高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量分析

高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量分析

吴佳佳周晓慧

吴佳佳周晓慧

(南方医科大学附属南方医院510515)

【摘要】目的:在高效液相梯度洗脱法建立的同时，测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量，即甲硝唑、诺氟沙星、丙酸倍氯米松含量。方法：采用高效液相梯度洗脱法，色谱柱为KromasilC18柱(4.6mmx250mm,5μm)；流动相为甲醇-已腈0.025mol/L-1的磷酸溶液注射用水(pH3.0)；流速为0.7mL/min-1；检测波长为241nm；柱温为室温；进样量为20μL。结果：3组分的线性范围为：甲硝唑15.2-152.0μg/mL-1、诺氟沙星15.1-151.0μg/mL-1、丙酸倍氯米松2.5-25.0μg/mL-1；平均回收率：甲硝唑99.60%、诺氟沙星99.49%、丙酸倍氯米松99.46%；RSD：甲硝唑0.77%、诺氟沙星0.80%、丙酸倍氯米松0.91%。结论：高效液相梯度洗脱法测定复方诺氟沙星滴耳液，简便快捷，准确度高，适合临床推广。

【关键词】高效液相梯度洗脱法复方诺氟沙星滴耳液诺氟沙星甲硝唑丙酸倍氯米松

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）18-0280-02

复方诺氟沙星滴耳液应用到临床，可有效治疗中耳炎与外耳道炎，其有效成分主要为诺氟沙星、丙酸倍氯米松与甲硝唑。在相关诺氟沙星滴耳液的文献报道[1]中，鲜少见到测定该制剂主要组成成分含量方法的报道。因此，笔者采用高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量来针对性的研究分析，报道如下。

1资料与方法

1.1基本资料

仪器采用的是Ultimate3000高效液相色谱仪，HS-2060-超声仪与岛津AEU-210的电子天平。药品对照选用：批号为130450-200304的含量为97.8%的诺氟沙星、批号为100191-200305的甲硝唑、批号为100119-200603的丙酸倍氯米松。另外选用批号为080726的复方诺氟沙星滴耳液，色谱纯的甲醇、三乙胺和已腈，注射用水，分析纯等。

1.2方法

1.2.1系统适用实验

条件：色谱柱为KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇-已腈0.025mol/L-1的磷酸溶液注射用水(pH3.0)；流速为0.7mL/min-1；检测波长为241nm；柱温为室温；进样量为20μL。在甲硝唑、诺氟沙星与丙酸倍氯米松保留时间的地方，若杂质没有被吸收，则表明实验样品中辅料和溶剂峰是不干扰主药峰的，相互分离度皆大于1.5[2]。

表1流动相梯度洗脱程序

1.2.2对照溶液制备

称取对照品诺氟沙星60.4mg和甲硝唑60.1mg于10mL量瓶内，然后加5mL0.1mol/L的盐酸溶液，采用超声将之溶解后加水，稀释至刻度处，命名为对照品的贮备液Ⅰ。称取对照品丙酸倍氯米松10.1mg于10mL量瓶内，然后加甲醇溶液进行稀释，至刻度处，命名为对照品的贮备液Ⅱ。之后，取对照品的贮备液Ⅰ和Ⅱ各5mL于同一100mL量瓶内，摇匀并稀释至刻度处，作混合对照溶液[3]。

1.2.3考察线性关系

分别取混合对照溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、50mL分置于10mL的量瓶内，摇匀并稀释至刻度，得到对照品的一系列溶液。而后分别取20μL上述的不同溶液注入到液相色谱仪内并记录色谱图。以峰面积对浓度做线性回归。

1.2.4精密度实验

取浓度为60μg/mL的诺氟沙星对照品溶液，在连续进样6次后，测定峰面积。

1.2.5稳定性实验

取试品溶液在0h、2h、4h、6h、8h、10h时各进样20μL并测诺氟沙星、丙酸倍氯米松与甲硝唑的峰面积。

1.2.6重复性实验

取6份批号为080924的样品，按照含量测定项下的方法测定诺氟沙星、丙酸倍氯米松与甲硝唑的含量。

1.2.7样品含量测定

取样品1mL于50mL的量瓶内，稀释并摇匀，后用孔径为0.45μm的滤膜做滤过。取20μL注入到液相色谱仪内，并记录诺氟沙星、丙酸倍氯米松与甲硝唑的峰面积[4]。

表2样品测定结果(%)

1.2.8回收率实验

取批号为080924的9分样品1.0mL，分别放于9个50mL量瓶内，再分别量取4mL、5mL、6mL混合对照品的溶液，放到上述的量瓶内，稀释到刻度并摇匀，以样品含量测定的方法测定。再分别取上述各溶液20μL，注入到液相色谱仪内，记录色谱图并计算回收率。

2结果

3组分的线性范围为：甲硝唑15.2-152.0μg/mL-1、诺氟沙星15.1-151.0μg/mL-1、丙酸倍氯米松2.5-25.0μg/mL-1；平均回收率：甲硝唑99.60%、诺氟沙星99.49%、丙酸倍氯米松99.46%；RSD：甲硝唑0.77%、诺氟沙星0.80%、丙酸倍氯米松0.91%。

3讨论

在流动相选择方面，笔者对比与参考文献资料[4]，经多次实验后确定选择表1的条件，所得结果表明朱峰的峰形、其峰与峰之前的分离效果是良好的。

在溶剂的选择方面，在考虑难易溶性的前提下进行选择，选择流动相组中，A与C各比例配伍中的1:1等分配伍作为稀释配伍，所得结果没有出现沉淀。在检测波长选择上，为了减少实验误差，而将实验中检测波长确定在241nm。

总之，高效液相梯度洗脱法测定复方诺氟沙星滴耳液，简便快捷，准确度高，适合临床推广。

参考文献

[1]冀满丰.高效液相色谱-梯度洗脱法测定恩替卡韦分散片的含量和有关物质[J].中国药业,2012,09(13):26-27.

[2]吴德海,杨仕林.七叶神安片中人参皂苷Rb_3含量的反相高效液相梯度洗脱法测定[J].时珍国医国药,2012,07(34):1818.

[3]万芳友.高效液相色谱梯度洗脱法同时测定复方间苯二酚乳膏中两组分含量[J].中国药学杂志,2012,15(11):1254-1256.

[4]熊苗苗,汪秋兰,谢斌,王文清,方建国.高效液相梯度洗脱法测定阿托伐他汀钙片有关物质[J].医药导报,2013,05(23):656-660.