重度乳糜血样本对三种常见类型生化检测方法的影响杜伟

重度乳糜血样本对三种常见类型生化检测方法的影响杜伟

杜伟

绵阳市肛肠病医院检验科621000

[摘要]目的：探讨重度乳糜血样本在检测生化项目时对速率法、比色终点法以及透射比浊法所造成的差异。方法：随机选择外观正常的混合血清样本30份，每一份均分成A、B、C、D、E、F和G7个1mL血清的实验组以及1个对照组，实验组7个样本中分别加入10ul、20ul、40ul、80ul、160ul、320ul以及640ul的浊度逐渐增加的模拟乳糜血清样本。各个血清均进行葡萄糖（GLu）、尿酸（UA）、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、C反应蛋白（CRP）等作为代表的终点法、速率法以及透射比浊法三种常见反应类型生化项目的检测，检测后与对照组进行比较分析。结果：进行透射比浊法时实验组所有的生化项目与对照组均有较大的差异；比色终点法中除了GLu实验A、B两组与对照组差异较小外，其他均存在显著的差异；速率法中除了GGT实验B组和C组与对照组存在差异外，其他的均无差异。结论：在三种常规的检查方法中乳糜血对于速率法影响不大，但是对于比色终点法以及透射比浊法影响较大，在临床检查时候应该引起注意。

[关键词]重度乳糜血；速率法；比色终点法；透射比浊法

[abstract]objective:tostudytheseverechylebloodsamplesindetectingbiochemicalprojecttoendratemethod,colorimetricmethodanddifferencecausedbythetransmissionturbidimetry.Methods:randomlyselected30mixedserumsampleswithnormalappearance,eacharepidedintoA,B,C,D,E,FandtheG71mlserumofexperimentalgroupandAcontrolgroup,experimentalgroup7samplesrespectivelyadd10ul,20ul,ul,ul80ul,160,40320uland640ulturbiditychyleincreasingsimulationofserumsamples.Allserumglucose(GLu),uricacid(UA),aspartateaminotransferase(AST),c-reactiveprotein(CRP)asarepresentativeofthefinish,rateandtransmissionturbidimetrythreecommonbiochemicalreactiontypetestingoftheproject,comparedwiththecontrolgroupaftertestinganalysis.Results:duringthetransmissionturbidimetrytogroupallthebiochemicaleventshavebigdifferencewiththecontrol;ColorimetricmethodendexceptGLuexperimentinA,Btwogroupsandcontrolgroupdifferencesinsmaller,othersignificantdifference;GGTratemethod,inadditiontodifferencesbetweenexperimentalgroupBandCgroupandthecontrolgroup,theotherarenodifference.Conclusion:inthethreemethodsofroutinecheckchylebloodforratemethod,theimpactisnotbig,buttheendforthecolorimetricmethodandtheinfluenceontransmissionturbidimetry,andtheyshouldbeattentioninclinicalexamination.

[keywords]severechyleblood;Ratemethod;Colorimetricendpointmethod;Transmissionturbidimetry

随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的改变，高热量的食物摄入不断的增加，体育锻炼又未增强，没有养成良好的健康生活习惯，体重未严格控制，体重超标的人越来越多，使得越来越多的高脂蛋白血症患者出现；此外因为暴饮暴食或者其他相关的原因所导致的急性胰腺炎患者不断增加，从而出现了血脂一过急性升高[1,2]。该类的患者血清中主要为甘油三酯（TG）和胆固醇（CHO）为主的极低密度脂蛋白（LDL）和乳糜微粒(CM）。血清中以含甘油三酯为主的极低密度脂蛋白和乳糜微粒就会越高，因此许多学者通过测定甘油三酯(TG)来描述乳糜血的严重程度[3]。本次笔者随机选择900例高脂蛋白血症急性胰腺炎（HLAP）患者的血清进行去除乳糜微粒研究，经过检测甘油三酯(TG)的浓度在10-40mmol/L之间的HLAP患者占比为70%以上，因此临床上重度乳糜血样本的患者并不是少见。当甘油三酯（TG）水平>4.0mmol/L时，血清外观可呈现不同程度的浑浊，脂浊可散射光线对吸光度产生正干扰，导致某些结果升高，从而对检测结果造成影响，延误对患者的诊断治疗。因此本次为探究重度乳糜血样本对比色终点法、速率法以及透射比浊法所造成的差异，为指导临床检测工作而进行以下研究。

1.资料与方法

1.1资料来源

选择2016年1月至2017年1月期间在我院健康体检25岁至66岁的健康体检者300例，随机收集外观正常的血清样本30人,并混合成30份样本,外观正常指样本肉眼观察无溶血、无黄疸以及无脂血的样本。

1.2方法

1.2.1检查仪器和检测试剂

检测的仪器为东芝（TOSHIBA-40FR）全自动生化仪，浙江康特生物科技有限公司提供检测葡萄糖（GLu）、尿酸（UA）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、载脂蛋白A1（ApoA1）、β2微球蛋白（β2-MG）等的检测试剂；深圳锦瑞生物科技有限公司提供C反应蛋白（CRP）的检测试剂。为了避免试剂以及样本的空白影响本次的实验我们均使用液体双试剂，使用双波长测定并且在仪器上直接设置扣除空白的程序。脂肪乳液为广州百特侨光医疗用品有限公司生产的中/长链脂肪乳注射液。

1.2.2生化反应的类型以及检测项目

对于文本的检测方法为比色终点法、速率法以及透射比浊法。比色终点法的代表选择为葡萄糖（GLu）、尿酸（UA）以及总胆红素（TBIL)；速率法的代表为天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、r-谷氨酰基转移酶(GGT)以及乳酸脱氢酶（LDH）；透射比浊法的代表为C反应蛋白（CRP）、载脂蛋白A1（ApoA1）以及β2微球蛋白（β2-MG）。

