宁动颗粒治疗抽动秽语综合征的药效学研究

【摘要】 目的 探讨宁动颗粒对抽动秽语综合征的药效学及其毒性的影响。方法 采用宁动颗粒灌胃法观察对小鼠自主活动的影响、对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠率的影响、对去水吗啡(APO)引起小鼠攀爬行为的影响、对小鼠脑内多巴胺（DA）含量的影响及对小鼠急性毒性的影响。结果 宁动颗粒高、低剂量均可明显抑制小鼠的自主活动能力；高剂量有协同阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的作用；高、低剂量均有明显抑制APO引起的小鼠黑质-纹状体系统内DA功能增强的作用，明显缩短持续垂直攀爬时间；高剂量可以降低脑内DA含量，低剂量也有降低脑内DA含量的作用趋势。急性毒性试验1 d内给小鼠药量相当于儿童用量的77.3倍，小鼠生存良好。结论 药理学实验证明宁动颗粒能降低脑内DA含量，有镇静、拮抗APO引起的攀爬行为增强及助睡眠作用；毒理学表明宁动颗粒无明显毒副反应。

【关键词】 宁动颗粒/治疗应用； 多动秽语综合征/中医药疗法； 药理学； 药物毒性； 动物，实验

【Abstract】 Objective To study the pharmacodynamics and toxicity of Ningdong granule for Tourette syndrome (TS). Methods Ningdong granule was given to the mouse by intragastric administration.After that， observe the effect on autonomic activities of mouse，the mouse sleep rate at subthreshold dose of sodium pentobarbital，the special climbing behavior caused by Apomorphine(APO)， the dopamine(DA) content in mouse brain and the acute toxicity. Results Both the high and low dose of Ningdong granule could obviously inhibit mouse special climbing behavior.High dose could function together with subthreshold dose of sodium pentobarbital to cause mouse sleep.Both the high and low dose could inhibit DA function of mouse substantia nigracorpus striatum，and could obviously shorten mouse continual vertical creeping.The high dose could lower brain DA content.The low dose had the tendency of lowering brain DA content.In the acute toxicity test，the dose corresponding to 77.3 times of children dose was given to the mouse.The mouse lived well. Conclusion Ningdong granule can lower brain DA content.It has the function of sedation，antagonizes creeping caused by APO and helps sleep.Toxicology certifies that it has no obvious toxic action.

【Key words】 Ningdong granule/Application to treatment； Tourette syndrome/TCM therapy； pharmacology； Toxicology； Animal expertimental;

抽动秽语综合征是小儿神经系统的一种疑难病。目前尚无理想的治疗药物，宁动颗粒是临床治疗抽动秽语综合征的有效药物。

为进一步探讨其作用机制及安全性，山东省中医药研究院药理室和山东大学附属省立医院中医科于200512～200608进行了药效学和毒理学研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠210只，雌雄各半，体质量18～22 g，由山东大学实验动物中心提供，实验动物合格证号SCXK（鲁）20030004。

1.1.2 实验药物 宁动颗粒：由山东省立医院药剂科提供，批号：20041216。

1.1.3 药效学剂量折算 20 kg儿童日用量30 g，按公式折算60 kg成人日用量［1］：20 kg儿童日用量×1.7×成人体表面积／儿童体表面积=30 g／d×l.7×1.65／0.8=105.2 g／d。小鼠给药高、低剂量，按体表面积比值折算分别为27.4，13.7 g／（kg·d），相当于临床20 kg儿童每千克日用量的18.2，9.1倍；按0.2 mL／kg鼠重的体积灌胃给药。

1.1.4 仪器与试剂 高效液相色谱仪、电化学检测器、C18色谱柱ODS：10 μm流动相：0.015 mol/L氯乙酸-氢氧化钠缓冲液：甲醇的混合液(94∶6)。多巴胺(DA)标准液配制：分析纯DA溶于0.1 mol/L HCl，质量浓度为1.0 g／L，然后稀释10倍，冰箱保存，再稀释100倍作为标准液，质量浓度为1.0 mg／L，进样量为4 μL。

