注射用骨肽的制备工艺和质量研究

注射用骨肽的制备工艺和质量研究

贾继元

黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 158100

【摘 要】目的：通过制备工艺研究实验，确定制备注射用骨肽时最合适的工艺与质量状况，形成该药品的质量标准。方法：利用正交设计手段来设定骨提取物的处理流程，应用提取工艺时，必须增加高压用水量，处理次数为2次，单次的处理时间大约为1h。在低温环境中放置滤液，时间为36h，除去其中的脂肪，加热至70℃，采用真空浓缩处理工艺，去除杂蛋白时应用酸碱沉淀的方法，最后通过活性炭进行有效吸附，使用膜来完成过滤处理的工作。结果：经过一系列的提取处理工作之后，获取提取物为淡黄色，测定其澄清度时，可确定既符合质量标准，pH值测定为7.04，为碱性物质，其中多肽的含量数值为17.1mg/ml，氮的总含量为5.1mg/ml。结论：这种提取工艺技术可确保注射用骨肽符合质量标准，加工参数也具有比较强的合理性，产品的实际质量水平比较高，可在制备该药品时选用这种工艺手段。

【关键词】注射用骨肽；制备工艺；质量水平

复方骨肽是一种具有多种效用的药品，可起到镇痛抗炎、促进骨折伤处愈合等作用，与同类药品相比，其疗效突出、患者体现出的耐受性比较强、带来的毒副作用偏小。在当前主要被应用到骨折、骨质增、类风湿关节炎与风湿病等疾病的治疗过程中。以类风湿关节炎这种病发率比较高的疾病为例，其属于全身性慢性疾病，复方骨肽药品可发挥良好的应用作用。生产该种药品的厂家数量不多，原有工艺手段存在一定的问题，必须加深对工艺技术的研究工作，提升综合制备水平，以达到药品质量标准，现从提取工艺切入，探讨药品加工过程重中使用的工艺手段与最终的药品质量情况，研究过程如下：

1 材料与方法

1.1 一般材料

原材料：猪四肢骨。试剂：水要是纯化水，乙醇、盐酸、氢氧化钠是分析纯。活性炭必须要是药用级的。检测需要的试剂如下：总氮量测定：浓硫酸、硼酸和硫酸钾。多肽鉴别和含量测定：硫酸铜、酒石酸钾、双缩脲试剂、碳酸钠和氢氧化钠。高分子量物质分析试剂：流动相使用的是乙腈一三氟乙酸一水，具体的比例是 10:0.05:90，分子量标准品：胰岛素、核糖核酸酶 A、生长激素释放抑制因子、胸肽腺等。

试验仪器：AEG-220 型电子天平、pHS 一 3C 精密 pH 计、Waters-600 四元梯度洗脱泵、HWLC 电热恒温水浴锅、UV-160A 型紫外一可见分光光度计等。

1.2 方法

结合猪四肢骨处方与药理学相关的理论，确定骨肽基本性质，水煎煮是较为常见的提取手段，影响工艺技术应用效果的因素包括加水量、提取时间与提取次数，针对这三种因素形成正交试验方案，筛选与调整这三方面条件。骨多肽本身具有良好的抗炎应用效果，对关节炎有着突出的治疗效果，针对酒石酸锑钾带来的疼痛感也能够发挥镇痛的应用效果。骨肽溶液中最重要的成分是骨多肽，制备过程中多肽与总氮含量都必须保持较强的可靠性。因素水平表见表1。

表1 因素水平表

选定合适的去脂浓缩工艺，提取液中含有一定的脂肪成分，其并不会发挥出相应的药效，属于需要彻底去除的杂质，参考药理学理论可知，冷却脂肪类物质后，其会显示出析静止的特征，可调整温度，运用冷却静止的处理手段，静止时间约为36h，处理上层区域的脂肪，溶液的整体体积偏大，与药品的实际浓度存在突出的差异，必须继续浓缩处理工作。

选用合适的乙醇沉淀工艺手段，除杂处理环节中需应用醇沉法，完成提取液处理工作后，检查去脂浓缩的处理情况，检测猪骨含量是否达到3.0mg/ml的标准，继续运用精制醇沉处理技术，测得醇沉浓度数值分别为80%、70%与60%，完成醇沉任务后，可实施过滤处理工作，主要对多肽与氮总含量进行调整。考察多肽浓度与纯度方面的设计要求后，压缩处理对象的体积，其中猪骨含量增加到3.5mg/ml，进行检测工作，确定药液中的重要成分的浓度数值。

最后需完成吸附与超滤处理工作，利用滤纸来过滤滤液，添加活性炭，提升温度至100℃，加热时间大约为30min，而后可用特殊的布式漏斗展开过滤处理，根据滤液的情况来设定活性炭的具体应用量，及时增加注射用水量，检测多肽含量、澄清度等变动情况。吸附完毕，药品中的高分子物质数量缩减，在这种情况下需运用超滤技术来处理单分子物质，提升药品质量水平。

参照预实验，按1倍处方量称取猪骨1000g，共计九份。 根据表1，以 L 9 (34)正交表安排实验，合并提取液，滤过，滤液去脂，浓缩，加乙醇使含醇量达 70％，静置，取上清液，浓缩至每毫升含猪骨 3.0g，用稀盐酸调节 pH 为 4.0±0．1，100℃，加热 45min，滤纸过滤，除去酸性杂蛋白，收集滤液，0-4℃静止 24h 后过滤并用稀 NaOH 溶液调 pH 为（8.5±0.1），100℃下加热 45min，0～4℃静止 24h，滤纸过滤，滤液以稀盐酸调 pH 为7.0±0.1，0-4℃低温静止 24h 提取液滤纸过滤， 向滤液中按 0.5％比例加入活性炭，l00℃加热 30min，布氏漏斗过滤后补加注射用水至每毫升含猪四肢骨3.0g，10000Da 超滤膜超滤后收集滤液， 从中取小样检测，其余低温贮存待用。 按福林酚法测定其中的多肽含量，并记录。

2 结果

根据已确定的最佳工艺，按处方称取猪骨 10009，洗净、打碎、称重，加 2 倍量注射用水，1.2mpa 热压 1.5h，过滤，骨渣再加上述量注射用水，1.2mpa 压 1h，过滤，合并两次滤液后去脂、浓缩乙醇沉淀浓缩酸碱沉淀活性炭吸附超滤等工艺过程进行了三批样品的验证试验，结果见表2。

表2 试验结果表

试验结果表明，按优选的工艺重复 3 次试验，热压提取等工艺过程后多肽含量无明显差异，因此提取工艺比较成熟。 数据相对平行，工艺重现性良好。 可为下一步制剂成型工艺提供保证。

3 讨论

用正交设计优选了骨提取条件，通过水提取，浓缩，乙醇、酸、碱去杂蛋白，吸附和超滤过程得到骨提取物外观淡黄色，澄清发符合规定；pH7.04：多肽含量 17.lmg／ml；总氮含量 5.1mg／ml：无高分子量物质，无热源。 该工艺参数合理，产品质量稳定，工艺路线可行。

参考文献

[1]王振. 浅析注射用复方骨肽的制备工艺和质量[J]. 中国科技投资, 2017(1).

[2]苏艳颖. 注射用复方骨肽与抗炎药物配伍稳定性考察[J]. 航空航天医学杂志, 2017(8).

[3]舒文琳 , 苏志坚 . 注射用复方骨肽致过敏性休克[J]. 药物不良反应杂志, 2017.