简介：目的建立利用ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系统对小鼠ＭＡＤ２Ｌ１基因第二外显子基因编辑的方法体系，并分析ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９对ＭＡＤ２Ｌ１基因编辑的脱靶效应。方法通过ＣＨＯＰＣＨＯＰ网站设计位于小鼠ＭＡＤ２Ｌ１基因第二外显子的靶点序列，并构建Ｃａｓ９?ＭＡＤ２Ｌ１载体，将该载体转染到ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中，通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察ＧＦＰ后，提取细胞转染后的基因组ＤＮＡ，利用ＰＣＲ方法，结合Ｔ７Ｅ１分析和桑格尔测序，鉴定对小鼠ＭＡＤ２Ｌ１基因编辑情况，并对转染后的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞进行ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９脱靶效应分析。结果将Ｃａｓ９?ＭＡＤ２Ｌ１载体转染到ＮＩＨ／３Ｔ３细胞并进行嘌呤霉素筛选后，荧光显微镜下观察到大量表达ＧＦＰ的细胞，ＰＣＲ结合Ｔ７Ｅ１结果显示，以转染后的细胞ＤＮＡ为模板扩增出的２２８ｂｐＭＡＤ２Ｌ１ＰＣＲ产物，可被酶切成１６６ｂｐ和６２ｂｐ片段，测序结果显示，成功对ＭＡＤ２Ｌ１基因第二外显子靶点处进行基因编辑，脱靶效应分析未检测到ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠ＭＡＤ２Ｌ１基因第二外显子进行基因编辑的方法体系，设计的对ＭＡＤ２Ｌ１基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。

简介：目的利用护骨素核因子κB受体活化子核因子κB受体活化子配体(OPGRANKRANKL)系统,探讨饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢影响。方法选择21只雄性断奶WHBE兔,随机分为3组(I、II、III组),分别饲以钙水平为095%,110%和130%,其他营养水平基本一致的饲粮。实验期42d。实验结束,测定兔血清钙(Ca)、甲状旁腺素(PTH)和骨源性碱性酶(BALP)含量;分别运用荧光定量PCR法和免疫组织化学法对WHBE兔骨组织进行OPGRANKRANKL的基因转录和蛋白表达分析。最后以RANKL/OPG比值为指标,评估WHBE兔骨代谢与饲粮钙水平间的相关性。结果实验结果表明,I、II、III组在血清Ca、PTH含量和BALP活力上差异无显著性(P>0.05)。WHBE兔骨组织RANKLmRNA表达水平和RANKL/OPGmRNA比值均以II组最低,与I、III组差异有显著性(P<0.05)。钙水平对WHBE兔骨组织OPGRANKRANKL蛋白表达影响显著(P<0.01),II组和III组OPG蛋白表达阳性指数均极显著高于I组(P<0.01);而II组兔骨组织RANK蛋白表达阳性指数则极显著低于I组和III组(P<0.01),RANKL/OPG的蛋白表达阳性指数比值以II组最低,与I组差异有显著性(P<0.01)。此外,WHBE兔骨组织RANKL/OPGmRNA比值和的蛋白表达阳性指数比值均与饲粮钙水平间存在显著的二次曲线相关(R2=04068,08433,P<0.05,P<0.001)。结论生长期WHBE兔的骨代谢与饲粮钙水平间呈显著相关性,当饲粮钙含量为110%时,生长期WHBE兔可获得较理想的骨代谢水平。

简介：目的观察猴免疫缺陷病毒（SIV）感染后,病毒特异性免疫复合物（IC）在不同时间、不同组织的沉着情况,初步研究其与AIDS多系统病变的联系.方法对8只不同时间感染SIV的恒河猴及1只未感染SIV的猴进行尸检以获取多系统组织标本,进行连续切片和IgG、C3、SIVp27免疫荧光染色,并对结果进行比较分析.结果IgG、C3、p27在多个猴、多种组织的相同位置出现相同模式的荧光表达,证明存在IC的沉着;其中脑血管周（8/8）,心肌间微血管（6/8）、和淋巴结副皮质（6/8）及生发中心（5/8）是阳性率最高的部位,肾小球及肾间质、肠黏膜固有层也有较多IC的沉着,且在感染中、晚期IC出现的比例更高.结论SIV感染后出现广泛的SIV-IC沉积,且随病情的进展而加重;IC可能是SIV导致AIDS多系统病变的主要形式.针对此过程进行研究,可帮助了解AIDS并发多系统器官病变的机制及研究新的治疗方法.