1.2 方法

1.2.1 宁动颗粒对小鼠自主活动的影响 取昆明种小鼠52只，按体质量随机分成4组：空白对照组、高剂量组、低剂量组、安定组，每组13只。给药剂量分别为：药物高、低剂量组给宁动颗粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定组给安定6.5 mg／(kg·d)，高、低剂量组分别按25 mL/kg给药，空白对照组给等体积水灌胃，每日1次，连续10 d；安定组采取一次性给药，末次药后1 h，记录2 min内自主活动数，结果进行组间统计学处理［2］。

1.2.2 宁动颗粒对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠率的影响 取昆明种小鼠52只，按体质量随机分成4组：空白对照组、高剂量组、低剂量组、安定组，每组13只。给药剂量分别为：药物高、低剂量组给宁动颗粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定组给安定6.5 mg／(kg·d)，高、低剂量组分别按25 mL/kg给药，空白对照组给等体积水灌胃，每日1次，连续10 d；安定组采取一次性给药，末次药后1 h，逐只称重、腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠30 mg/kg，按10 mL/kg给药，记录15 min各小鼠的睡眠情况，结果进行组间统计学处理［2］。

1.2.3 宁动颗粒对去水吗啡（APO）引起小鼠攀爬行为的影响 取昆明种小鼠52只，按体质量随机分成4组：空白对照组、高剂量组、低剂量组、氟哌啶醇组，每组13只。给药剂量分别为：药物高、低剂量给宁动颗粒27.4，13.7 g／(kg·d)，氟哌啶醇组给氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低剂量组分别按25 mL/kg给药，空白对照组给等体积水灌胃，每日1次，连续10 d；氟哌啶醇组采取一次性给药，末次药后45 min，皮下注射APO 1.0 mg/kg，放入铁丝笼内适应环境15 min，将动物放到垂直悬挂的铁丝网上，开始计时，记录动物连续攀爬的时间(以持续停止攀爬10 s视为不攀爬的标志)，结果进行组间统计学处理［2］。

1.2.4 宁动颗粒对小鼠脑内DA含量的影响 取昆明种小鼠32只，按体质量随机分成4组：空白对照组、高剂量组、低剂量组、氟哌啶醇组，每组8只。给药剂量分别为：药物高、低剂量给宁动颗粒27.4，13.7 g/(kg·d)，氟哌啶醇组给氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低剂量组分别按25 mL/kg给药，空白对照组给等体积水灌胃，每日1次，连续10 d；氟哌啶醇组采取一次性给药，末次药后1 h，将动物麻醉后处死，迅速取脑，按Glowinsky法，取下丘脑，干冰固化后称重，质量在8～12 mg，放入塑料管中，每管加入0.05 mol／L冰HCLO4，用匀浆器打匀浆1 min低温离心30 min，去上清液50 μL，进样检测脑内DA含量，结果进行组间统计学处理［3］。

1.2.5 宁动颗粒对小鼠急性毒性的影响 取体质量在18～22 g小鼠20只，按体质量随机分为宁动颗粒组和空白对照组，每组10只，首先进行LD50预试，发现无法测定LD50，故进行MTD测试。实验前动物禁食12 h，然后按最大浓度、最大体积给药，1 d内给药5次，连续观察7 d，记录实验前后体质量变化并密切观察动物用药后生命体征变化。 2 结果

2.1 宁动颗粒对小鼠自主活动的影响 结果表明，宁动颗粒高剂量可以明显抑制动物的自主活动能力，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。低剂量也能明显抑制动物的自主活动能力，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。表1 宁动颗粒对小鼠自主活动能力的影响注：与空白对照组比较，aP<0.05，bP<0.01，cP<0.001。

2.2 宁动颗粒对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠率的影响 结果表明，宁动颗粒高剂量有一定的协同阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的作用，与空白对照组比较呈现一定的作用趋势，低剂量作用不显著。见表2。表2 宁动颗粒对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠率的影响 注：与空白对照组比较，aP<0.001。

