简介：目的：采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统，筛选与甲状旁腺素1型受体（PTH1R）相互作用的蛋白。方法：将全长P册JR基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵，用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTHIR和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中，检测Mell报告基因的表达，并进行相互作用的验证。结果：测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTH1R相互作用；根据对SNAPIN基因的功能分析，其可能与细胞内钙稳态的调控有关。结论：为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的机制提供了一定的线索。

简介：目的：构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶（S6K）的体外活性测定。方法：采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果：酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论：S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。

简介：目的：从真核细胞中获得骨形态发生蛋白2（BMP2）编码基因，构建其真核表达载体并进行鉴定。方法：提取人HeLa细胞总RNA，经反转录后用特异性引物扩增BMP2编码区，连接至pcDNA3．1载体，筛选阳性克隆并进行功能学鉴定。结果：反转录PCR获得1100bp的片段，经分子克隆后鉴定序列与BMP2一致，并且在真核细胞中能够诱导Smad1／5／8的磷酸化。结论：构建了真核表达载体pcDNA3．1-BMP2并验证了其体内功能，为后续探讨BMP2在骨发育中的作用机制打下基础。

简介：目的：对南部战区某部军事飞行员血清尿酸与脂蛋白水平进行检测及相关性分析。方法：比较军事飞行员与地勤人员的血清尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、载脂蛋白Al（ApoAl）、载脂蛋白B（ApoB）水平，用多元线性回归分析UA与TC、TG、HDLC、LDLC、ApoAl、ApoB等的相关性。结果：飞行员组UA与HDLC水平负相关（t=-4．527，P〈0．05），与ApoAl水平正相关（t=4．805，JP〈0．05）；相比地勤人员组，飞行员组LDLC、ApoB显著减低，ApoAl显著增高，差异有统计学意义（P〈0．05）；飞行员组中，高UA组的TC、TG、ApoB比正常UA组显著增高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：军事飞行员尿酸水平与致动脉粥样硬化的危险因子密切相关，各项指标之间趋炎和抗炎的转化待进一步研究。

简介：[目的]随着杀虫剂阿维菌素的广泛应用，靶标生物对其抗性问题日益严重。以往的研究显示，细胞膜转运蛋白P糖蛋白可能与抗药性有关。但在昆虫对阿维菌素的抗性研究中，由于目前市场上缺少专门针对昆虫的商业化抗体，使得这一研究受限。为此，本研究尝试应用其他物种的抗体开展P糖蛋白的检测。[方法]以果蝇为测试昆虫，以阿维菌素作为测试药物，采用免疫印迹方法用鼠抗人P糖蛋白单克隆抗体检测阿维菌素敏感品系与阿维菌素抗性品系果蝇中的P糖蛋白的表达水平。[结果]检测出果蝇体内P糖蛋白的特异性表达，且无明显非特异性条带；与敏感品系果蝇相比，阿维菌素抗性品系果蝇P糖蛋白的表达水平明显升高。[结论]用针对人及其他脊椎动物的P糖蛋白单克隆抗体检测果蝇P糖蛋白的表达可行，且果蝇对阿维菌素的抗性可能与P糖蛋白的表达升高有关。

简介：应用多聚酶链反应(PCR)，直接从SIV感染的猴艾滋病(SAIDS)模型猴的外周血淋巴细胞总DNA中扩增出767bp的SIV核心蛋白P27基因片段。扩增产物经EcoRI及SalI双酶切后，克隆入相同酶切的表达质粒pBV^220中，获得含SIV核心蛋白基因片段的重组质粒pBVSG．并进行DNA序列分析，用该重组质粒转化大肠杆菌DHBa经筛选，增殖及42℃温度诱导，SDS—PAGE表明外源基因表达蛋白含量占菌体总蛋白14．5%，Western-blot证实表达产物能被SIVP27单克隆抗体及SAIDS模型猴血清中特异性抗体识别。

简介：最近的报道称某些肉类蛋白质对你来说并不好，德州农工大学生态农业研究学院的科学家发现，食用充足的优质蛋白质对人类的生长、发育和健康是至关重要的。

简介：继与德国吕贝克大学RolfHilgenfeld教授课题组合作解析出恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶falcipain-2的晶体结构后fJournalofBiologicalChemistry，2006，281：25425-25437），中国科学院上海药物研究所蒋华良课题组与华东理工大学药学院李洪林、李剑和德国吕贝克大学RolfHilgenfeld教授等合作，综合运用计算药物设计、药物化学和分子生物学方法和技术。发现了20余个活性及多样性较好的falcipain-2非肽类小分子抑制剂。

简介：产生免疫原性的残基都是位于蛋白表面的暴露残基,为了消除鼠抗体对人的免疫原性,利用表面再塑方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片断进行了人源化分子设计。首先确定了鼠及人Fv表面残基,在此基础上分析了鼠与人Fv间表面残基的差异,将有差异的鼠表面残基换成人的。提出了残基最高频率人源化及最相似链人源化两种人源化方案。人源化后鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv的结构经Profile-3D验证是合理的,置换的表面残基溶液可及性未变,且未影响CDRs的结构,应不会影响与纤维蛋白的亲和力,为鼠抗体人源化实验研究奠定了基础。

