RP-HPLC法测定烟叶中的茄尼醇含量

RP-HPLC法测定烟叶中的茄尼醇含量

冷红琼方娜谢望时徐文秀郭亚东

冷红琼方娜谢望时徐文秀郭亚东

（昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500）

【摘要】实验采用反相高效液相色谱法，以甲醇-乙醇（75:25）混合溶剂做流动相，流速1.0mL/min，用PDA检测器于211nm处测定了烟叶原料及国内外烟草制品中茄尼醇的含量。方法的精密度为1.16%,回收率为94.3%～103.3%，RSD%为2.89%，茄尼醇进样量为0.05～1.00ug时，峰面积与进样量之间有良好的线性关系，相关系数为0.9999。

【关键词】反相高效液相色谱法茄尼醇烟叶

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）16-0393-02

茄尼醇（Solanesol）化学名九聚异戊二烯醇，主要存在于茄科植物中，尤其在烟草中的含量较大[1]，其结构式见图1。因茄尼醇含有多个非共轭双键，对自由基的吸收性能非常强烈，不仅能够抗菌、消炎、止血，还是合成维生素K2和治疗心血管疾病、抗癌、抗溃疡等药物（如辅酶Q10）的主要中间体[2-4],将含长链烯基的茄尼醇连接在药物上（如抗癌药SBD），可使其获得优良性能[5]，还可以作为抗溃疡药物、抗癌药物的重要合成原料。茄尼醇是烟草中重要的萜类化合物之一，其与卷烟主流烟气中苯并[α]芘的形成有关，备受烟草行业降焦减害研究者的关注。茄尼醇裂解过程中能产生柠檬烯（limonene）、法尼醇(fanesol)、3-羟基-2-丁酮(acetoin)等多种影响烟草吸味的香味成分[6]。

本文研究了运用反相高效液相色谱法测定烟叶中茄尼醇的含量，该方法操作简便，结果准确，基线平稳，保留时间合适，分离度好，可用于测定烟叶原料和烟草样品中茄尼醇的含量。

图1茄尼醇结构式

1材料与方法

1.1仪器与试剂

Waters2690型高效液相色谱仪，包括泵,自动进样器,柱温箱,waters996PDA检测器，色谱工作站和Millinum32软件，T6328B型万分之一电子天平（上海），超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。

甲醇为色谱纯（美国TEDIA公司，≥99.9%)；乙醇为色谱纯（美国TEDIA公司，≥99.9%)；茄尼醇标准品(阿拉丁，CAS:13190-97-1，纯度为97%)。

1.2色谱条件

色谱柱watersC18(4.6mm250mm,5μm)，以甲醇-乙醇（体积比为75:25）为流动相，流速：1.0mL/min,检测波长：211nm,进样量10μL。

1.3实验方法

1.3.1对照品溶液配制

精密称取茄尼醇标准品5.0mg,置于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,得质量浓度为500μg/mL的标准储备液。精密量取1mL标准储备液于10mL容量瓶中，即得50μg/mL的二级标准溶液。

1.3.2供试品溶液配制

准确称取0.05g烟末于100mL磨口锥形瓶中,加入20mL甲醇,盖上磨口塞，置于超声波清洗器中超声15min,经0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2结果与讨论

2.1流动相的选择

实验过程中分别分别考察了甲醇-乙醇、甲醇-乙腈、乙醇-乙腈三种流动相系统,结果表明:甲醇-乙醇的体积比为75：25时,得到的HPLC色谱图具有较好的分离度，峰形较好且保留时间合适。

2.2检测波长的选择

分别以200、205、211和220nm4个波长进行检测,发现200nm波长处有最大吸收，但检测时噪音较大；211nm波长检测效果最佳,茄尼醇峰几乎不受溶剂以及杂质的干扰,故选择211nm作为检测波长。在选定的色谱条件下,茄尼醇对照品色谱图见图2，供试品色谱图见图3。

2.5精密度试验

取对照品溶液按上述色谱条件,重复进样5次,每次进样10μL,记录茄尼醇的峰面积,结果得出茄尼醇峰面积的RSD为1.16%。表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验

精密吸取同一茄尼醇供试品溶液进样10μL,每2h进样1次,进样6次,测定茄尼醇峰面积,结果显示茄尼醇峰面积的RSD为2.81%(n=6)，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.7重复性试验

取同一样品5份，制备供试品溶液，每次进样10μL进行检测。结果表明茄尼醇峰面积的RSD为3.56%，表明该方法具有良好的重复性。

2.8样品的测定

表2列出了烟草原料及烟草制品茄尼醇含量的测定结果。茄尼醇含量与烟叶产地、气候、等级和部位关系密切。对于同一产地同一品种的烟叶,烟叶中茄尼醇的含量从上至下呈下降趋势。如云南玉溪的烟叶,上部烟叶的茄尼醇含量高于1.20%,中部烟叶的在0.94%～1.08%之间,下部烟叶的低于0.78%。烟叶中茄尼醇含量可作为烟叶等级分类的一个重要指标。实验考察了过滤嘴型、混合型、烤烟型卷烟中茄尼醇的含量，结果表明国内外同一类型的卷烟茄尼醇含量存在差异性。如瑞士过滤嘴型香烟相对于陕西和云南的过滤嘴型香烟茄尼醇含量较高，高达0.95%。国内外不同类型的烟草制品茄尼醇含量在0.60～0.95之间，烟草原料在加工成为烟草制品过程中可能会造成茄尼醇含量下降。

表2烟草中的茄尼醇含量

类型产地样品含量/%

云南玉溪B11.27

云南玉溪B21.20

云南玉溪B31.25

云南玉溪C10.94

烟草原料云南玉溪C20.95

云南玉溪C31.08

云南玉溪X10.77

云南玉溪X20.68

云南玉溪X30.78

瑞士过滤嘴型0.95

陕西过滤嘴型0.75

云南过滤嘴型0.65

德国混合型0.84

烟草制品美国混合型0.73

上海混合型0.71

新加坡烤烟型0.60

上海烤烟型0.66

河北烤烟型0.80

注:B、C和X代表烟叶在植株上的生长部位,B为上部,C为中部,X为下部;1、2和3代表植株的编号。

3结论

采用反相高效液相法测定烟叶中的茄尼醇较为简便，峰形对称，分离度较高，测定结果精密度和准确度高，适于测定烟叶原料及各种烟草制品中茄尼醇的含量。

参考文献

[1]TangDS,ZhangL,ChenHL,etal.Extractionandpurificationofsolanesolfromtobacco(I).Extractionandsilicagelcolumnchromatographyseparationofsolanesol[J].SepPurifTechnol,2007,56:291-295.

[2]武永昆,张征,林军，等.反相高效液相色谱法测定烟叶中茄尼醇的含量[J].云南民族大学学报（自然科学版）,2005,14(3):275-277.

[3]胡伟,何洪城,谭利娟.废次烟草中有效成分研究进展[J].湖南林业科技,2005,32(5):83-85.

[4]夏薇,俞迪虎,陈新志.废次烟叶浸膏中茄尼醇的提取[J].中国医药工业杂志,2003,34(7):328-329.

[5]刘快之,李德亮,陈伯森,等.薄层分离-库仑滴定法测定茄尼醇[J].分析化学,1999,27(1):34-37.

[6]黄翼飞,李峰,马青,等.液相色谱-大气压化学电离离子阱质谱法测定烟草中的游离茄尼醇[J].分析实验室,2009,28(11):84-87.

基金项目：昆明医科大学药物分析精品课程项目支助。