质控品为RANDOX复合质控品level-2以及level-3；CRP和β2-MG的质控品为SIEMNS比浊专用质控品。

1.2.3检测方法

将脂肪乳注射液用生理盐水进行稀释，然后上机测定TG的浓度，从而获得脂肪乳TG的原始最大浓度约为440moml/L。混合血清样本30份样本，每一份分成A、B、C、D、E、F、G等7个实验组以及1个对照组，每一份取1mL备用。实验组7个样本中分别加入10ul、20ul、40ul、80ul、160ul、320ul以及640ul的浊度逐渐增加的模拟乳糜血清样本。所有的样本均进行三类检测，然后最终的结果扣除加入的脂肪乳液的体积，转换成1mL血清物质进行计算。同时也测定每一份样本中TG的最终浓度，对照组的TG平均浓度为0.78mmol/L，A-G实验组的TG浓度分别为4.26mmol/L、8.04mmol/L、14.56mmol/L、25.13mmol/L、44.12mmol/L、76.90mmol/L、137.80mmol/L，呈递增式由轻度向重度乳糜。采用RANDOX复合质控品level-2以及level-3两个水平质控品监控，检测在3小时内完成。

1.3统计分析

所有的数据均纳入统计分析软件SPSS22.0中进行比较，计量资料之间的分析采取t检验，计数资料之间的比较采取卡方检验，经过检验分析后P＜0.05表示差异显著具有统计学意义。

2.结果

从D组开始仪器显示有些项目不能进行检测，D组不能检测的项目为AST、GGT、CRP、UA以及β2-MG，F组不能检测的项目为UA、AST、GGT、LDH、CRP、β2-MG以及Apo-A1，G组除了TG能够检测，其他所有项目均不能检测。在进行透射比浊法检测时结果显示所有的生化项目实验组和对照组均存在显著的差异（P＜0.05）具有统计学意义；比色终点法中除了GLu实验组A、B组和对照组差异不显著以外（X2=0.01，P=0.071＞0.05），其他的组别均与对照组存在较大的差异（P＜0.05）具有统计学意义；速率法中GGT实验组B、C两组与对照组有显著的差异（P＜0.05），其他组均无法进行检测，无统计学意义。具体的结果见表1。

表1各实验组与对照组比较

注:“--”表示该实验组该项目不能进行正常检测，即生化仪器显示吸光度异常，提示报警信息或者甚至为负值无法完成该项目的测试。

3.讨论

随着我国医疗技术的突飞猛进，医院设备发展也在不断更新，现在医院检验科一般使用全自动生化分析仪进行生化项目的检测,并根据最终检测的物质分为比色法以及比浊法,其中比色法包括了终点法以及速率法；比浊法包括透射法以及散射法.散射法需要特殊的仪器进行检查,因此不常使用.在分光光度计的检查中乳糜液的波长为300-600nm之间,一般分光光度法检查的波长为340-700nm之间，因此绝大多数的乳糜液吸收波长均与光重叠，虽然采取空白扣除法以及双试剂法一定程度可以避免影响，但是只适用于轻度乳糜的样本[4,5]。随着乳糜浊度增加，本底所带来的吸光度以及透射光度的增加或者减小会远远大于生化反应所带来的△A的变化，因此△A的值无法准确的测定，所以中度乳糜对于分光光度法的影响比较大。但不同类型的分光光度法生化反应所受到的影响程度不一样[6，7]。本次我们对三种常见的生化检测方法进行分析，结果发现速率法的三个项目表现出比较强的乳糜抗干扰，特别是LDH，在D组乳糜液中还能够准确的检测出来，并且与对照组无差异；比色终点法GLu以及TBIL可以检测到F组，但是除了GLu的A、B两组与对照组差异较小外，其他的均存在较大的差异，因此抗干扰能力比较弱。虽然速率法可以检测的项目比较少，但是检测出来的数值除了个别的与对照组具有差异外，其他的均不明显，说明了其受乳糜液的影响比比色终点法以及透射比浊法小。因此，经过本次实验的分析我们认为：在三种常规的检查方法中乳糜血对于速率法影响不大，但是对于比色终点法以及透射比浊法影响较大，在临床检测时候应该引起高度注意。在临床工作中如果患者输入脂肪乳后的6小时内或餐后尤其是高脂、高蛋白饮食后不应急于采取样本进行检测，建议患者清淡饮食三天后空腹采集样本才能进行生化项目检测，以确保检测结果的真实性、准确性，为临床医生提供有诊断价值的检验报告。

参考文献

[1]王霞，潘彤，李红珠，等．聚乙二醇消除乳糜血干扰ALT检测的实验研究EJ3．中国输血杂志，2014，27(9)：956-958．

[2]孙诚谊，潘耀振．高脂血症性急性胰腺炎的发病机制及诊疗进展[J]．世界华人消化杂志，2008,16(4):343-349.

[3]王长秀.320例无偿献血者重度乳糜血分析[J].长江大学学报，2012,9（2）:41-42.

[4]张淑文．应用二点终点法消除乳糜血对血清总蛋白测定的干扰［J］．检验医学，2004,19(1):65-66.

[5]石红梅，张英兰，侯小红．外观异常的血清标本对生化结果的影响[J]．实用医技杂志,2013,10(12):466.

[6]李贵星，李萍，徐克和．全自动生化分析仪参数设置的体会[J]．华西医学，1998,13(3):311-312.

[7]张辉亮，黄树华，刘健玲.重度乳糜血标本对三种常见类型生化检测方法的影响[J].现代检验医学杂志，2015,30（1）:128-129.