简介：Ca2＋是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白（CBL,calcineurinB-likeproteins）是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆GmCBL1基因,功能鉴定显示GmCBL1增强了转基因拟南芥对非生物胁迫的耐性。为了进一步研究GmCBL1的作用机理,本研究构建诱饵载体pGBKT7：：GmCBL1,利用酵母双杂交技术筛选大豆GmCBL1的互作蛋白。通过对筛选获得的106个蛋白基因测序和Blast比对分析,并根据其可能的生理功能对这些候选蛋白归类,整理得到4类蛋白：能量代谢相关蛋白、修饰蛋白、防御蛋白、钙信号转导相关蛋白。筛选得到候选蛋白的功能预测初步表明,大豆GmCBL1参与多条信号途径,为进一步研究探索大豆CBL介导的抗逆信号转导途径奠定了基础。

简介：目的探讨烟曲霉硫氧还蛋白还原酶（thioredoxinreductase,TR）对侵袭性曲霉病（invasiveaspergillosis,IA）的免疫保护作用。方法C57BL/6小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠用重组TR免疫2次。感染烟曲霉前用环磷酰胺和地塞米松对全部小鼠进行免疫抑制处理,通过气道穿刺法向气管内注入烟曲霉孢子悬液,建立IA疾病模型。观察两组小鼠的存活率、局部器官真菌载量、肺组织病理变化、肺泡灌洗液细胞分类计数,评估TR蛋白的免疫保护作用。结果存活率：免疫组小鼠7d存活率为64.7%,对照组为0。肺组织匀浆烟曲霉CFU中位数：存活小鼠为0,死亡小鼠为44（P25,P75为21,70）（P〈0.01）。组织病理学检观察：死亡小鼠肺肿胀出血、肺泡间隔增宽、大量炎症细胞聚集、组织灶状坏死,并有大量烟曲霉菌丝存在,而存活小鼠肺组织损伤程度轻,且组织间无菌丝。肺泡灌洗液涂片染色细胞计数显示：存活小鼠单个核细胞约占84.2%,中性粒细胞仅占15.8%;死亡小鼠单个核细胞占33.6%,中性粒细胞约占66.4%。结论烟曲霉重组蛋白TR能诱导小鼠产生抵抗IA的免疫保护力,是一个有潜力的保护性抗原。

简介：目的：构建汉滩病毒包膜糖蛋白基因的真核表达载体，并加入可增强免疫应答效应的细胞因子CD40L基因，检测其可否在真核细胞中表达。方法与结果：参照GenBank中汉滩病毒M基因和小鼠CD40L的全基因序列设计引物，通过聚合酶链反应（PCR）获得M和CD40L基因片段，将其与pCI—neo载体相连，测序证实该载体构建成功后，将此真核表达载体以脂质体转染法转染至哺乳动物细胞CHO—K1中，利用间接免疫荧光法（IFA）检测发现M基因和CD40L基因可以同时表达于CHO-K1细胞中。结论：构建了带有CD40L基因的汉滩病毒包膜糖蛋白重组质粒并获得表达，为深入研究汉滩病毒感染后包膜糖蛋白引起的特异性免疫应答规律奠定了实验基础。

简介：美国能源部阿贡国家实验室研究人员表示，通过与中国和新加坡的同行开展合作，他们成功获得了H5N1禽流感病毒中最重要的一种蛋白的晶体和特征结构，并发现如能阻断该蛋白中的两种亚单元的结合，将有望找到对付流感病毒的新药或疫苗。

简介：目的：探讨急性缺血性脑卒中患者血清超敏C-反应蛋白（hs-CRP）的水平对卒中后功能障碍的预测价值。方法：分别在发病后第1和7天,采用颗粒增强免疫透射比浊法对92例急性缺血性脑卒中患者检测血清hs-CRP水平,并选取40例健康受试者作为对照。随访并记录患者1月、3月和6月mRS评分。结果：①急性缺血性脑卒中患者血清hs-CRP水平较对照组显著升高。②急性缺血性卒中患者入院1d和7d血清hs-CRP水平与1月、3月和6月mRS评分,均有明显的相关性。与入院1d血清hs-CRP水平相比,入院7d血清hs-CRP水平与mRS评分相关性更好。③与无颈动脉粥样硬化危险因素的缺血性卒中患者相比,有颈动脉粥样硬化危险因素的缺血性卒中患者入院7d血清hs-CRP水平明显升高。结论：与入院1d血清hs-CRP水平相比,入院7d血清hs-CRP水平对卒中后功能障碍的预测价值更好。

