摘要
摘要目的探索Klotho抑制高糖条件下肾小管上皮细胞(HK-2)微RNA(miR)-21a-5p表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制。方法将体外培养的HK-2分为低糖组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和高渗组(30 mmol/L甘露醇);按照高糖刺激时间分为4组:0、12、24、48 h;按照是否转染pcDNA3.1-Klotho/pcDNA3.1-Vector及转染后低或高糖刺激分为4组:低糖组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组;按照转染si-Klotho/si-Negative后是否加入二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和低或高糖刺激分为6组:低糖+si-Klotho组、低糖+si-Negative组、低糖+si-Klotho+PDTC组、高糖+si-Klotho组、高糖+si-Negative组和高糖+si-Klotho+PDTC组。染色质免疫共沉淀(CHIP)分组:低糖+pcDNA3.1-Vector组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组。采用实时聚合酶链式反应检测各组细胞miR-21a-5p水平;Western blot检测Klotho、纤连蛋白(FN)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、核因子κB(NF-κB)、NF-κB 抑制因子(IκB)表达水平;CHIP检测NF-κB对miR-21a-5p启动子的直接作用。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果与低糖组比较,高糖组Klotho蛋白表达下降至60.8%(P<0.05),miR-21a-5p表达升高至3.203倍(P<0.01),FN和α-SMA表达明显升高。随着高糖刺激时间延长,Klotho蛋白表达水平逐渐降低,而miR-21a-5p表达水平逐渐升高,呈现相反的变化趋势(P<0.05)。高糖组核蛋白NF-κB和miR-21a-5p表达水平是低糖组的2.934倍和3.154倍(均P<0.01),而过表达Klotho后,NF-κB和miR-21a-5p表达水平分别下降至高糖组的50.18%和49.24%(均P<0.05)。CHIP结果显示:高糖+pcDNA3.1-Vector组与低糖+pcDNA3.1-Vector组相比,NF-κB和miR-21a-5p启动子结合显著增加至3.121倍(1.000±0.742比3.121±0.115,P<0.01);而过表达Klotho能显著减弱高糖引起的NF-κB和miR-21a-5p启动子结合至54.21%(3.121±0.115比1.692±0.073,P<0.01)。结论Klotho可抑制高糖条件下肾小管上皮细胞NF-κB和miR-21a-5p启动子的结合,使miR-21a-5p表达减少,从而减轻肾小管上皮细胞间质转分化。
出版日期
2020年10月30日(中国期刊网平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)