三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的作用研究

三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的作用研究

陈华妹朱筑霞（通讯作者）

陈华妹朱筑霞（通讯作者）

（贵阳医学院生理学教研室贵州贵阳550004）

【摘要】目的探讨三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的作用。方法给予MCF-7/ADM细胞株三羟异黄酮处理，采用流式细胞仪检测对细胞周期和凋亡的影响，免疫印迹法检测对药耐药基因mdr-l表达的影响。结果三羟异黄酮处理后可增加细胞凋亡率并将细胞阻滞在G1期，且抑制效应呈浓度依赖的方式；三羟异黄酮处理可降低mdr-l的蛋白水平，且呈剂量依赖的方式。结论羟异黄酮可诱导人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM凋亡及细胞阻滞阻滞，可能与抑制mdr-l表达有关。

【关键词】三羟异黄酮；乳腺癌；MCF-7/ADM；耐药

【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）30-0137-02

化疗仍是晚期或无法手术乳腺癌的主要治疗方式，但化疗耐药严重限制了化疗效果，故逆转耐药有重要意义[1]。三羟异黄酮源于豆类植物，可降低肿瘤发病风险[2]，且本研究发现三羟异黄酮对乳腺癌耐药细胞中仍有较好的抑制效果，现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1流式细胞术

取处于对数生长期的MCF-7/ADM细胞接，种于24孔板中，分别给予20、50μg/mL三羟异黄酮处理，同时未加药的细胞为对照组，培养24h后用PBS洗涤2次，70%乙醇重悬细胞后固定，离心后加入100μl碘化丙啶，4℃避光放置30min，取200?l细胞样本液到进样管，上机检测处理后的细胞周期和凋亡情况。

1.2免疫印迹

按上述加药处理细胞48h后，收集细胞，用冷的PBS洗细胞三遍，冰上裂解30min，高速离心15min，取上清即为细胞总蛋白。根据测定浓度调整蛋白上样量，加入上样缓冲液混，进行常规10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，半干转法处理后，加入mdr-l一抗，4℃下孵育过夜，加入山羊抗小鼠IgG-HRP(稀释1：5000)，采用IPP软件分析各条带光密度，并计算与内参的比值。

1.3统计学分析

采用运用SPSS16.0软件分析。数据均以均数±标准差的形式表示，组间比较用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1细胞凋亡情况20、50μg/mL三羟异黄酮处理后的细胞凋亡率为（25.61±3.54）%、（45.77±6.25）%，均高于对照组的（5.47±0.64）%，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2细胞周期情况20、50μg/mL三羟异黄酮处理后的细胞周期分别如下：G0/G1期为（72.26±3.69）%、（79.61±4.25）%，S期为（14.52±1.16）%、（9.66±1.34）%，G2/M期为（18.64±2.56）%、（14.54±2.37）%，对照组的G0/G1、S和G2/M期的比例依次是（61.24±2.54）%、（17.54±2.06）%和（21.54±3.26）%，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.3mdr-l蛋白表达20、50μg/mL三羟异黄酮处理后的mdr-l蛋白水平为（0.41±0.02）、（0.16±0.05），均低于对照组的（0.74±0.06），差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

化疗耐药是乳腺癌化疗失败的主要原因，故逆转耐药成为肿瘤工作者急需解决的问题。三羟异黄酮是一种天然提取药物，具有多种抗肿瘤活性，推测对耐药也有较好的逆转作用。本研究采用常用的乳腺癌耐药株进行相关研究，发现三羟异黄酮可诱导其凋亡并导致细胞周期阻滞，提示该药物对乳腺癌耐药细胞株仍有抑制效果，表明其在逆转乳腺癌耐药上有较好的应用前景。由于该药为天然提取物，相对常规化疗药物，价格较低，可大大减轻肿瘤患者的负担。

耐药蛋白在介导化疗耐药中起到了重要作用，而mdr-l是研究较多的耐药蛋白，本研究发现给予三羟异黄酮处理后，细胞mdr-l的蛋白水平降低，提示该药物减少mdr-l的表达，对逆转肿瘤耐药及化疗增敏有重要意义。此外，有研究指出三羟异黄酮不仅可降低mdr-l的表达，还对其他介导耐药的蛋白有抑制作用，如HER2/neu[3]，提示该药物抑制耐药蛋白的表达可能是其逆转乳腺癌耐药的机制之一。三羟异黄酮用于乳腺癌化疗的另一个优势为其可降低常规化疗药物用量，达到减少化疗相关并发症的效果。

综上所述，三羟异黄酮可诱导人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM凋亡及细胞阻滞阻滞，可能与抑制mdr-l表达有关。

参考文献

[1]张志强，魏寅祥，赵青等.瓦他拉尼对乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药的逆转研究[J].中国药理学通报，2014，22(6):774-781，782.

[2]许峰峰，张继红，邓量等.PTEN基因表达变化在三羟异黄酮抑制肝癌增长中的作用[J].中华实验外科杂志，2011，28(11):1884-1886.

[3]王耕，黄韬，薛家鹏等.三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞mdr-1、HER2/neu表达的影响[J].华中科技大学学报（医学版），2011，40(5):589-592，610.