作者:周吴萍 岑菲菲,甄汉深
【摘要】 目的测定广西不同产地苦玄参中5种有机磷农药残留量。方法以混合溶剂超声提取,提取物通过活性炭净化后进行气相色谱质谱联用(GC-MS)测定。结果5种农药回收率在72%~108%之间,RSD<12%。农药的最低检测限在0.51~1.27μg /kg之间。5种产地药材中有机磷农药残留均未超过国家标准。结论GCMS内标法测定苦玄参药材中的农药残留,方法简便快速、可靠、灵敏度高,可作为有机磷农药残留的定性定量方法。
【关键词】 气相色谱-质谱联用法 有机磷农药 苦玄参
Abstract:ObjectiveTo determine the residue of five orgarophosphorous pesticides in different origin of Picria fel-terrae Lour.. MethodsUltrasonic wave was used to extract multi-pesticides. After cleaned up with active carbon, the extraction was ready for GC-MS analysis. ResultsThe recoveries of five organophosphorous pesticides were between 72%~108%, with RSD<12%. The LODs were in the range of 0.51~1.27μg/kg. Their residues of organophosphorus pesticides didn' t exceed national standard. ConclusionThe GC-MS method has advantages of time saving, convenience, sensitivity. It can be used for qualitative and quantitative analysis of residues of organophosphorous pesticides in Picria fel-terrae Lour.
Key words:GC-MS; Organophosphorus pesticides; Picria fel-terrae Lour
有机磷农药在我国的使用已有三十多年历史,其品种和用量目前仍居各类农药之首[1]。中药材在未按GAP要求进行规范化种植前,药农曾有滥施农药的现象,致使农田土壤及中药材中农残含量超标,对中药的污染很严重,制约了我国中药材产品的质量,严重地影响到用药的安全性。
苦玄参为广西地道药材,来源于玄参科植物苦玄参Picria fel-terrae Lour.的干燥全草[2],在广西作药用历史已久,也是多种中成药的原料,市场需求量大。为了解苦玄参药材农药污染情况,为中药使用的安全可控提供科学依据,以广西特产药材苦玄参为研究对象,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS法)测定苦玄参药材中有机磷农药残留量。
1 仪器与材料
Agilent 6890N/5973N 气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司),HP-5MS(30 m×0.25 μm×0.32 mm)弹性石英毛细管柱(美国安捷伦公司),AE100型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
苦玄参分别采于广西龙州、梧州、苍梧、平乐、宁明县,经广西中医学院药学院刘寿养副教授鉴定为玄参科植物苦玄参Picria fel-terrae Lour.)干燥的全草,粉碎,过2号筛,备用。
丙酮、石油醚(60~90℃)均为分析纯(中国医药集团上海化学试剂公司),重蒸后使用;水为超纯水;活性炭储存于密闭容器中备用;过滤滤纸用丙酮浸泡、干燥后使用 ;5种农药标准品乙酰甲胺磷、甲拌磷、杀螟硫磷、毒死蜱均购自迪马公司,纯度>95%,甲基-对硫磷(G23010-92)国标液(农业部环保科研监测所研制)。内标磷酸三丁酯为分析纯(广东汕头市西陇化工厂)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件进样口温度250℃,程序升温:100℃(2 min)→10℃/min→200℃(5 min)→2℃/min→210℃post280℃(4 min),接口温度280℃,载气为He,柱流量为1.0ml/min,进样方式为脉冲不分流进样(0.75min后开分流阀),进样体积为1μl。
