抗风湿类药酒中糖皮质激素的测定

【摘要】 　　目的建立了用高效液相色谱（HPLC）法测定抗风湿类药酒中糖皮质激素的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Waters XTerra TMRP18 (4.6 mm×250 mm ，5 μm)柱，流动相为甲醇-水（65∶35），检测波长为245 nm。结果醋酸泼尼松在0.40～2.00 μg的范围内线性关系良好。平均回收率为99.8%，RSD为0.77% 。结论该方法简单准确，重复性好，可用于该类药酒的质量控制。

【关键词】 抗风湿类药酒；糖皮质激素；醋酸泼尼松；高效液相色谱

　　Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of glucocorticoids in anti-rheumatism medicinal liquor. MethodsThe condition of HPLC was Waters XTerraTMRP18(4.6 mm×250 mm，5 μm) with method -water(65∶35) as the mobile phrase; the detection wavelength was 245 nm. Results The calibration cuve of prednisone acetate was linear in the range of 0.40 μg to 2.00 μg .The average recovery was 99.8%,RSD was 0.77% .ConclusionThe method is simple, accurate, sensitive. This study provides a test method for the quality control of similar products.

　　Key words:Anti-rheumatism medicinal liquor； Glucocorticoids； Prednisone acetate； HPLC

　　抗风湿类药酒是一类治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎的药酒。不同品牌的抗风湿类药酒有不同的中药配方，主要是用青风藤、穿山龙、八角麻、乌梢蛇等各种有活血、抗炎、止痛功效的中药制成。但有些厂商为了鼓吹其产品含有名贵药材，有抗炎止痛的神奇作用，在酒中加入了如醋酸泼尼松等糖皮质激素药物，虽然这类药物有较好的抗炎止痛作用，但长期服用对身体副作用较大［1］。以醋酸泼尼松为例，本实验建立用HPLC法 测定抗风湿类药酒中糖皮质激素的方法 。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪 (包括Waters 2695 Separations Module,Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector)；Waters XTerra TMRP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；威玛色谱工作站

　　1.2 试剂二氯甲烷（AR）（北京化学试剂厂），NaCl（AR）（广州化学试剂厂）， 无水Na2SO4（AR）（广州化学试剂厂），甲醇（色谱纯）（天津市四友生物医学技有限公司），乙醇（AR）（成都科龙化工试剂厂），醋酸泼尼松标准对照品：（中国药品生物制品检定所），抗风湿类药酒（市售）。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱为Waters XTerra TMRP18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为甲醇∶水（65∶35）；流速1.0 ml/min；检测波长245 nm；柱温为室温。

　　2.2 对照品及供试品溶液的制备

　　2.2.1 醋酸泼尼松对照品溶液的制备精密称取醋酸泼尼松对照品50 mg置50 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，制成1 mg·ml-1的储备液，吸取储备液1 ml用乙醇定容至5 ml，此溶液每毫升含有醋酸泼尼松200 μg,作为对照品溶液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备精密吸取药酒样品50 ml置蒸发皿中，水浴上挥净乙醇，转移入500 ml分液漏斗中，加入100 ml NaCl饱和溶液，100 ml二氯甲烷萃取，分取有机层，再用二氯甲烷50 ml萃取1次，合并有机层后，用水洗涤后过无水Na2SO4柱。用旋转浓缩蒸发器至近干。残渣用乙醇溶解定容至10 ml，过0.5 μm微孔滤膜，得供试品溶液。2.2.3 标准曲线的制备精密吸取醋酸泼尼松储备液（1mg·ml-1）1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0 ml置25ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，依次进样。

　　2.3 线性关系以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，将所得数据绘成标准曲线，醋酸泼尼松线性方程为：Y=7.13×105+2.84×107X，相关系数0.999 7。

　　2.4 回收率实验精密吸取50 ml已检出醋酸泼尼松的药酒样品5份，分别精密加入醋酸泼尼松对照品溶液（1 mg·ml-1）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，按“2.2.2供试品溶液的制备”进行操作测定，计算回收率。结果见表1，表明方法回收率较好。表1 回收率实验结果（略）

　　2.5 精密度实验取同一份供试品溶液，在相同条件下连续进样5次，计算醋酸泼尼松峰面积的RSD为0.78%，表明精密度良好。

　　2.6 稳定性实验取已测出醋酸泼尼松的供试品溶液1份，分别在放置暗处0，2，4，6，8 h，取10μl进样，测定其量，计算其相对标准偏差（见表2），表明在避光条件下稳定性较好［2］。表2 稳定性实验结果（略）

　　2.7 重复性实验取同一样品5份，按“2.2.2 ”项下供试品溶液的制备进行操作测定，计算醋酸泼尼松量及相对标准偏差。结果见表3，表明方法重复性较好。

　　2.8 结果测定经过检测几个不同厂家的抗风湿类药酒,检出上海某厂生产的批号为2005017的抗风湿类药酒含有醋酸泼尼松成分。表3 重复性实验结果（略）

　　3 讨论

　　3.1 提取条件的选择糖皮质激素溶于有机溶剂，将酒中的乙醇挥去，可避免糖皮质激素溶于乙醇带来的损失。选用二氯甲烷作为提取剂，比氯仿，正己烷等其他有机溶剂不易乳化，加标回收率较高。

　　3.2 色谱条件的选择在245 nm处醋酸泼尼松等甾体激素分子都有吸收，所以采用紫外检测即可得满意结果。原选用乙腈-水，甲醇-磷酸二氢钾溶液系统，效果不很理想。选用甲醇-水［3］（65∶35）时，醋酸泼尼松出峰时间较合适。见图1～3。

　　用以上提取和色谱条件可同时检测其他糖皮质激素如可的松、强的松龙等。本实验方法简单准确，重复性好，可用于该类药酒的质量控制。

【参考文献】
　　［1］郭嘉隆,毕黎琦.糖皮质激素的药理学特点及临床作用［J］.中国社区医师,2006,22(5):16.

　　［2］罗丽娟,黄诺嘉. HPLC法测定醋酸泼尼松乳膏的含量［J］.广东药学院学报,2004,20（5）: 496.

　　［3］国家药典委员会.中国药典,Ⅱ部 ［S］. 北京：化学工业出版社,2005:845.