简介：金属硫蛋白（MT）是一类富含半胱氨酸的低分子量非酶蛋白,具有重金属解毒、调节微量元素代谢、清除自由基抗氧化等多种生物学功能。MT可作为高效的内源性细胞保护剂,对多种心血管系统疾病具有重要的保护作用。简要综述了MT的理化性质及生物学特性,MT在心肌缺血再灌损伤、心力衰竭、阿霉素诱发的心脏毒性、高血压及动脉粥样硬化等心血管疾病发病过程中的作用及其可能的机制。

简介：细胞信号转导异常往往与人类疾病的发生、发展密切相关。一些病毒致病和感染机制即为病毒抗原蛋白作用宿主细胞信号转导途径,导致宿主细胞内信号转导发生紊乱。丙型肝炎病毒（HCV）是引发慢性丙型肝炎,导致肝硬化和肝细胞癌发生的主要病原体,但目前HCV的致病机制与宿主内持续感染机制尚不清楚。HCV致病机制可能与HCV表达的蛋白质干扰宿主细胞信号转导途径而导致异常的细胞信号转导有关。研究HCV蛋白对宿主细胞信号转导途径的影响不仅有助于阐明其致病机制,还能为新药设计和寻找新的治疗方法提供新思路和新靶点。本文主要综述了近年来国内外有关HCV蛋白作用细胞信号转导途径的研究进展。

简介：目的探究富含n-3多不饱和脂肪酸（polyunsaturatedfattyacid,PUFA）的苏子油高脂饮食对肥胖大鼠肝脏极低密度脂蛋白（verylowdensitylipoproteins,VLDL）合成关键基因表达的影响.方法造模期：雄性SD大鼠随机分为2组,对照组（normalcontrolgroup,NC）给予普通日粮,高脂组（highfatgroup,HF）给予高脂纯合日粮诱发肥胖大鼠模型;干预期：将肥胖大鼠随机分为4组：持续高脂组（consistenthighfatgroup,CHF）和三个苏子油（perillaoil,PO）替代组,根据PO替代CHF中猪油比例的不同将替代组分为20%PO、50%PO、100%PO,4周后测定大鼠血清甘油三酯（tryglyceride,TG）水平;westernblotting方法检测肝脏VLDL合成关键蛋白微粒体甘油三脂转运蛋白（microsomaltriglyceridetransferprotein,MTP）和载脂蛋白B（apolipoproteinB,APOB）蛋白表达;real-timePCR方法检测肝脏Mtp、ApobmRNA表达.结果肥胖大鼠血清TG水平显著高于NC组,并且有严重的脂肪沉积,肝脏MTP和APOB的mRNA、蛋白表达均有不同程度的降低;干预4周后,与CHF组相比,各PO替代组大鼠血清TG水平明显降低,病理切片结果显示肝脏脂肪沉积有明显改善,并且肝脏MTP和APOB的mRNA、蛋白表达均有不同程度的升高.结论不同比例PO替代均能促进肥胖大鼠肝脏VLDL合成与分泌,改善肝脏脂肪沉积,并且PO促进MtpmRNA、蛋白表达具有剂量依赖性.

简介：应用Pharmacia公司的重组噬菌体抗体系统,从经过人交联纤维蛋白特异抗原D二聚体（DD）免疫过的鼠脾细胞mRNA中构建出组合单链抗体（ScFv）cDNA文库。文库cDNA克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌TG1,得到2.5×105个氨苄抗性菌落。通过噬菌体表面呈现,用DD对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行三轮亲和富集获得一株特异抗DD的噬菌体单链抗体（ScFvA11）。经Phage-ELISA鉴定,呈现在噬菌体表面的ScFvA11与DD结合的ELISA阳性滴度小于107tfu/ml,而与人纤维蛋白原结合的ELISA滴度大于1010tfu/ml,两者相差1000倍以上。表明ScFvA11具有较好的DD结合特异性。经序列分析,ScFvA11cDNA全长729bp,其中Vh基因354bp,编码118个氨基酸;Vl基因327bp,编码108个氨基酸;Vh与Vl之间为（Gly4Ser）315个氨基酸连接肽。

简介：在长期进化中，植物形成了抵御病毒等病原微生物侵染的精细防御系统。在病毒侵染、复制和传播过程中，其编码的一些蛋白，如外壳蛋白、运动蛋白、复制酶类等能够与植物基因编码的蛋白发生相互作用。酵母双杂交系统是体外研究蛋白质间相互作用的有利工具，不但可以用于研究已知蛋白质的互作，还可以发现新蛋白，揭示特定蛋白互作网络与作用机制，在植物蛋白与病毒蛋白互作研究中已得到广泛的利用。本文主要综述利用酵母双杂交系统研究植物与病毒蛋白相互作用的国内外进展。

简介：采用PCR方法，根据文献报道的人成骨蛋白-1（OP-1）成熟肽基因序列，设计并合一对引物，从含人成骨蛋白基因的质粒中扩增获得大小的420bp的DNA片段，连接到pGEM-T载体进行测序，证明获得人成骨蛋白成熟肽基因片段，继之以pPIC3.5k为表达载体构建重组表达质粒，并经PCR及酶切鉴定。