质谱条件:电子能量70ev,气体压力为0.5 kPa,质量扫描范围为30~500 amu,选择离子(SIM)采集各有机磷农药离子碎片。结果见表1。表1 GC-MS-SIM法测定5种有机磷农药的开始采集时间和监测离子(略)
2.2 实验溶液的制备
2.2.1 对照品液的制备分别精密称取对照品乙酰甲胺磷10.13 mg,甲拌磷10.38 mg,杀螟硫磷10.13 mg,毒死蜱10.23 mg,甲基对硫磷国标液(100 μg/ml)2 ml置10 ml量瓶中,用丙酮定容至刻度,摇匀,分别制得乙酰甲胺磷储备液、甲拌磷储备液、杀螟硫磷储备液、毒死蜱储备液、甲基对硫磷储备液。
2.2.2 混合母液的制备精密量取上述乙酰甲胺磷储备液0.5 ml、杀螟硫磷储备液0.3 ml,甲基对硫磷储备液8 ml、其余储备液各0.2 ml,置10 ml量瓶中,用丙酮稀释至刻度,即得混合对照品母液。 2.2.3 内标液的制备精密称取磷酸三丁酯1 mg,置于500 ml量瓶中,加丙酮稀释至刻度,摇匀,得浓度为2 μg/ml的内标储备液。2.2.4 供试品溶液的制备精密称取苦玄参药材粗粉2 g,置100 ml锥形瓶中,加入石油醚-丙酮(2∶1)20 ml,置冰浴中超声处理10 min,滤过,滤渣及滤器用石油醚-丙酮(2∶1)10 ml洗涤,合并滤液,置50 ml烧杯中,用空气流浓缩至约15 ml,加入0.2 g活性炭,放置5 min,振摇数次,直至颜色变浅,滤过,用提取溶剂洗涤滤渣及滤器,合并滤液,在滤液中精密加入20 μl内标储备液,用氮气吹干,再精密加入丙酮2 ml溶解,备用。
2.3 标准曲线与检测限分别精密吸取混合对照品母液0.07,0.1,0.5,1,1.5 ml置2 ml量瓶中,逐个精密加入内标储备液20 μl,用丙酮稀释至刻度并摇匀。分别取1μl进样,按上述色谱-质谱条件进行测定,每种浓度的标准品液连续进样2次。以各农药定量离子峰面积与内标定量离子峰面积的比值为纵坐标(Y),标准品的进样量为横坐标(X),进行线性回归,制作标准工作曲线。以信噪比(S/N)=3为衡量指标,考察5种农药的检测限。结果见图1和表2。
表2 各农药标准曲线、相关系数、线性范围以及最小检出限(略)
2.4 精密度实验取制作标准曲线中间浓度的对照品溶液,连续进样5次,按“2.1”色谱条件分别测定农药峰面积与内标峰面积,计算其比值,得到乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、毒死蜱的RSD分别为5.5%,1.9%,4.5%,4.2%,3.1%。
2.5 加样回收率精密称取同一产地苦玄参药材粉末10份,每5份分别精密加入混合农药对照品溶液0.1,0.5 ml,混匀,挥干。按上述样品处理及测定方法操作,计算加样回收率。结果见表3。表3 5种有机磷农药的添加回收率(略)
2.6 样品农药残留量测定采用上述方法对5个产地苦玄参的有机磷农药残留量进行测定,结果均未检出有机磷农药。
3 讨论
用GC-MS内标测定方法同时测定5种有机磷农药,MS检测器选择性较高,在对农药的定性定量方面是其他检测器无法相比的。内标法克服了GC-MS外标法中进样量、样品分析过程仪器状态不稳定引起的响应值变化等系统误差,重复性好。
在广西5个产地的苦玄参药材中没有检出有机磷农药残留,但这并不能说明种植过程中没有使用过有机磷农药,由于有机磷农药化学结构中多含有酯键,不稳定,易受热、酸、碱影响而降解,不易长期残留,故在药材中检出较少[3,4]。但在一些药材产区,由于农药的滥用、误用或采收时间不当[5],均有可能造成有机磷农药的残留。因此,仍应建立其测定方法,以保证中药材在使用时有机磷农药不超标。
【参考文献】
[1]帅 琴,杨 薇,郑岳君,等.固相微萃取与气相色谱-质谱联用测定有机磷杀虫剂的残留[J].色谱,2003,21(3):273.
[2]广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[S].南宁:广西科学技术出版社,1992:225.
[3]张 炜,王 伟.几种中成药中有机磷类农药残留分析[J].解放军药学学报,2002,18(1):56.
[4]张俊清,刘明胜,邢福桑,等.近年来中药材农药残留的研究概况[J].中国药学杂志,2003,38(1):7.
[5]张文玉.论中药材污染的防治与控制[J].药学实践杂志,2005,23(6):336.