简介：目的探讨系统性红斑狼疮(简称狼疮)TC小鼠肠道微生物菌群结构与抗dsDNA抗体之间的关系。方法ELISA法检测狼疮TC小鼠血清抗dsDNA抗体,然后分别收集dsDNA阳性组和阴性组的小鼠粪便,利用IlluminaHiSeq2500高通量测序,进行粪便样本16S测序,比较两组之间的肠道微生物菌群结构与抗dsDNA抗体水平之间的关系。结果通过ELISA检测抗体结果和小鼠粪便高通量测序结果显示,dsDNA阳性组TC小鼠的物种群落多样性显著低于dsDNA阴性组;同时,两组TC小鼠肠道微生物分别在门水平Chloroflexi(绿弯菌门);纲水平Betaproteobacteria(β变形菌纲)、Deltaproteobacteria(δ变形菌纲)和Ktedonobacteria(纤线杆菌纲);目水平Burkholderiales(伯克氏菌目)、Desulfovibrionales(脱硫弧菌目)和Ktedonobacterales(纤线杆菌目);科水平Alcaligenaceae(产碱菌科)和Desulfovibrionaceae(脱硫弧菌科);属水平Parasutterella(副萨特氏菌属)和Desulfovibrio(脱硫弧菌属)上差异有显著性(P<0.05)。结论狼疮TC小鼠肠道微生物菌群结构与抗dsDNA抗体高度相关,本研究为进一步阐明肠道微生物菌群与系统性红斑狼疮发病机制的关系提供依据。【关键词】┣┣(中)关键词┫┫

简介：代谢工程分为推理性代谢工程和逆代谢工程,逆代谢工程是避开对代谢网络充分认识的一种全新的遗传工程.本文简要介绍了逆代谢工程的策略,并以实例详细分析了逆代谢工程的具体应用.最后,分析了逆代谢工程的问题和发展前景.

简介：目的：观察外源给予H2O2对C2C12细胞中UII/UT系统表达的影响。方法：培养小鼠肌原细胞系C2C12细胞株,应用胎盘蓝染色和测定细胞培养液中LDH的含量检测H2O2对细胞损伤的影响,应用放射免疫的方法检测细胞培养液和裂解液中UII的含量,应用RT-PCR法测定C2C12中UTmRNA的表达,应用WesternBlot检测不同浓度H2O2对肌原细胞系C2C12中UT蛋白表达的影响。结果：外源给予不同浓度的H2O2,C2C12细胞裂解液中UII的含量各组间无明显差异,但增加了细胞孵育液中UII的含量,10-4M和10-3M时分别增加了83.1%（p〈0.01）和94.5%（P〈0.01）。低浓度H2O2（0.5×10-6M,10-6M,10-5M,10-4M）刺激明显增加了UTmRNA的表达,而高浓度的H2O2（10-3M）刺激反而使UTmRNA的表达降低。高浓度的H2O2（10-6M,10-5M,10-4M,10-3M）刺激使UT蛋白表达分别增加了200.1%、255.6%、111.1%和100.1%（均p〈0.05）。结论：H2O2作为T2DM发病因素之一的活性氧族,可能是T2DM时骨骼肌组织中UII/UT系统表达增加的一个因素。

简介：目的研究携载两性霉素B的聚乳酸纳米粒（AmB-PLA-NP）对大鼠肝、肾及血液系统的影响。方法将大鼠随机分4组,分别经尾静脉注射AmB、AmB-PLA-NP、PLA-NP（聚乳酸纳米粒）及表面活性剂聚山梨酯-80,定时取血检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）等指标。结果AmB组大鼠给药前及给药后1d、1周的RBC分别为（5.84±0.37）×10^12/L、（4.302±0.3）×10^12/L和（3.3±0.37）×10^12/L,AmB-PLA-NP组分别为（6.142±0.55）×10^12/L、（6.38±0.35）×10^12/L和（6.14±0.18）×10^12/L,溶血反应明显降低;AmB组给药后ALT及AST水平显著升高,分别为（1059.2±119.22）μmol/L、（466.6±357.30）μmol/L（给药1d后）和（1755±175.39）μmol/L、（2684.2±494.74）μmol/L（给药1周后）,而AmB-PLA-NP组、PLA组及聚山梨酯-80组的大鼠肝、肾功能未发生明显变化。结论AmB-PLA-NP能够显著降低AmB对肝、肾及血液系统的毒副作用。

简介：通过形态观察和分子生物学技术,对采集自丽江古城的建筑物梁柱上的木腐菌进行鉴定。结果显示,引起丽江建筑物梁柱褐色腐朽的真菌为绵腐卧孔菌（Postiaplacenta）。同时提出相应的防治建议,以期尽可能地降低丽江古城建筑物的安全隐患。

简介：报道了中国垂幕菇属新记录种——瘤核垂幕菇(Hypholomatuberosum)。对SWUST2007101001号标本的分离菌株Ht.1的形态特征进行了观察,对其ITS区序列进行了测定和系统发育分析,同时对相关类群的形态和分子分类进行了讨论。将该菌株鉴定为瘤核垂幕菇,与其亲缘关系较近的是Strophariaambigua(AY818350)、Strophariainuncta(EU784417)和Weraroavirescens(EU784438)。由系统进化树推断瘤核垂幕菇是多元进化。

