锌指蛋白转录因子Snail沉默对宫颈癌Hela细胞侵袭的影响

锌指蛋白转录因子Snail沉默对宫颈癌Hela细胞侵袭的影响

王森1张贺2许忆恩1赵经哲1郭燕娴1欧阳

（1广东医科大学基础医学院广东东莞523808）

（2广东医科大学公共卫生学院广东东莞523808）

（3广东医科大学广东省分子诊断重点实验室广东东莞523808）

【摘要】目的：探讨Snail对Hela细胞侵袭的作用。方法：采用Hilymax法进行细胞转染，RT-qPCR法检测mRNA表达，Westernblot检测蛋白表达，Transwell小室检测细胞侵袭。结果：与对照组相比，干扰组SnailmRNA表达下降约72.3%(P<0.01)；Snail蛋白水平下降约54.2%（P<0.05）。在24h，48h，72h，干扰组较对照组细胞侵袭能力下降,其抑制率约为17.6%（P<0.05），31.5%（P<0.01），36.1%（P<0.05）。结论：Snail下调可显著抑制Hela细胞的侵袭能力。

【关键词】Snail；宫颈癌；侵袭

【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）07-0267-02

【Abstract】ObjectiveToexplorewhetherSnailinfluencesHelacellinvasion.MethodsHilymaxwasusedforcelltransfection.RT-qPCR,WesternblotandTranswellwereformRNAdetection,proteindetectionandcellinvasion,respectively.ResultsSnailmRNAwasdownregulated72.3%whiletheproteinwasabout54.2%(P<0.05).Thecellinvasionwasinhibited17.6%(P<0.05),31.5%(P<0.01),36.1%(P<0.05)at24h,48h,72h,respectively.ConclusionDownregulationofSnailcouldinhibitHelacellinvasion..

【Keywords】Snail;Cervicalcancer;Invasion

宫颈癌是威胁女性健康的常见的恶性肿瘤[1]，患者的死亡往往与肿瘤复发转移有关。Snail是促进肿瘤转移的重要分子，本研究探讨了Snail对宫颈癌细胞侵袭的影响，为防治肿瘤转移提供新靶点。

1.方法

Hela细胞为本实验室保存。细胞培养用DMEM培养基及血清购自Gibco公司。实验分为对照组及干扰组。采用同仁化学Hilymax法进行细胞转染，RT-qPCR法测mRNA表达，Westernblott测蛋白表达，Transwell小室检测细胞侵袭。其中，SnailRNA干扰序列为：5-GCGAGCUGCAGGACUCUAA-3。Snail引物：F:5-CGCGCTCTTTCCTCGTCAG-3，R:5-TCCCAGATGAGCATTGGCAG-3。使用同仁化学Hilymax转染质粒，质粒与Hilymax比例为3ug/12uL。Trizol法提取总RNA，反转录为cDNA，而后进行qPCR扩增。数据统计采用SPSS13.0分析。

2.结果

2.1首先，我们干扰了宫颈癌细胞中Snail的表达，结果表明，与对照组相比，在48h，干扰组Snail蛋白表达下降约54.2%（P<0.05）(图A)；与对照组相比，干扰组SnailmRNA表达下降约72.3%(P<0.01)(图B)。这些结果表明成功干扰Snail的表达。

2.2其次，我们检验了干扰Snail后细胞侵袭能力的改变。结果发现，与对照组相比，干扰组细胞穿出数量和比例均下降，随着时间延长，细胞侵袭抑制率增加。干扰组细胞侵袭抑制率约为17.6%（P<0.05），31.5%（P<0.01），36.1%（P<0.05）(图C)，时间点分别对应为24h，48h，72h。这些结果提示，Snail下调可显著抑制Hela细胞的侵袭能力，提示Snail对宫颈癌细胞侵袭转移具有重要作用。

3.讨论

目前研究表明，Snail高表达与肿瘤的复发和快速转移密切相关[2]，该基因属于锌指蛋白转录因子家族，可以结合到DNA位点发挥调节基因转录的功能，如锌指蛋白Zeb-1，Snail等，二者的锌指结构可以识别它们各自靶位点的E-box及类似序列，进而调控E-cad等的表达。而后者表达下调促进细胞侵袭转移。本研究干扰宫颈癌Hela细胞Snail表达，检测显示其mRNA及蛋白表达均显著下降，并且干扰组Hela细胞的侵袭能力受到明显抑制。因此，Snail是一个有着良好应用前景的宫颈癌防治靶点。

【参考文献】

[1]刘帅斌，胡丽娜.肿瘤微环境与宫颈癌的研究进展[J].实用妇产科杂志，2014，30(8)：585-587.

[2]张儒英，乔惠珍，宋静慧.Snail、E-cadherin和N-cadherin在宫颈癌中的表达及相关性研究[J].中国妇产科临床杂志，2011，12(4):284-286.

（本课题由广东省科技计划项目（2016A020215147，2013B021800062），东莞市社会发展重点项目（2013108101051）和广东省卫生厅医学科研基金项目（A2016208，B2013293）资助。）