常增殖和胶原过度沉积的结果。但并非所有的皮肤成纤维细胞都参与介导了增生性瘢痕的形成，不同亚群或位于真皮不同层次的成纤维细胞发挥着不同的功能。此外，细胞外基质亦对皮肤纤维化产生了重要影响。因此，阐明上述因素与增生性瘢痕形成的关系可能有助于增生性瘢痕的防治。