简介：目的：研究严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白对甘油三酯和总胆固醇含量的影响。方法：检测分析144例SARS患者甘油三脂和总胆固醇含量在发病后的变化;将小鼠随机分组,分别注射生理盐水和SARS-CoVN蛋白,连续给药9d后检测小鼠血清中甘油三酯和总胆固醇含量的变化。结果：SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量随发病时间有升高变化（P〈0.05）,在发病40d前后甘油三酯和总胆固醇含量超标的病例数占本时间段内的病例数的比例显著高于其他时间段,而且超标的含量也明显升高。SARS-CoVN蛋白使小鼠体重明显高于对照组（P〈0.05）,甘油三酯含量在39和51d明显高于对照组（P〈0.05）,总胆固醇含量在21和39d也明显高于对照组（P〈0.05）。结论：SARS-CoVN蛋白可以升高小鼠的甘油三酯和总胆固醇的含量,其升高最为明显的时间段与SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量升高的时间段基本一致。由此推测,SARS-CoVN蛋白可能是促使SARS患者发病后甘油三酯和总胆固醇含量升高的重要原因。

简介：关于“供热工程”的教学改革,包括理论课部分、实习部分、成绩给定方面和课程设计方面.从这四个方面入手使学生能够更好的学习这门课.

简介：阐述了酵母表达系统在表达外源基因特别是大分子真核生物基因方面的优越性,分析了由于酵母表达系统的局限性如聚合体的存在、信号肽加工不完全、内部降解等而造成的产物不均一现象,提出了相应的解决方法。

简介：本文评述了工程抗体酶的研究现状和抗体酶在防化医学研究中的应用。抗体库技术的出现使抗体酶的研究呈现了新的生机。不仅使不具备细胞工程实验条件的实验室能够制备抗体酶,而且实验周期大大缩短,比杂交瘤技术提供多20倍的结合性抗体作为潜在的抗体酶,使抗体酶更易获得。抗体库技术能够容易地评价编码抗体酶的基因,因而可以在分子水平上认识和改造抗体酶。噬菌体抗体库可以不经免疫即可制备抗体的特点,使通过人源性噬菌体抗体库生产的抗体酶能够直接用于临床治疗。随着工程抗体酶研究的不断深入,新颖实用的抗体酶将会被应用于包括军事医学在内的多种领域中。

简介：哈尔滨工业大学生物工程中心主要从事微生物基因工程、微生物发酵工程、微生物基因组学、微生物转录组学、微生物代谢组学等方面的研究工作。该中心的研究对象主要集中在对植物病原菌进行生物防治的真菌和与生物质资源化相关的真菌和细菌。

简介：生物工程是一门实践性很强的应用型专业.近几年,随着生物技术的飞速发展,对生物工程专业人才的需求越来越迫切,为了提高学生操作技能和解决实际问题的能力,更好地满足生物制药企业的用人需求,必须对地方高校生物工程专业的教学体系和方法进行改革,本文重点探讨了改革的重要性和措施.

简介：阿维菌素（avermectin）是由除虫链霉菌（Streptomycesavermitilis）产生的一种具有杀虫活性的大环内酯类抗生素,在农业和畜牧业中应用广泛.本文综述了有关除虫链霉菌基因组序列分析、阿维菌素的生物合成以及阿维菌素育种和代谢工程的研究进展.

简介：园林绿化工程预算对于工程头招标具有很重要的影响,园林工程的预算也决定着招投标过程中的最关键的一部分,这个最关键的部分就是招投标中的那部分价格,所以说,园林工程的预算对于招投标活动有很重要的影响,因此,要重视预算工作的顺利开展.本文主要从以下几点进行了有效的分析和探讨,供广大同仁们参考.

简介：

简介：用气相色谱法对发酵液中的乙酸进行了分析。以丙酸为内标，样品用硫酸酸化后再用乙醚提取，在ＨＰ－ＦＦＡＰ毛细管分析柱上进行色谱分析，采用ＦＩＤ检测器检测。该方法样品制备过程简捷精密度和回收率都很高。乙酸的回收率为９９．４４％－１０２．４１％，变异系数１．６９％－６．１１％。方法的建立为工程菌发酵控制和代谢工程研究提供了良好的研究手段。

简介：天津科技大学生物工程学院建于1958年(前身为天津轻工业学院食品工程系)，是天津市“十五”、“十一五”重点建设的学科。学院设有轻工技术与工程一级学科博士后流动站；现有发酵工程学科博士点，发酵工程、生物化工、微生物与生化药学3个硕士学位授权点；轻工技术与工程、制药工程和生物化工专业等3个工程硕士专业学位授予权，并设有发酵工程、