摘要
摘要目的探索Klotho抑制高糖条件下肾小管上皮细胞（HK-2）微RNA（miR）-21a-5p表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制。方法将体外培养的HK-2分为低糖组、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）和高渗组（30 mmol/L甘露醇）；按照高糖刺激时间分为4组：0、12、24、48 h；按照是否转染pcDNA3.1-Klotho/pcDNA3.1-Vector及转染后低或高糖刺激分为4组：低糖组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组；按照转染si-Klotho/si-Negative后是否加入二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和低或高糖刺激分为6组：低糖+si-Klotho组、低糖+si-Negative组、低糖+si-Klotho+PDTC组、高糖+si-Klotho组、高糖+si-Negative组和高糖+si-Klotho+PDTC组。染色质免疫共沉淀（CHIP）分组：低糖+pcDNA3.1-Vector组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组。采用实时聚合酶链式反应检测各组细胞miR-21a-5p水平；Western blot检测Klotho、纤连蛋白（FN）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、核因子κB（NF-κB）、NF-κB 抑制因子（IκB）表达水平；CHIP检测NF-κB对miR-21a-5p启动子的直接作用。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果与低糖组比较，高糖组Klotho蛋白表达下降至60.8%（P<0.05），miR-21a-5p表达升高至3.203倍（P<0.01），FN和α-SMA表达明显升高。随着高糖刺激时间延长，Klotho蛋白表达水平逐渐降低，而miR-21a-5p表达水平逐渐升高，呈现相反的变化趋势（P<0.05）。高糖组核蛋白NF-κB和miR-21a-5p表达水平是低糖组的2.934倍和3.154倍（均P<0.01），而过表达Klotho后，NF-κB和miR-21a-5p表达水平分别下降至高糖组的50.18%和49.24%（均P<0.05）。CHIP结果显示：高糖+pcDNA3.1-Vector组与低糖+pcDNA3.1-Vector组相比，NF-κB和miR-21a-5p启动子结合显著增加至3.121倍（1.000±0.742比3.121±0.115，P<0.01）；而过表达Klotho能显著减弱高糖引起的NF-κB和miR-21a-5p启动子结合至54.21%（3.121±0.115比1.692±0.073，P<0.01）。结论Klotho可抑制高糖条件下肾小管上皮细胞NF-κB和miR-21a-5p启动子的结合，使miR-21a-5p表达减少，从而减轻肾小管上皮细胞间质转分化。
出版日期
2020年10月30日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
