摘要
摘要目的探讨全反式视黄酸(ATRA)体外诱导人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞凋亡的信号途径。方法采用不同浓度的ATRA处理ARPE-19细胞24 h、48 h，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测其细胞活性；分别采用0、2.5、5、10、15和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡水平和caspase相关蛋白相对表达量；分别采用0、2.5、5、10和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术检测其总活性氧簇(ROS)水平和多重半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(multicaspase)水平，通过实时荧光定量PCR法检测caspase相关基因mRNA相对表达量。其中0 μmol/L ATRA组作为空白对照。结果CCK-8检测结果显示，ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为13.88 μmol/L和11.99 μmol/L，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后细胞存活率总体比较，差异均有统计学意义(F＝176.60、350.30，均P<0.01)。细胞培养24 h时，2 μmol/L、6 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组高，12、14、16、18、20 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞后24 h，细胞凋亡、multicaspase及ROS水平总体比较差异均有统计学意义(F＝86.39、166.84、101.40，均P<0.01)，其中2.5 μmol/L和5 μmol/L ATRA组细胞凋亡率较空白对照组下降，10、15和20 μmol/L ATRA组较空白对照组升高，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组multicaspase和ROS相对表达量较空白对照组升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)；Western blot检测结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组caspase 9蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与空白对照组比较，2.5 μmol/L ATRA组caspase 12蛋白相对表达量升高，5、10、15、20 μmol/L ATRA组逐渐降低，2.5、15、20 μmol/L ATRA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)；与空白对照组比较，5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 3蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组cleaved caspase 3蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 9、caspase 12 mRNA及5 μmol/L、10 μmol/L ATRA组caspase 3 mRNA相对表达量明显升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)。ATRA浓度小于10 μmol/L时，caspase 9和caspase 12 mRNA的相对表达量呈浓度依赖性升高，当浓度达20 μmol/L时，其相对表达量显著降低，但仍高于空白对照组。结论ATRA体外诱导ARPE-19细胞凋亡是通过激活ROS及内源性caspase依赖性凋亡途径导致的。
出版日期
2021年06月25日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