2.3 宁动颗粒对APO引起小鼠攀爬行为的影响 结果表明宁动颗粒高、低剂量均可以明显抑制APO引起的动物黑质-纹状体系统内DA功能增强的作用，能明显缩短持续垂直攀爬时间，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。 表3 宁动颗粒对APO引起小鼠攀爬行为的影响注：与空白对照组比较，aP<0.05，bP<0.001。

2.4 宁动颗粒对小鼠脑内DA含量的影响 结果表明宁动颗粒高剂量可以降低脑内DA含量，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。表4 宁动颗粒对小鼠脑内DA含量的影响注：与空白对照组比较，aP<0.05。

2.5 宁动颗粒对小鼠急性毒性的影响 宁动颗粒组小鼠给药量达到116 g／（kg·d)，相当于临床20 kg儿童每千克日用量的77.3倍，药后小鼠明显安静，进食、饮水、神经反射及体质量变化均未见明显异常，小鼠生存良好，无一只死亡。表明宁动颗粒用于临床安全、低毒。见表5。表5 宁动颗粒对小鼠的急性毒性试验

3 讨论

抽动秽语综合征是一种儿童精神障碍性疾病。临床以反复发作、不自主的多发性肌肉抽动、喉中发出奇特叫声或骂詈不避亲疏为特征，多见于学龄期儿童。近年来发病率明显升高，发病原因目前尚不十分清楚，其发病机制似与DA活性过度有关［4］。西药治疗以氟哌啶醇、安定为主要药物取得了较好的疗效，但具有副反应多，停药后复发率高的特点。本病属于中医“惊风”、“抽搐”、“瘛疭”、“筋惕肉瞤”等范畴。该病发生的关键是心肝亏虚，虚风内动；复遇精神刺激，情绪波动及学习紧张等因素导致耗神伤精，阴血亏虚，出现肌肉筋脉失养、言语欠聪，诸症逢生。治疗以养心柔肝、熄风止痉原则。

宁动颗粒由党参、麦冬、白芍、龙骨、牡蛎、地龙、甘草等组成。实验研究表明宁动颗粒对提高患儿免疫力有明显作用。有关研究表明党参多糖对体液免疫有较强促进作用，并在小剂量给药时对细胞免疫有促进作用［5］；地龙肽激活并促进自然杀伤细胞杀伤靶细胞，对溶血性链球菌、草绿色链球菌有抑制作用［6］；白芍具有抗炎作用；甘草配伍有较强的协同作用。白芍总苷对金葡菌、溶血性链球菌、草绿色链球菌、肺炎球菌、伤寒杆菌均有不同程度抑制作用，且抗菌作用强，抗菌谱广［7］。药理学实验证明宁动颗粒有镇静、拮抗APO引起的攀爬行为增强并有一定的助睡眠作用，并能降低脑内DA含量；毒理学表明安全、低毒，为宁动颗粒的临床应用提供了药理学依据及安全保障。

【参考文献】
［1］ 任娟清.实用药物手册［M］.3版.济南：山东科学技术出版社，2003：15931594.

［2］ 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.2版.北京：人民卫生出版社，1991：641642，657658.

［3］ 刘国卿.DL四氢巴马汀对大鼠单胺的排空作用［J］.药学学报，1983，18(9)：39.

［4］ 吴瑞萍，胡亚美，江载芳.诸福棠实用儿科学［M］.6版.北京：人民卫生出版社，2000：1191.

［5］ 张晓君，祝晨蔯，胡黎，等.党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响［J］.中药新药与临床药理，2003，14(3)：174176.

［6］ 唐小云，许静，梁再赋，等.地龙肽免疫药理作用的实验研究［J］.细胞与分子免疫学杂志，2004，20(2)：249250.

［7］ 姜建萍.白芍的现代药理研究及应用概况［J］.中医药信息，2000，12（3）：68.