辣椒叶提取物对环孢素 A肾损伤小鼠防护作用研究

辣椒叶提取物对环孢素 A肾损伤小鼠防护作用研究

朱梓庆 胡磊 王颖 贺星 吴孟遥 唐玮蔚（通讯作者）

（长沙医学院院基础医学院，湖南省长沙市 410000）

摘要：目的：了解辣椒叶提取物对环孢素A导致肾损伤的治疗作用。 方法：实验通过环孢素A建立小鼠肾损伤模型来探究辣椒叶提取物对小鼠防护作用的研究，从辣椒叶的提取物多酚类化合物检测出具有抗氧化及抗急性炎症活性。结模型组小鼠尿素氮、血肌酐较对照组明显升高（P<0.05），肌酐清除率较对照组明显降低。用药后，缬沙坦组及辣椒叶提取物组尿素氮、血肌酐较模型组均明显降低（P<0.05），肌酐清除率较模型组明显升高（P<0.05）。 结论：辣椒叶提取物对环孢素A导致肾损伤具有一定疗效，效果与缬沙坦效果相当。

关键词：辣椒叶提取物；肾损伤； 防护作用

辣椒叶提取物中富含黄酮，黄酮是一种很强的抗氧化剂，可有效消除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老^[1]。而从辣椒叶的功能来看，它具有防癌保健的功效。在民间辣椒叶作为治疗一些顽疾的偏方入药，如治疗痛风、偏头痛等^[2-3]。有报道称辣椒叶含有丰富的药理活性物质，如降血糖、抗氧化、抗癌、抑菌等，辣椒叶多酚提取物粗提物及纯化物的体外抗氧化及抗急性炎症活性。辣椒叶多酚提取物是一种有效的天然抗氧化剂，而且具有一定的抗氧化能力及抗急性炎症活性^[4]。

1 材料与方法

1.1 实验材料与试剂：辣椒叶提取物 3%的戊二醛溶液、0.4%戊巴比妥钠、缬沙坦、4%甲醛、10%福尔马林液、磷酸缓冲液、固定液、二甲苯、苏木素、0.1%氨水、1%盐酸、石蜡 乙醇Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水等。

1.2 实验仪器与设备：电子天平、超薄切片机、分光光度计、恒温鼓风干燥箱、恒温水浴锅、超速离心机、EP管等。

1.3 实验方法

（1）建立小鼠模型：小鼠（19～22g）40只适应性喂养1周后常规饲料饲养。随机分为对照组、模型组、辣椒叶提取物组和阳性对照缬沙坦组，每组10只。

对照组每天喂养普通饲料 模型组用稀释CsA灌胃 辣椒叶提取物组用用辣椒叶提取物蒸馏水灌胃 缬沙坦组用缬沙坦和稀释CsA灌胃24小时后从对照组和辣椒叶提取物组中分别随机取二只老鼠解剖取肾脏做病理学切片^[5]。

（2）小鼠的血清肌酐 血清尿素氮以及尿肌酐的测定：将剩下全部小鼠逐一称重，10%水合氯醛麻醉，游离股动脉取血，离心，留取上层血清，-4℃下进行保存，生化检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），并计算肌酐清除率（Ccr）。

（3） HE染色：用二甲苯脱蜡，递减酒精浓度，苏木精染色8分钟之后用清水洗掉载玻片上残余的苏木精染液用l%盐酸酒精分化5秒钟，取出用清水洗涤后，放入0.1%的氨水溶液返蓝1分钟然后取出后放人流水冲洗30分钟。伊红染色8分钟，无水酒精脱水6分钟，二甲苯透明5分钟，最后用中性树胶封片。

1.4 统计学分析：用SPSS22.0对数据库分析，计量资料用（ ）描述，组间比较用独立样本F检验。计数资料用N（%）描述，比较用卡方检验。

2 结果

2.1 各组小鼠尿素氮、血肌酐、肌酐清除率的变化

模型组小鼠尿素氮、血肌酐较对照组明显升高（P<0.05），肌酐清除率较对照组明显降低。用药后，缬沙坦组及辣椒叶提取物组尿素氮、血肌酐较模型组均明显降低（P<0.05），肌酐清除率较模型组明显升高（P<0.05）。

