ATP生物发光法在饮用水和再生水活菌生物量快速检测中的应用

ATP生物发光法在饮用水和再生水活菌生物量快速检测中的应用

刘静波

哈尔滨市城市排水监测站

摘要:目的探索利用三磷酸腺苷(ATP)生物发光法快速检测生活饮用水菌落总数的可行性。方法利用生物发光法快速检测细菌中ATP量，根据细菌中ATP量与菌落总数成正比的关系，推算生活饮用水中菌落总数，并与国标平皿计数法进行对比，分析2种检测方法的相关性和一致性。结果ATP生物发光法与国标平皿计数法结果在一定范围内呈正相关(r2=0．804，P＜0．05)。ATP生物发光法快速检测生活饮用水定性结果的总体准确率达94．9%。结论ATP生物发光法具有灵敏、便捷以及相对准确等优点，可用于生活饮用水卫生监督中菌落总数的快速筛检。

关键词:三磷酸腺苷;生物发光;饮用水;菌落总数;相关性

在生活用水监测指标当中，水中菌落总数是非常重要的一项内容，其直接体现水内细菌数量以及污染程度。现在我们主要采用的检定方法为平皿计数方法，这种方法要用37℃的温度来进行恒温培养48小时，不仅耗时长，同时操作难度较高，检测效率低下，这就需要我们提出一套高效、快速的菌落检定方法。现在通过ATP发光微生物来进行检测的技术已经越来越成熟，其不需要培养，仅仅需要采用富集技术。使用这种方法可以迅速检测饮用水卫生情况，整个过程完成的时间在10分钟以内，并且也给生活饮用水的卫生监督提供了可靠的技术支持。

1材料与方法

（一）检测方法

（1）国标采样和检验方法

采样方法为GB/T5750．2－2006《生活饮用水标准检验方法》，检验依据为GB/T5750．12－2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》。

（2）生物发光法采样和检验方法

①仪器校准

采样前用无菌蒸馏水测试ATP生物荧光检测仪器的发光本底值，当仪器显示为“0”后进行下一步;若显示不为“0”，进行仪器自身校准。

②样品准备

用无菌镊子、乙醇棉球消毒采样水龙头，打开水龙头放水5min。用无菌采样瓶采集水样500ml;取出备用50ml一次性注射器、内置0．45μm滤膜的过滤器和ATP检测拭子，将ATP生物荧光检测仪预先开机进行自检60s;用注射器吸取50ml待检水样，缓缓注入滤器。

③样品采集

打开过滤器，拔出表面检测拭子，将内置的棉签倾斜45°左右，边旋转边涂抹采样，使滤膜表面得到充分涂抹;重新将检测拭子插回拭子管，将其顶部易折阀折断，并挤压拭子上端二三次，确保反应液流出。

二、结果

（一）大致情况

本次水源来自于某住宅小区内的自动售水机，经过ATP生物发光检测后，水质合格率大约为84.3%，如果按照国标法来进行检测，其合格率也为89.4，二者相差不大，和国标检测方法相比，ATP检测方法的准确率达到了94.9%。具体情况如表1所示。

图12种方法菌落总数定量检测结果的相关性

三、结论

经过前文总结，我们不难发现，菌落总生物发光检测这种方法的优势非常明显，其灵敏比原有的方法高很多，甚至可以达到10mol/L的等级。这种检测方法速度很快，可以在几分钟内完成，所以采用atp来进行检测，有成为主流检测方法的条件。经过本次研究可以证明，atp生物发光法的检测结果和国际通行的平皿计数法相关性较强，其优势在于检测时间短，仪器携带也较为便利，取样检测操作简单，而后者缺点则在于耗时长久、操作繁琐、难以进行现场勘测，无法适应于现阶段的检测工作。

但我们也应该看到，ATP生物发光法这种检测方式也会受到很多外界因素的影响，注入温度、pH值等等，所以为了避免这些因素的干扰，应该采取必要的手段。

参考文献:

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[4]韩文艳.ATP生物发光检测法应于透析液微生物检测的探索[J].中国医疗器械信息,2015(3Z):331-331.