简介：目的构建Wilson病基因ATP7B的重组腺病毒载体.方法分别以BamHⅠ+SalⅠ双酶切pcDNA3.0/ATP7B和pDC315,将ATP7BcDNA目的基因片段和线性化的pDC315连接,定向克隆构建pDC315/ATP7B,以PCR和酶切的方法鉴定.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞构建Ad-ATP7B,PCR进行鉴定.结果经PCR和酶切鉴定证实pDC315/ATP7B构建成功.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad-ATP7B构建已完成.结论本实验成功构建了ATP7B外源目的基因序列完全正确的重组腺病毒载体Ad-ATP7B,为下一步采用ATP7B基因重组腺病毒载体对Wilson病进行基因治疗打下了基础.

简介：目的构建arhgap39基因真核过表达载体并初步研究arhgap39蛋白表达的相关问题。方法提取小鼠海马组织总RNA，逆转录合成cDNA，根据GeneBank中基因信息设计引物，高保真PCR扩增arhgap39基因的编码区，随后将其转移到真核载体上，转染NG-108细胞并观察其在细胞内的表达情况。结果经酶切和测序鉴定表明成功构建arhgap39基因的相关真核过表达载体；将其转染NG-108细胞，免疫印迹试验证实arhgap39成功过表达，arhgap39的分子量约为140kD。结论我们的实验结果确认了arhgap39蛋白的分子量，并对其可能存在的存在形式做了验证性研究，可以为进一步的研究提供理论基础和研究工具。

简介：目的：建立护理硕士专业学位研究生临床带教老师资格考评体系，为该部分带教老师的选拔、培训及考核提供科学依据。方法：在文献查阅、开放式问卷调查及专家访谈的基础上初步确定指标体系，通过德尔菲法对33名护理专家进行两轮咨询论证。结果：两轮问卷的回收率分别为87．9％、89．7％；专家权威系数分别是0．853、0．872；专家意见的肯德尔和谐系数分别是0．231、0．295，经检验，均具有统计学意义（P〈0．01）。最终形成的资格考评体系包括9项准入指标，5项考评内容、19项考评指标和56项评价标准。结论：本研究初步建立的护理硕士专业学位研究生临床带教老师资格考评体系具有较高的科学性，可作为护理硕士专业学位研究生临床带教老师管理的可靠依据。