表1 各组小鼠尿素氮、血肌酐、肌酐清除率的变化

2.2 组织病理学形态观察

HE染色显示对照组肾小管上皮细胞排列整齐，无水肿；模型组肾小管上皮细胞坏死、脱落，间质大量炎性细胞浸润；缬沙坦组及辣椒叶提取物组上皮细胞水肿、坏死、脱落及炎性细胞浸润均较模型组为轻。

3 讨论

肾脏疾病是临床发病率较高的常见病，临床上具体肾脏疾病种类繁多，不同类型肾脏疾病之间存在部分相近的病理组织学特点，同一种类肾脏疾病不同病理分型之间亦存在相近的病理组织学特点，这为肾脏疾病的诊断和鉴别诊断带来了一定困难^[9-11]。环孢素A导致肾损伤肾脏疾病中较为重要的一类，据保守估计，全球每年新发环孢素A导致肾损伤7万，其中超过5000例患者因病情过重而导致死亡^[3]。

本实验结果显示，辣椒叶提取物对环孢素A肾病小鼠的肾组织结构损伤具有一些改善作用，可减轻胶原纤维的表达及纤维化程度，降低血肌酐、尿素氮，升高肌酐清除率，改善肾功能。尿素氮、血肌酐、肌酐清除率均为表征人体肾脏生理功能的重要指标，但并不是肾小球肾炎病情评估的关键指标。尿素氮和血肌酐可自由通过肾小球的过滤膜，但是绝大部均被近曲小管所吸收，因此，尿素氮和血肌酐含量的升高可以说明肾脏局部的严重损伤，其含量的检测对于急性肾小球肾炎正确诊断的灵敏度和特异度比较高。而患者肌酐清除率的差异可能与患者肾脏功能沉积IgG而影响到肾脏代谢有关，虽然目前对于IgG出现于尿液中的具体机制尚不明确，但是大量研究已证实，急性肾小球肾炎患者肾小球部位沉积了大量的免疫复合物，其中以IgG居多^[5-6]。测定循环免疫复合物中IgG总量并不能提示肾小球肾炎患者病情严重程度，但是肾脏来源中的IgG则可以作为肾小球局部免疫性损伤的特异性指标。

但是本研究尚未对不同组别老鼠肾脏IgG含量进行检测和分析，所得结论具有一定局限性，这需要在后续研究中进一步加以探索。

参考文献

[1]赵宇,刘燕,商黔惠,李浩,任思斯,刘婵,刘娟,祝之明.辣椒素对高盐诱导大鼠肾小球损害及转化生长因子β_1/Smads通路的影响[J].中华高血压杂志,2018,26(9):837-844.

[2]张炯,王佳,王芳,李贵森.辣椒素减轻肾缺血再灌注损伤的线粒体相关机制[J].中国动脉硬化杂志,2018,26(6):583-587.

[3]赵宇,李浩,商黔惠,任思斯,刘婵,刘娟,祝之明.辣椒素通过抑制肾小管间质纤维化改善高盐诱导肾脏损害的作用[J].中华高血压杂志,2018,26(4):349-356.

[4]廖盼丽,黄霖.辣椒素对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及TRPV1通路相关性研究[J].天然产物研究与开发,2018,30(9):1614-1620.

[5]罗超.辣椒素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中西医结合肾病杂志,2017,18(7):617-619+660.

[6]孙允冀,李笑然,何伸宝,程双蕾,秦泽,卢建忠,张杨,史庭凯,岳中瑾.辣椒素受体-5在头孢曲松结石大鼠模型肾脏中的表达及其意义[J].中国医院药学杂志,2016,36(24):2166-2169.

作者简介：朱梓庆（1997年12月-）.男. 籍贯湖南常德，本科，长沙医学院在校生，E-mail：756743272@qq.com

通讯作者: 唐玮蔚（1989年6月-）.女.籍贯湖南张家界，硕士，讲师，研究方向结构生物学，E-mail：adatong2007@126.com

项目基金：长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目-长医教[2018]77号-208《辣椒叶提取物对环孢素A肾损伤小鼠防护作用研究》