高效液相色谱法测定冠心丹参滴丸中丹酚酸B的含量

【摘要】 目的测定冠心丹参滴丸中丹酚酸B的含量。方法HPLC法，ODS2-C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），流动相：(甲醇-乙腈)∶(甲酸-水)=37∶63，其中甲醇∶乙腈=3∶1,甲酸∶水=1∶29；流速1.0 ml·min-1；检测波长为286 nm。结果丹酚酸B浓度在0.1～0.9 μg 范围内线性关系良好(r=0.999 5,n=5)。加样回收率为101.56%,RSD=2.86%(n=6)。结论该实验提取丹酚酸B处理方法简单，测定结果稳定可靠，可作为冠心丹参滴丸中丹酚酸B的定量分析方法。

【关键词】 冠心丹参滴丸； 丹酚酸B； 高效液相色谱法

Abstract:ObjectiveTo quantitatively determine salvianolic acid B in Guanxindanshen Drop pills. MethodsThe HPLC procedure was used in the determination, the chromatographic column was ODS2-C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm), the mobile phase was (methanol- acetonitrile)∶(formic acid-water) =37∶63, and methanol:acetonitrile =3∶1, formic acid: water=1∶29.The flow velocity was 1.0 ml·min-1, and the detection wavelength was 286 nm. ResultsIt showed that salvianolic acid B had a good linear relationship when its concentration was in the range of 0.1～0.9μg(r=0.999 5,n=5); and the sample recovery of the procedure was 101.56% (RSD=2.86%, n=6). ConclusionThe method is simple and accurate. It can be used for extraction and determination of salvianolic B in Guanxindanshen Drop pills.

Key words:Guanxindanshen Drop pills； Salvianolic acid B ； HPLC

冠心丹参滴丸由丹参、三七、降香油组成，具有活血化瘀、理气止痛的功效。用于治疗气滞血瘀所致的胸痹心痛。丹酚酸B为丹参中酚性酸的主要有效成分之一，具有纤溶和增加冠脉流量的作用［1］。我们以丹酚酸B为检测指标建立了冠心丹参滴丸的高效液相色谱分析方法。

1 仪器和试药

Agilent1100 HPLC 测定仪，VWD检测器。丹酚酸B对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号（111562-200403）；所用化学试剂均为分析纯。冠心丹参滴丸为中发实业集团业锐药业有限公司生产，批号YR0701。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱为ODS2-C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，10 μm）；流动相为(甲醇-乙腈):(甲酸-水)=37∶63,其中甲醇∶乙腈=3∶1,甲酸∶水=1∶29；流速1.0 ml·min-1；检测波长为286 nm。在上述色谱条件下丹酚酸B与其它成分分离良好见图1～3。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品2.5 mg置于25 ml容量瓶中，加适量75%甲醇使之溶解，用75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品溶液（0.1 mg/ml）。

2.3 供试品溶液的制备 取冠心丹参滴丸10粒，精密称定,研碎，置10 ml容量瓶中,加75%甲醇适量,超声30 min,用75%甲醇稀释至刻度, 摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。 2.4 阴性对照液的制备取缺丹参的其他各味中药按处方工艺制成阴性对照样品［2］，按“2.3”项下方法制成阴性对照液。

图1 丹酚酸B标准品

图2 滴丸供试样品

2.5 线性关系的考察 精密吸取丹酚酸B对照品溶液1，3，5，7，9 μl，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以丹酚酸B对照品的峰面积（Y）对进样量（X，mg）进行线性回归，得回归方程：Y=1 118 000.00X+28.22，r=0.999 5。结果表明丹酚酸B在0.1～0.9 μg范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系。

图3 阴性对照

2.6 稳定性实验 精密吸取供试品溶液（批号YR0701）,在0,2,4,6,8 h分别进样10 μl测得丹酚酸B峰面积的平均值为549.78,RSD值为0.79%。表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 精密度实验 精密吸取标准品溶液5 μl（0.1 mg/ml），连续进样5次，测得丹酚酸B峰面积的平均值为572.04，RSD值为2.10%，精密度良好。

2.8 重复性实验　取供试品0.4 g，6 份,精密称定,按照供试品溶液制备方法制得供试品溶液,测定含量。平均值为0.116 5%,RSD值为0.95%。

2.9 回收率实验 采用加样回收法。称取已知含量（0.1164%）的样品约0.2 g,精密称定，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液(0.14 mg/ml)1.6 ml,依供试品溶液制备法进行提取,计算回收率。结果丹酚酸B平均加样回收率为101.56%,RSD=2.86%。结果见表1。

回收率（%）=测出的丹酚B总量-样品中丹酚酸B含量丹酚酸对照品加入量×100%表1 回收率实验结果

2.10 样品测定结果 精密称取3份样品，按供试品溶液制备法，制得3份供试品溶液，分别测定峰面积，计算丹酚酸B的含量。结果见表2。表2 含量测定结果

3 讨论

本实验通过采用甲醇-乙腈-甲酸-水的不同比例为流动相进行实验，一方面加大酸的比例改善丹酚酸B的拖尾现象，一方面加大水相（甲酸水）比例增大丹酚酸B峰的分离度。最终确定(甲醇-乙腈)∶(甲酸-水)=37∶63,其中甲醇∶乙腈=3∶1,甲酸:水=1∶29的流动相比例可使丹酚酸B峰得到较好的分离。此外，温度影响丹酚酸B的出峰时间，温度升高，出峰时间提前。空白实验(处方中无丹参)证明,在丹酚酸B相应位置上无峰出现,空白样品无干扰。从研究的结果可以看出，本实验方法能较完全地将冠心丹参滴丸中的丹酚酸B提取出来，操作简便、快速、准确，可作为丹酚酸B的定量分析方法，同时为相关的质量标准研究提供科学依据。

【参考文献】
［1］ 孙文基，绳金房.天然活性成分简明手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1998：167.

［2］ 李奉勤,田志国,史冬霞，等.正交试验探讨降香挥发油的最佳提取条件［J］.中国实验方剂学杂志, 2005,11 (4) :24.